微柱凝胶法血型鉴定操作规程精编版
微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程
微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定（微柱凝胶卡式法）的技术操作，保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。
二、适用范围适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1，取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2，用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液，在Ac、Bc微孔中各加入受检者血清（血浆）50微升，再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。
3，将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后，取出判断结果。
结果判读：如Ctrl微孔为阴性：A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原，Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清（血浆）存在抗-A或者抗-B；若各微孔阴性，则结果相反；结合反应格局判读血型结果。
若Ctrl微孔为阳性，结果不可信，重新试验。
5，Rh血型分型：5.1取Rh血型分型微柱凝胶卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
5.2使用微量移液器在C、c、D、E、e、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液。
5.3将检测卡静止3分钟使其充分反应后放入专用离心机按上述条件离心后观察结果。
5.4判断规则见上表：结果判定：如Ctrl微孔为阴性，C、c、D、E、e微孔中阳性结果表示受检者红细胞表达相应的血型抗原，反之则不表达相应的血型抗原。
微柱凝胶法血型鉴定操作规程
微柱凝胶法
1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml
2原理：
2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；
2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶；
2.3凝胶间隙具有分子筛作用。
凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。
未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；
2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。
3操作：
3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。
3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul
3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟
3.4离心结束后在白色背景前观察结果
4结果判断：
A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
A孔阴性B孔阴性为O型;A孔阳性B孔阳性为AB型。
5.注意事项
5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。
5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。
5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。
5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。
5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。
5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。
6.方法评价
卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。
ABO血型鉴定操作规程
1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。
2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。
4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。
【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。
【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。
【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。
2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
交叉配血试验标准操作规程(微柱凝胶)
交叉配血试验标准操作规程（微柱凝胶抗人球蛋白法）1. 目的为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。
2. 适用范围适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。
3. 职责医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。
4. 原理红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。
5. 所需设备和试剂普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡6. 检测环境条件室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。
7. 操作步骤7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。
7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM 悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。
7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。
7.4取出，判定结果，结果判定标准按下表：（可参照结果判定示图）检验结果的解释：阳性结果，表示受（供）血者血浆或血清中含供（受）血者红细胞血型抗原相应的抗体（不完全抗体IgG或完全抗体IgM），供受血者血液不相容。
阴性结果，表示供受血者血液相容。
8. 质量控制8.1微柱凝胶试剂卡在有效期内使用，每批试剂卡在使用前用已知阴、阳性对照确认其有效性。
8.1试剂质量控制方法8.1.1即作阴、阳性对照试验：撕开检测卡的封膜，于2个反应腔中分别加入已致敏IgG抗D的1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl、健康者1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl。
ABO、RhD血型检测卡(微柱凝胶)标准操作程序(正定)
ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）标准操作程序（正定）发布日期：2012-03-20 查看次数：1197一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
二、操作步骤1．将准备好的微柱凝胶试剂卡做好标记。
2．将配制好的被检者红细胞悬液分别加入第1至第3管或第4至第6管中，每管50微升。
3．即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。
血型判定见表：血型抗A抗B抗DD 阳性A +—+B —++ O——+ AB+++D 阴性A +——B—+—O———AB++—三、注意事项1、检测标本必须为抗凝血。
2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4、若结果为±或1＋需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。
5、每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集。
6、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
血型鉴定、交叉配血操作规程
ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3. 试剂：长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】:1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D,2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小;5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。
备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。
二、试管法(盐水介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制);2、受试者血清或血清;3、洁净康氏试管。
【正定型】:1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加入抗A和抗B血清1滴;3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。
【反定型】:1、取二支试管分别记上AC和BC;2、分别加入病人血清;3、对应加入A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果;【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。
ABO、RhD血型鉴定
ABO、RhD血型鉴定操作规程一、目的指导规范本科工作人员进行血液ABO、RhD血型鉴定工作。
二、适用范围输血岗位工作人员。
三、职责负责对申请输血的标本进行ABO、RhD血型鉴定。
四、标本2mlEDTA-K2抗凝全血。
五、实验器材载玻片、0.5~10ul加样枪、20~200ul加样枪、100~1000ul加样枪、一次性吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。
六、实验试剂抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗体），RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）；0.5%~1%A、B标准红细胞盐水悬液；ABO、RhD血型定型检测卡；0.9%生理盐水。
七、检测原理血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合，能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性抗-A、抗-B和RhD标准血清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准A 红细胞和B红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然IgM类抗-A 或抗-B。
微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
八、操作流程1、玻片法1.1查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好A、B、Rh，分别向所标注位置加5ul待检全血，再向相应位置滴加抗-A、抗-B、RhD标准血清一滴，混匀。
1.2查抗体：台式离心机3000r/min离心待检标本2min，上清备用。
取洁净载玻片一张，记号笔标注Ac、Bc，相应加入A型、B型标准红细胞一滴，再分别加入待检血浆（清）20ul，混匀。
1.3将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续15min，肉眼观察有无凝集反应。
如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。
2、微胶凝柱法2.1标本准备：待检全血3000r/min离心2min，上清液为待检血浆；取压积红细胞10ul加入1000ul生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。
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微柱凝胶法血型鉴定操
作规程
GE GROUP system office room 【GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-
微柱凝胶法
抗凝血2.0ml
1标本：EDTA-K
2
2原理：
2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；
2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶；
2.3凝胶间隙具有分子筛作用。
凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。
未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；
2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。
3操作：
3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。
3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul
3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟
3.4离心结束后在白色背景前观察结果
4结果判断：
A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
A孔阴性B孔阴性为O型;A孔阳性B孔阳性为AB型。
5.注意事项
5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。
5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。
5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。
5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。
5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。
5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。
6.方法评价
卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。