分子生物学实验
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学是一门在微观层面研究生物大分子结构与功能的科学，而分子生物学实验则是探索生命奥秘的重要手段。
通过一系列精确设计的实验操作，我们能够揭示基因的表达、遗传信息的传递以及生物体内各种分子的相互作用。
在分子生物学实验中，有几个关键的技术和方法常常被运用。
其中之一就是核酸提取技术。
核酸，包括 DNA 和 RNA，是携带遗传信息的重要分子。
要对其进行深入研究，首先就得有效地从细胞或组织中提取出来。
这可不是一件简单的事情，需要小心翼翼地操作，以避免核酸的降解和污染。
比如说，提取 DNA 时，通常会先将细胞破碎，使细胞核内的 DNA 释放出来。
然后，通过加入各种试剂，去除蛋白质、脂质等杂质，最后得到纯净的 DNA 溶液。
这个过程中，每一步所使用的试剂浓度、温度和反应时间都需要严格控制。
RNA 的提取则更为棘手，因为 RNA 很容易被环境中的 RNA 酶降解。
所以，实验过程中要使用无 RNA 酶的试剂和器材，操作也要尽可能迅速。
另一个重要的技术是 PCR 扩增，也就是聚合酶链式反应。
这就像是一个神奇的魔法，能让我们把微量的 DNA 片段大量复制。
想象一下，我们手里只有一点点 DNA 样本，但是通过 PCR 技术，就能够在短时间内获得足够多的相同 DNA 片段，用于后续的分析和研究。
PCR 反应需要特定的引物，这些引物就像是导航仪，告诉聚合酶从哪里开始合成新的 DNA 链。
反应还需要精确控制温度的循环变化，包括高温变性、低温退火和适温延伸这几个步骤。
在分子生物学实验中，还有一项常用的技术是电泳。
这就好比是一场分子的赛跑比赛。
我们把 DNA 或蛋白质样品放入凝胶中，然后通电，由于分子的大小和电荷不同，它们在电场中的移动速度也不一样。
这样，我们就能根据它们移动的距离和位置来分析样品的特性。
比如说，DNA 电泳可以帮助我们判断 DNA 片段的大小，看看有没有我们想要的那个片段。
蛋白质电泳则能让我们了解蛋白质的分子量、纯度等信息。
分子生物学实验方法
分子生物学实验方法1.DNA提取与纯化DNA提取是分子生物学实验中最常用的技术之一，用于从不同种类样本中提取纯化DNA。
常见的提取样本包括细菌、动植物组织以及人体样本。
提取过程通常包括细胞破碎、蛋白质除去、DNA溶解和纯化等步骤。
常用的提取方法包括酚/氯仿提取法、CTAB提取法和商业化提取试剂盒。
2.PCR（聚合酶链反应）PCR是一种高效扩增DNA的技术，可将一小段目标DNA序列扩增成数百万个拷贝。
PCR反应通常包括DNA模板、两个引物、dNTPs（四种核苷酸单元）和DNA聚合酶等成分。
反应的核心步骤是多个高温循环，包括变性（解开DNA的双链）、退火（引物结合到目标序列）和延伸（DNA聚合酶合成新链）等步骤。
PCR广泛应用于分子克隆、基因表达研究、疾病诊断等领域。
3.转染和转化转染和转化是将外源DNA导入宿主细胞中的技术。
转染是指将DNA导入非真核细胞（如细菌）或真核无性细胞中，常用的方法包括电穿孔法、化学法和病毒载体介导等。
转化是指将外源DNA导入真核多细胞直至整个个体范围内，常见的方法包括冷冻转化、冲击转化和基因枪法等。
4.蛋白质表达和纯化蛋白质表达和纯化是研究蛋白质结构和功能的关键步骤。
常见的表达系统包括细菌系统（如大肠杆菌）、酵母系统（如酵母菌）和哺乳动物细胞系统（如CHO细胞）。
表达后，蛋白质需要经过多个步骤进行富集和纯化，如离心、柱层析和亲和层析等。
以上仅是分子生物学实验方法中的一部分，随着技术的发展，分子生物学实验方法也在不断更新和扩展。
这些实验方法在疾病诊断、基因工程、生物学研究等领域发挥了重要作用。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验方法与步骤【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版分子生物学实验方法与步骤表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。
强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS 结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。
采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。
因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。
二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室温。
2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0：Tris 18.17g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至8.0,定容至100ml。
3、1M Tris-HCl(pH 6.8：Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8,定容至100ml。
4、10% SDS：电泳级SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,浓盐酸调至pH 7.2,定容至100ml。
5、10电泳缓冲液(pH 8.3：Tris 3.02 g，甘氨酸18.8 g，10% SDS 10ml加ddH2O溶解, 定容至100ml。
6、10%过硫酸铵（AP）： 1gAP加ddH2O至10ml。
7、2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl (pH 6.82.5ml，-巯基乙醇1.0ml，SDS 0.6 g，甘油2.0ml，0.1%溴酚兰1.0ml，ddH2O 3.5ml。
8、考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰0.25 g，甲醇225ml，冰醋酸 46ml，ddH2O 225ml。
9、脱色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以3∶1∶6配制而成。
二、操作步骤采用垂直式电泳槽装置（一）聚丙烯酰胺凝胶的配制1、分离胶(10%的配制:ddH2O 4.0ml30%储备胶 3.3ml1.5M Tris-HCl2.5ml10% SDS 0.1ml10% AP 0.1ml取1ml上述混合液,加TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺10μl 封底,余加TEMED4μl ,混匀后灌入玻璃板间，以水封顶，注意使液面平。
常见分子生物学实验方法
常见分子生物学实验方法1.DNA/RNA提取DNA和RNA提取是进行分子生物学实验的第一步。
常见的提取方法包括酚/氯仿法、离心法、基于载体的提取等。
这些方法可以从细胞、组织或血液中提取出高质量的DNA或RNA用于后续实验。
2.PCR扩增聚合酶链反应（PCR）是一种常用的体外DNA扩增技术，用于复制特定DNA片段。
通过PCR，可以从少量的DNA样本中扩增目标序列，并与特异性引物一起进行扩增。
PCR具有高度特异性和灵敏度，广泛应用于基因克隆、基因检测和定量分析等领域。
3.基因克隆基因克隆是指将特定目标基因从一个有机体中分离并插入到另一个有机体中。
常见的基因克隆方法包括限制性内切酶消化、连接、转化、筛选等。
基因克隆可以用于生成重组DNA、构建表达载体、设计并构建突变基因、重组蛋白质等。
4.蛋白质表达和纯化蛋白质表达和纯化是研究蛋白质功能和结构的重要步骤。
常见的表达系统包括细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。
表达后，通过亲和纯化、离子交换层析、凝胶过滤等手段纯化所得蛋白质。
5.基因敲除/敲入基因敲除或敲入是通过改变目标基因的DNA序列来研究基因功能的方法。
基因敲除可以通过CRISPR-Cas9系统、RNA干扰、转座酶介导的基因敲入等方法实现。
6.DNA测序DNA测序是分析DNA序列的方法。
常见的测序技术包括Sanger测序、下一代测序（包括Illumina、Ion Torrent、PacBio等）等。
DNA测序可以应用于基因组学、转录组学、评估其中一区域的突变等领域。
7.西方印迹西方印迹是一种蛋白质检测方法，用于检测和定量特定蛋白质的存在和表达水平。
通过电泳将蛋白质分离，然后转移到膜上，并使用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗的检测。
8.荧光定量PCR荧光定量PCR（qPCR）是一种用于定量分析DNA或RNA浓度的方法。
通过特异性引物、探针与目标序列的结合，实时检测并记录PCR扩增产物的信号，进而测定起始目标序列的数量。
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验是一种研究生物体分子结构、功能和交互作用的实验方法。
本文将介绍分子生物学实验的一般步骤和常用技术，并以DNA提取和PCR扩增为例，详细描述了实验的具体步骤和操作。
分子生物学实验一般包括以下几个步骤：实验前的准备、生物样品的采集和处理、核酸提取、酶切和电泳、PCR扩增、蛋白质表达等。
实验前的准备包括实验设计、试剂的准备和设备的调试。
根据实验目的和问题，确定实验设计和具体操作步骤，选择适当的试剂和设备，并对实验条件进行优化。
生物样品的采集和处理是分子生物学实验的基础。
根据研究对象不同，可以采集细胞、组织、血液等生物样品，并进行预处理，如细胞培养、组织切片、离心等。
核酸提取是从生物样品中分离出核酸的步骤。
核酸提取可以使用化学方法或基于特定原理的商业试剂盒。
其中，常用的方法有酚/氯仿法、骨架蛋白法、磁珠法等。
酶切和电泳是分子生物学实验中常用的技术手段。
酶切是通过限制性内切酶对DNA进行特异性切割，生成特定大小的DNA片段。
电泳是利用电场对DNA片段进行分离和检测，可通过琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
PCR扩增是一种重要的分子生物学实验技术。
PCR通过不断循环的变性、退火和延伸过程，在体外扩增DNA序列。
PCR 需要DNA模板、引物、核苷酸和聚合酶等关键试剂。
PCR扩增过程包括初始变性、循环扩增和最终延伸。
扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行分析和检测。
蛋白质表达是研究蛋白质功能和结构的重要实验手段。
常用的蛋白质表达系统包括原核表达系统和真核表达系统。
表达载体经过构建和转染后，利用细胞的表达机制使蛋白质在体内合成。
总之，分子生物学实验是研究生物体分子结构和功能的重要方法。
通过实验前的准备、生物样品的采集和处理、核酸提取、酶切和电泳、PCR扩增、蛋白质表达等步骤，可以获得关于生物体分子结构和功能的有价值的信息。
分子生物学实验
实验一.质粒提取与琼脂糖电泳一、目的掌握质粒的提取方法及原理；琼脂糖凝胶电泳及观察评判方法。
二、原理1.质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。
质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。
在pH 12.0-12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。
将pH 调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
硅基质树脂在高盐状态下，特异性吸附DNA，而在低盐状态下，DNA被洗脱下来。
2.带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。
电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。
琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。
在pH值为8.0~8.3时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。
采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。
核酸分子中嵌入荧光染料（如EB）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。
三、实验材料、仪器、试剂（1）菌种：大肠杆菌DH5α（2）分子生物学试剂10mg/ml溴化乙锭（EB）:按10mg/ml浓度将EB溶于去离子水中，剧烈搅拌，完全溶解后，室温下避光保存。
50×TAE电泳缓冲液:24.2g Tris5.71g 冰乙酸10ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）加去离子水至100ml，室温保存备用，工作液为1×TAE。
6×上样缓冲液:0.25% 溴酚蓝40%（W/V）蔗糖水溶液1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖溶于100ml 1×TAE电泳缓冲液中，溶化后加入5μl 10mg/ml EB贮存液，使凝胶中EB终浓度达到0.5mg/ml。
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验是研究生命分子结构和功能的基础。
分子生物学的研究对象是生命体内的DNA、RNA、蛋白质等生物分子，通过实验可深入了解生命分子的结构及其功能，为治疗疾病等产生重要的科研意义。
本文将着重介绍PCR扩增、基因克隆、蛋白质表达和酶联免疫吸附实验等分子生物学实验。
PCR扩增PCR扩增是分子生物学领域中使用最广泛的实验技术之一。
PCR扩增技术是通过不断的复制，使DNA分子增多。
PCR主要操作步骤包括：DNA样品提取、模板DNA扩增、DNA回收纯化和定量检测等。
PCR扩增实验分为两部分：第一部分是制备PCR反应混合物，包括模板DNA、引物（Primer）、反应缓冲液、酶、脱离剂、种子液等。
制备反应混合物的过程中，需要将所有的试剂按照一定比例混合后，将混合液均匀吸入PCR管内。
第二部分是PCR反应实验本身，包括控制PCR反应温度变化、确保每个PCR 反应的时间和温度一致、等等。
PCR反应时间通常在2-6小时之间，取决于所扩增的DNA片段的长度和针对不同目标所使用的引物。
基因克隆基因克隆是利用重组DNA技术将外源DNA和载体DNA组装重组成新的DNA分子，然后通过转化等方式将新的DNA分子转移到感受态宿主细胞中，使得新的DNA分子被细胞所接受并复制，从而达到克隆目的的一种实验方法。
基因克隆实验的主要操作步骤包括：选取适当的载体，将所需要的外源DNA和载体DNA连接起来组成重组DNA分子，将重组DNA分子转化至感受态宿主细胞中，最后从发酵液中提取所需的目标DNA分子。
基因克隆技术在分子生物学实验研究中起到了重要的作用，使得我们能够制备大量目标分子用于进一步的研究。
蛋白质表达蛋白质表达是一种将蛋白质合成出来的实验技术。
蛋白质表达技术的主要目的是利用外源基因的扩增技术，将目标蛋白表达并纯化出来，从而进一步深入了解蛋白质的结构及其功能。
蛋白质表达实验的主要操作步骤是：蛋白质的基因落库、基因克隆到重组基因载体中、启动子、子纯化表达及活性鉴定等。
分子生物学实验3篇
分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。
PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。
PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。
PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。
通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。
PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。
PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。
随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。
第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。
RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。
RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。
RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。
RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。
在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。
第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。
分子生物学基本实验操作
分子生物学基本实验操作1.DNA提取：DNA提取是分子生物学中的基础实验操作，目的是从生物组织或细胞中提取出纯净的DNA样品。
常用的DNA提取方法包括酚氯仿法、盐法和商业化提取试剂盒。
该实验操作通常包括细胞破碎、蛋白质去除、DNA沉淀和洗涤等步骤。
2.PCR：聚合酶链反应（PCR）是分子生物学中常用的方法，用于扩增特定的DNA片段。
PCR通过加入DNA模板、引物、碱基和聚合酶，利用循环反应的方式在体外合成特定序列的DNA。
PCR通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。
3.凝胶电泳：凝胶电泳是一种分离和分析DNA、RNA和蛋白质的常用方法。
通过将待测样品加载到凝胶中，然后通过电场使DNA、RNA或蛋白质在凝胶中迁移，可以根据迁移速度和分子大小进行分离和定性。
4. Western blot：Western blot是一种用于检测特定蛋白质的方法。
该方法通过将待测样品进行电泳分离，然后将蛋白质转移到膜上，并用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后再用染色剂或化学发光来检测目标蛋白质的存在。
5.DNA克隆：DNA克隆是将DNA片段插入到载体DNA中的过程，用于研究和重组DNA。
常用的DNA克隆方法包括限制性内切酶切割、连接酶反应和转化。
通过将DNA片段插入载体中并转化至宿主细胞，可以大量复制目标DNA并随后进行研究。
6.基因测序：基因测序是确定DNA或RNA序列的方法，用于分析基因组、转录组和序列变异。
常用的基因测序方法包括链终止法（Sanger测序）和下一代测序（NGS）。
通过测序，可以获取DNA或RNA的序列信息，并进一步研究基因功能和变异。
7.基因表达分析：基因表达分析通过检测RNA水平来研究基因的表达情况。
常用的方法包括实时定量PCR、Northern blot和转录组测序。
这些方法可以定性和定量地研究基因的表达水平，并帮助解析基因调控和信号通路。
这些是分子生物学的一些基本实验操作。
当然，随着技术和方法的不断发展，分子生物学领域中还有许多其他的实验操作，用于研究生物分子结构和功能。
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分子生物学实验注意:分子生物学实验共3个，一周内完成。
1-26号第6周做实验，27-52号第8周做实验。
实验一:周三下午，具体时间待定。
(13:00开始，或14:30开始。
若16:30开始，请先吃晚餐)实验二、三:周四上午10:00开始(预计34，56，78节)做实验之前请先做好预习，并写好预习疑问实验一实验药品试剂配制、酵母菌培养一、目的1(学会基因组DNA提取常用的几种药剂的配制。
2(学会酵母菌的活化及培养过程。
二、原理三、实验器材电热重蒸水器;手提式高压灭菌锅、座式自动电热压力蒸汽灭菌器;电子天平;离心机;酸度计;恒温振荡摇床;移液器;容量瓶四、实验试剂酵母提取物，蛋白胨，葡萄糖，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，氯化钠，氯化镁，Triton X-100，SDS(十二烷基硫酸钠)，Tris(三羟甲基氨基甲烷)，盐酸，冰醋酸，硼酸，EDTA(乙二胺四乙酸)，醋酸钾，酚，氯仿，异戊醇，醋酸钠，RNaseA 。
五、操作(一)酿酒酵母的培养1(YPD液体培养基的配制:准确称取酵母提取物5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，加热溶解于450ml ddHO 后，用2ddHO定容至500ml。
分装于两个250ml三角瓶，每瓶200ml。
116?高压灭菌20min。
22. 酿酒酵母的活化及培养。
在超净工作台中，从保存的酿酒酵母菌株INVSc1中挑取单菌落，转入5mlYPD培养基30?摇菌24hr;按1:10的比例转接入新鲜灭菌的YPD培养基中30?摇菌12hr;按1:10的比例重复转接培养一次;按1:200的比例转接入新鲜灭菌的YPD培养基中30?摇菌 14hr左右，当OD值在0.4,0.6之间时为成功活化。
在OD600在0.4,0.6之间时，停止培养，600及时离心收集或者放入4?冰箱保存。
(二)几种常用药剂的配制1. PBS(0.01mol/L，pH7.0):称取NaCl 0.8g，KCl 0.02g，NaHPO 0.144g，KHPO 0.024g，溶解于80ml ddHO中，24242用HCl调节至pH7.0，用ddHO定容至100ml。
分装后121?高压灭菌20min，室温保存。
22. 1mol/L NaHPO: 24称取NaHPO?12HO 3.5814g，或者NaHPO?7HO 2.6814g用ddHO定容至10ml。
24224223. 1mol/L NaHPO: 24称取NaHPO?2HO 1.5601g用ddHO定容至10ml。
24224. 磷酸缓冲液(1mol/L ，pH7.4 ):量取1mol/L NaHPO7.74ml，1mol/L NaHPO2.26ml，混合后，用ddHO定容至100ml。
24 24 25. 1mol/L MgCl : 2称取4.7605g MgCl，用ddHO定容至50ml，用0.22微米细菌滤膜过滤。
2 26. 蜗牛酶缓冲液(20mg/ml，0.1 mol/L ，pH7.4磷酸缓冲液，0.25 mol/L ，MgCl ): 2称取蜗牛酶干粉 200mg磷酸缓冲液(1mol/L ，pH7.4 ) 1ml1mol/L MgCl 2.5ml 2用ddHO定容至10ml。
27. 1%SDS裂解液(2% Triton X-100，1%SDS，0.1mol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl pH8.0，1mmol/L EDTA):量取Triton X-100 200μl10%SDS 1ml0.02mol/L Tris-HCl(pH8.0) 5ml0.5mol/L EDTA(pH8.0) 20μl称取NaCl 0.0584g混合，用ddHO定容至10ml，用0.22微米的细菌滤膜过滤除菌，室温存放。
28. 10%SDS:称取SDS 1g，用ddHO定容至10ml。
29. 0.02mol/L Tris-HCl(pH8.0):量取 0.1 mol/L Tris碱溶液 20ml0.1 mol/L HCl溶液 11.68ml混合，用ddHO定容至100ml。
210. 0.1 mol/L Tris碱溶液:称取Tris 1.2114g，用ddHO定容至100ml。
211.0.1 mol/L HCl溶液:称取HCl 3.646g，用ddHO定容至1000ml。
212. 0.5mol/L EDTA(pH8.0):称取18.61g EDTA-Na?2HO，加入80ml ddHO中，剧烈搅22拌，用NaOH调节pH至8.0，用ddHO定容至100ml，分装后高压灭菌。
213. 5mol/L Kac (pH8.9):称取 24.535g Kac，溶于40ml ddHO中，用冰醋酸，或者NaOH2调节pH至8.9，用ddHO定容至50ml，分装后高压灭菌。
214. 乙醇15. 75%乙醇16. TE缓冲液:(10mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1mmol/L EDTA(pH8.0))量取0.02mol/L Tris-HCl(pH8.0) 5ml，0.5mol/L EDTA(pH8.0) 20μl，用ddHO定容至10ml，高压灭菌后贮存于4?C冰箱。
217. RNaseA:18. 酚:氯仿:异戊醇(体积比25:24:1)19. 3mol/L NaAc (pH5.2):NaAc?3HO 40.18g，或者NaAc 24.609g，加dd HO 50ml，22用冰醋酸调节pH值至5.2，用ddHO定容至100ml，分装后高压灭菌，贮存于4?冰箱。
220. 5TBE缓冲液:称取Tris 54g，硼酸 27.5g，0.5mol/L EDTA(pH8.0)20mL，用ddHO2定容至1000ml。
六、注意事项1. 正确使用各种仪器设备。
2. YPD培养基灭菌温度不能过高。
实验二酵母染色体DNA的制备一、目的掌握酿酒酵母染色体DNA提取方法。
二、原理酵母是一种易于培养的典型单细胞真核生物，有“真核生物中的大肠杆菌”之美称。
单倍体酵母细胞基因组为15Mb，含16条大小约为200,2200kb的线性染色体。
酵母不仅含有高等真核生物细胞中的膜性亚细胞器，而且还有细胞骨架的结构。
酵母DNA只存在于核内，尽管无组蛋白H1，但染色体DNA的核小体结构与高等真核生物仍十分相似。
酵母的良好的遗传背景，为进行真核生物的基因操作提供了有效的研究工具，并积累了大量的研究经验。
酵母菌的培养不但简单经济，而且快捷高效，在营养丰富的培养基中，大约90min的时间即可增殖一代。
酵母DNA通常与蛋白质及部分RNA结合成染色体形式存在，因此分离核酸首先破碎细胞，然后采用各种方法将蛋白质、糖类、脂类和盐类等物质除去以纯化DNA。
在提取过程中，要保证DNA不被内源或外界污染的DNAase降解，以保持DNA的完整性，并要排除其他分子的污染，以获得高纯度的DNA。
三、实验器材1. 台式低高温高速离心机;2. 电泳仪;3. 恒温摇床;4. 涡旋仪;5. 恒温水浴锅6. 冰箱;7. 灭菌锅;8. 电炉;9. 三角瓶;10. 试管四、实验试剂1. YPD培养基，见实验一。
2. Ura缺陷型的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVSc1)酿酒酵母菌株INVSc1。
3. RNase A 10mg/ml。
(-20?保存)4. PBS(0.01mol/L，pH7.0)5. 蜗牛酶缓冲液(20mg/ml)6. 1%SDS裂解液7. 5mol/L Kac (pH8.9)8. 乙醇9. TE缓冲液10. 酚:氯仿:异戊醇(体积比25:24:1)11. 3mol/L NaAc (pH5.2)12. 75%乙醇五、操作1. 用1.5ml离心管，分次收集2-3ml菌液，12000rpm，离心2min，弃去上清，收集沉淀。
2. 在沉淀中加入500μl PBS(0.01mol/L，pH7.0)，用移液器吹打重悬沉淀，12000rpm，离心2min，弃去上清。
3. 重复第2步。
4. 在沉淀中加入100μl 蜗牛酶缓冲液(20mg/ml)，45?C作用2hr。
5. 加入100μl 1%SDS裂解液，-20?C冷冻，室温振荡溶解，反复3次。
6. 向悬浮液中加入150μl 5mol/L Kac (pH8.9)，轻轻颠倒离心管混匀，10000rpm，离心5min，吸取上清到一新的1.5ml 离心管中。
7. 加入上清2倍体积的乙醇，颠倒离心管轻轻混匀，室温放置5min，12000rpm，离心10min，弃去上清，收集沉淀。
8. 加100μl TE缓冲液，溶解沉淀。
再加6μl RNaseA，37?C温浴30min。
9. 加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，颠倒混匀，12000rpm，离心10min，吸取上层水相到一新的1.5ml 离心管中。
10. 上清，重复第9步骤。
11. 加入1/10体积的3mol/L NaAc (pH5.2)，2.5倍体积乙醇，沉淀DNA。
12. 12000rpm，离心2min，弃去上清。
13. 加入500μl 75%乙醇，洗涤沉淀。
重复一次。
14. 打开离心管盖子，干燥。
15. 加入20μl dd HO溶解DNA。
2六、注意事项1. 混匀一定要温和，否则DNA大分子将被打断，而部分降解。
2. YPD培养基灭菌的时间不能过长，否则，葡萄糖会焦糖化。
灭菌后如培养基颜色变成焦糖色则要重新配制。
七、思考题1. 为什么人们把酵母作为真核生物研究的重要模式生物,2. 从原理来看，核酸提取可分为哪几个步骤,3. 如何粗略测定DNA浓度,实验三琼脂糖凝胶电泳一、目的1. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理。
2. 学习并掌握使用水平式电泳仪的方法。
二、原理琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA 片段。
不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等)，有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。
凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。
三、实验器材1. 琼脂糖凝胶电泳系统;2. 紫外透射观测仪;3. 电炉或微波炉;4. 250ml三角瓶5. 微量移液取样器 (枪头);6. 灭菌锅四、实验试剂1. 琼脂糖2. 6×加样缓冲液:0.25%溴酚蓝、40%蔗糖3. DNA分子量标准(,DNA HindIII:23130，9420，6560，4360，2320，2030，560，130 bp)4. 0.5 × TBE电泳缓冲液:45 mmol/L Tris?硼酸;1 mmol/L EDTA(pH8.0)5. 0.8%琼脂糖:0.8g琼脂糖用100ml 0.5 × TBE沸水浴溶解6. 0.5μg/μl溴化乙锭溶液7. 无菌dd HO 2五、操作1. 称取0.8g琼脂糖粉，放入三角瓶，加入100ml 0.5×TBE电泳缓冲液，瓶口上倒扣一个小烧杯或小平皿，将该三角瓶置于微波炉或电炉加热直至琼脂溶解。