卵黄抗体生产和应用技术培训课件
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免疫鸡卵黄抗体的形成
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抗体的释放
在卵黄被吸收和利用的过程中，抗体也会 随之释放到鸡的血液中，提供额外的免疫 保护。
04
免疫鸡卵黄抗体形成的优化策略
免疫原的优化
01
02
03
抗原改进
优化免疫原的性质和结构 ，提高其免疫原性，以产 生更强的免疫反应。
免疫剂量
研究免疫剂量的最佳方案 ，以确定在产生高抗体滴 度的同时，又能避免免疫 原的过度刺激。
抗体在医药与农业等领域的应用拓展
要点一
抗体药物的开发
要点二
农业上的应用
利用卵黄抗体开发新型抗体药物，如单克隆抗体、抗体片 段等，用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等疾病。
研究卵黄抗体在农业上的应用，如提高作物抗病性、增强 动物免疫力等，为农业可持续发展提供新的解决方案。
06
免疫鸡卵黄抗体形成案例分析
案例一
抗体多样性的研究
卵黄抗体具有高度多样性，不同抗体可能具 有不同的特性和用途。因此，深入研究抗体 多样性的产生机制和开发应用具有重要意义 。
抗体功能的多样性研究
抗体的免疫调节作用
研究卵黄抗体的免疫调节作用，揭示其在免 疫应答中的重要角色，为免疫治疗和疫苗设 计提供新的思路。
抗体的抗菌、抗病毒作用
研究卵黄抗体对抗菌、抗病毒的作用，探索 其在防治感染性疾病方面的应用潜力。
免疫鸡卵黄抗体的形成
汇报人： 日期:
contents
目录
• 免疫鸡卵黄抗体概述 • 免疫鸡卵黄抗体的制备过程 • 免疫鸡卵黄抗体的形成机制 • 免疫鸡卵黄抗体形成的优化策略 • 免疫鸡卵黄抗体形成的研究展望 • 免疫鸡卵黄抗体形成案例分析
01
免疫鸡卵黄抗体概述
卵黄抗体生产及应用技术ppt课件
2.用于诊断分析或纯化生物活性分子，或在人医临床上那么需求提高IgY纯度或提纯 特异性IgY。
IgY纯化分三步： 第一步是粗提，将含有IgY的水溶性蛋白与水不溶的脂类和脂蛋白分别，即除去脂
质；方法有超滤、有机溶剂萃取、以及PEG、SDS沉淀脂蛋白等，经粗提的上清液 或水溶液中IgY含量占蛋白质的15%； 第二步用硫酸葡聚糖钠等进一步沉淀，提纯出纯度大于80%的IgY，此时的IgY要低 温或冻干保管；
3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解才干〔相对于IgG〕， 提纯后IgY在适宜条件储存10年滴度没有损失〔Olovson等，1993〕，幼畜可以口 服，经维护处置后成年动物也可以口服，提纯后可以肌注〔孙希琪，1995〕 ；
DA和FDA以为卵黄抗体是GRAS〔generally regarded as safe〕且已允许商业消 费用于人；
2.大肠杆菌导致仔猪腹泻及抗大肠杆菌菌毛IgY阻止其在小肠粘膜上 附着，体外粘着抑制实验支持这一假设〔Yokoyama等,1992〕。
3.李国平等〔2002〕证明：仔猪出生后头36小时内口服IgY不被分解， 和注射效果无差别。卵黄抗体与菌毛抗原的亲和力远远超越母乳 及高免血清中抗体与抗原的亲和力，对控制此病极为有利 。
续〔3〕
6.消费卵黄抗体典型的免疫程序〔Li-Chan等，2000〕： (1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原； (2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进展2～4次加强免疫，剂量
逐渐放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的 过程，称之为“超免疫作用〞。
3.经济、高效的分别纯化技术是关键。 4.缺陷及需求处理的问题。 5.开展趋势。
IgY纯化分三步： 第一步是粗提，将含有IgY的水溶性蛋白与水不溶的脂类和脂蛋白分别，即除去脂
质；方法有超滤、有机溶剂萃取、以及PEG、SDS沉淀脂蛋白等，经粗提的上清液 或水溶液中IgY含量占蛋白质的15%； 第二步用硫酸葡聚糖钠等进一步沉淀，提纯出纯度大于80%的IgY，此时的IgY要低 温或冻干保管；
3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解才干〔相对于IgG〕， 提纯后IgY在适宜条件储存10年滴度没有损失〔Olovson等，1993〕，幼畜可以口 服，经维护处置后成年动物也可以口服，提纯后可以肌注〔孙希琪，1995〕 ；
DA和FDA以为卵黄抗体是GRAS〔generally regarded as safe〕且已允许商业消 费用于人；
2.大肠杆菌导致仔猪腹泻及抗大肠杆菌菌毛IgY阻止其在小肠粘膜上 附着，体外粘着抑制实验支持这一假设〔Yokoyama等,1992〕。
3.李国平等〔2002〕证明：仔猪出生后头36小时内口服IgY不被分解， 和注射效果无差别。卵黄抗体与菌毛抗原的亲和力远远超越母乳 及高免血清中抗体与抗原的亲和力，对控制此病极为有利 。
续〔3〕
6.消费卵黄抗体典型的免疫程序〔Li-Chan等，2000〕： (1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原； (2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进展2～4次加强免疫，剂量
逐渐放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的 过程，称之为“超免疫作用〞。
3.经济、高效的分别纯化技术是关键。 4.缺陷及需求处理的问题。 5.开展趋势。
天行健之卵黄抗体
3、用卵黄琼扩试验替代血清琼扩试验检测IBD抗体水平是可行的，并且具有经济、省力、 省时的特点。
4、使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，减少对动物的副反应，提高动 物的福利。
河南天行健生物科技有限公司
Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD.
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卵黄抗体
中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：
*灌装
*灭活剂配制
检测
疫苗瓶灭菌
胶塞灭菌
铝盖灭菌
压盖
*
标签 贴签
纸箱 包装
灭活 灭活检测
免疫原制 备
负压10000级 正压10000级 负压区 局部100级
成品检验
入库
河南天行健生物科技有限公司
Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD.
河南天行健生物科技有限公司
体
6、卵黄抗体（IgY）在动物疾病诊断方面的应用
7、卵黄抗体（IgY）在公司的开发应用
河南天行健生物科技有限公司
Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD.
卵黄抗体IgY的形成
★ 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊 的控制。
E-mail: txjswkj@ 全国免费电话：400-6780-567
4、使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，减少对动物的副反应，提高动 物的福利。
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卵黄抗体
中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：
*灌装
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疫苗瓶灭菌
胶塞灭菌
铝盖灭菌
压盖
*
标签 贴签
纸箱 包装
灭活 灭活检测
免疫原制 备
负压10000级 正压10000级 负压区 局部100级
成品检验
入库
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体
6、卵黄抗体（IgY）在动物疾病诊断方面的应用
7、卵黄抗体（IgY）在公司的开发应用
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卵黄抗体IgY的形成
★ 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊 的控制。
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兽用卵黄抗体的研究与应用
有 广泛 的应用 前景 。
酶 锫
３ 动物疾病诊 断中的应用 ． ２
由于卵黄抗体不激活哺乳动物的补体系统， 不与 蛋白 Ａ Ｇ和 Ｆ 受体相结合， 、 ｃ 具有特异性强 、 灵敏度 高的特点 ， 以在动物疾病免疫诊断中具有重要的意 所 义 。据报道 Ｉ 已在琼 脂扩散 试验 、 ｇ Ｙ 乳胶凝 聚试验 、 荧
污染 、 无残 留、 药效持续时间长等特点 ， 可有效替代
抗生 素 ， 在畜牧保 健领域有 广 阔的应用前景 。
４ 展 望
羔羊和小 白鼠轮状病毒腹泻等动物传染病的预防和
治疗 ， 并取 得 了显著 的效果 。 高云英等制 备 的鸡 抗猪
自发 现 卵黄抗 体 以来 ，众 多 的科 研人 员对 卵 黄
大肠杆菌高免 Ｉ 经预防、 ｇ Ｙ， 攻毒试验， 发现其对仔猪
免疫保护率可达 ９ ％以上， ０ 攻毒保护率 ９％以上。 ８
抗体 的结构 、 生理功能及应用作 了广泛深入 的研究， 取得了可喜的成绩 。特别是近年来提倡绿色食品， 限制抗生素 的大量使用 ，由于卵黄抗体是 一种安 全、 高效 、 无公害的生物制品， 不存在药物残留和耐 药性的问题 ， 而且卵黄抗体液 是蛋 白质 、 本身具有 促生长作用 ，非 常符合我 国畜牧业生产发展 的实 际， 因此 在 动 物 疾 病 的 预 防 、 断 和治 疗 方 面 将 具 诊
３１ 动物 疾病预 防 中的应 用 ．
用， 不存在药物残留和耐药性 的问题 ， 而且卵黄抗体 液是蛋白质 ， 有促生长作用 。 多价抗体微生态制剂是 特异性免疫球蛋 白与益生菌两种活性物质有机组合 的固体制剂 ，能充 分发 挥免 疫球蛋 白的特异性 免疫
功 能 与 益 生 菌 的 非特 异 性 免 疫 及 相 应 生 理 促 进 功 能 ， 到预 防和治疗 感染 性疾 病 的作 用 ， 达 而且具 有无
酶 锫
３ 动物疾病诊 断中的应用 ． ２
由于卵黄抗体不激活哺乳动物的补体系统， 不与 蛋白 Ａ Ｇ和 Ｆ 受体相结合， 、 ｃ 具有特异性强 、 灵敏度 高的特点 ， 以在动物疾病免疫诊断中具有重要的意 所 义 。据报道 Ｉ 已在琼 脂扩散 试验 、 ｇ Ｙ 乳胶凝 聚试验 、 荧
污染 、 无残 留、 药效持续时间长等特点 ， 可有效替代
抗生 素 ， 在畜牧保 健领域有 广 阔的应用前景 。
４ 展 望
羔羊和小 白鼠轮状病毒腹泻等动物传染病的预防和
治疗 ， 并取 得 了显著 的效果 。 高云英等制 备 的鸡 抗猪
自发 现 卵黄抗 体 以来 ，众 多 的科 研人 员对 卵 黄
大肠杆菌高免 Ｉ 经预防、 ｇ Ｙ， 攻毒试验， 发现其对仔猪
免疫保护率可达 ９ ％以上， ０ 攻毒保护率 ９％以上。 ８
抗体 的结构 、 生理功能及应用作 了广泛深入 的研究， 取得了可喜的成绩 。特别是近年来提倡绿色食品， 限制抗生素 的大量使用 ，由于卵黄抗体是 一种安 全、 高效 、 无公害的生物制品， 不存在药物残留和耐 药性的问题 ， 而且卵黄抗体液 是蛋 白质 、 本身具有 促生长作用 ，非 常符合我 国畜牧业生产发展 的实 际， 因此 在 动 物 疾 病 的 预 防 、 断 和治 疗 方 面 将 具 诊
３１ 动物 疾病预 防 中的应 用 ．
用， 不存在药物残留和耐药性 的问题 ， 而且卵黄抗体 液是蛋白质 ， 有促生长作用 。 多价抗体微生态制剂是 特异性免疫球蛋 白与益生菌两种活性物质有机组合 的固体制剂 ，能充 分发 挥免 疫球蛋 白的特异性 免疫
功 能 与 益 生 菌 的 非特 异 性 免 疫 及 相 应 生 理 促 进 功 能 ， 到预 防和治疗 感染 性疾 病 的作 用 ， 达 而且具 有无
卵黄抗体制备及应用
抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。
利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。
结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。
基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。
关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。
每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。
因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。
在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。
然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。
上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
《抗体的制备与应用》PPT课件说课讲解
Day
0
Resting B cell
2
4
Antibody
6
forming cell
(plasma cell)
8
Antibody Structure and Function
Structure of immunoglobulins
Basic structure
Heavy chain and Light chain（重链和轻链） Variable region and Constant region（可变区和恒定区） Other structures
❖ 基因工程抗体的分类
1、全抗体
❖（1）嵌和抗体（chimeric antibody） ❖（2）人源化抗体（humanized antibody）
2、小分子抗体
❖（1）Fab ❖（2）ScFv ❖（3）单域抗体 ❖（4）分子识别单位
3、其它抗体
❖ 多价微型抗体
双链抗体（diabody） 微型抗体(minibody) 三链抗体(triabody)
株难、不稳定、产量低、人体不能随意免疫 3、现代免疫学和分子生物学技术的推动 4、基因工程抗体的优点
❖ 基因工程抗体的优点：
易于获得稀有抗体; 人抗鼠抗体反应（Human anti－
mouse antibody reaciton, HAMAR） 低; 小分子抗体：渗透力强、HAMAR低、 亲和性高、靶向性高、组织非特结合少 等。
4. （三）用于疾病的治疗
5. 抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治 6. 抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗 7. 抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗
单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题
1. 单克隆抗体的特异性
卵黄抗体的应用
的分布于平皿培养基上。各纸片 中 心 距 离 不 小 于 ２４ 毫 升 ， 纸 片 距 平皿内缘应大于 １５ 毫升。直径 ９０ 毫升的平皿可贴 ７ 张纸片（一般可
将其切面直接均匀涂布于另一块 营养琼脂平板上。稍作干燥后， 贴 上待试的药敏试纸。将以上两块 平 板 置 于 ３７℃培 养 １２￣２４ 小 时 。
３．１ 培养基
４ 小时， 使抗菌药预扩散， 然后再
培 养 基 的 成 分 、含 量 、ＰＨ 值 、 放 ３７℃温箱中培养 ， 可 以 推 迟 细
琼 脂 的 厚 度 、硬 度 和 表 面 湿 度 等 ， 菌的生长而得到较大的抑菌圈。
１／２。然后， 找到第二点划线至平皿 的 １／２， 依 次 划 线 ， 直 至 细 菌 均 匀
略 停 ， 取 药 敏 片 贴 到 平 皿 培 养 基 料 经 常 规 消 毒 药 浸 泡 消 毒 后 ， 无 养皿 ， 倾注培养基 １８￣２０ 毫 升 为 边缘见不到细菌明显生长为限。
表 面 。 为 了 使 药 敏 片 与 培 养 基 紧 菌 操 作 ， 用 接 种 环 取 心 、肝 、脾 、 宜 。 培 养 基 内 应 尽 量 避 免 有 抗 菌
细菌涂布到平皿培养基上。具体 见表 １。多黏菌素抑菌圈， 在 ９ 毫
方 法 ： 用 灭 菌 接 种 环 取 适 量 细 菌 米 以 上 为 高 敏 ， ６￣９ 毫 米 为 低 敏 ，
分别在平皿边缘相对四点涂菌， 无抑菌圈为不敏。
以第一点开始划线涂菌至平皿的
２ 药敏试验的改良方法
培养。每隔 ６ 小时观察 １ 次， １２ ￣
鸡 室转到新建鸡舍室内较 潮， 曾用炉子烤过， 白天
传 又打开窗户在中午通 风， 没过两天出现呼吸
鼻 道现象， 但呼吸不困难， 可 以 听 见 “呲 呲 ” 甩 鼻
卵黄抗体IgY在猪生产中的应用
卵黄抗体IgY在猪生产中的应用摘要：卵黄抗体(Yolk Immunoglobulin，IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。
用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。
IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。
本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。
关键词卵黄抗体；猪生产；应用卵黄抗体作为一种新型绿色添加剂有其自身的优势：①卵黄抗体产量高，Anders(1993)推算认为一只蛋鸡每周的抗体产量相当于9～10只小白兔的抗体产量；②鸡蛋的生产成本较低，收集和提纯方便，大规模提取抗体的技术已经成熟；③产生有效免疫反应所需抗原量小；④IgY的化学性质稳定，具有一定的耐热、耐酸、耐碱及耐高渗性能，对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力；⑤由于种系发生距离相差很大，禽类IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间不会发生交叉血清学反应；⑥不激活哺乳动物的补体系统，不与类风湿因子或Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳性结果；⑦对肠道正常菌群无副作用，也不存在抗药性和药物残留问题。
IgY 本身是一种优质的蛋白源，有促生长作用。
1．卵黄抗体(IgY)1.1 IgY抗体结构IgY大分子的结构与哺乳动物免疫球蛋白类似。
Warr等(1995)[1]通过分子结构分析认为IgY 是哺乳动物体内IgG 和IgM 的进化前体。
IgY 中Cυ3和Cυ4区与哺乳动物IgG 的Cγ2和Cγ3具有同源性；Cυ2是IgY的枢纽区，而它在IgY 中没有得到充分进化。
IgY中这种不发达的枢纽区造成了Fab部分的低活性，而这进而可能是IgG 与IgY某些差异的原因。
与IgG一样，IgY的Fc片断是绝大部分生物受动器功能的作用部位。
IgY-Fc部分包括2条碳氢链，而IgG 只有一条。
IgG在重链上含有3个功能域而IgY的重链含有4个功能域，而且IgY缺少铰链区。
1.2 IgY进入卵黄的机制禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
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卵黄抗体生产和应用技术
6
（三）IgY结构特点
1.分子量160～180kDa，稍大于IgG（ 160kDa ）； 2.多一稳定区而少一铰链区（铰链区有较多脯氨酸，具
有韧性，与抗体分子构型变化有关）；
卵黄抗体生产和应用技术
7
续（1）
这种差异没有影响IgY的抗原-抗体结合特性和结 合能力，结合价也是2（Warr等, 1995），然而对于pH、 温度及蛋白水解等引起构象变化的环境条件，IgY比 IgG稳定；
DA和FDA认为卵黄抗体是GRAS（generally regarded as safe） 且已允许商业生产用于人；
卵黄抗体生产和应用技术
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（1.五鸡蛋）储I存g在Y纯+4℃化条件、下活6个性月I测gY活定性及损失保很存小。用做
食品和饲料添加剂，或兽医临床上，IgY多以全卵黄或 其水溶液的形式直接利用，或制成干粉利用。
（3）免疫途径、免疫程序、佐剂
卵黄抗体生产和应用技术
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续（3）
6.生产卵黄抗体典型的免疫程序（Li-Chan等，2000）：
(1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳 化抗原；
(2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原 进行2～4次加强免疫，剂量逐步放大1～2倍。这种多 次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫 的过程，称之为“超免疫作用”。
分泌抗体进入血液；
3.通过血液循环和输卵管上皮层分泌滤泡，产蛋鸡将母
源抗体选择性分泌到卵黄内；
4.卵黄中Ig主要是IgG，叫IgY（IgM和IgA转移到蛋清中）；
5.小鸡通过IgY实现获得性被动免疫(猪、牛、马属通过初乳；兔 通过胎盘)；
6.卵黄中含有多种不同抗体（约200种，滴度取决于暴露程度； M.Coleman,2000)；
7.用某种病原菌免疫母鸡，可产生特异性IgY， Sugita 等（1996）用26种甲醛灭活病原菌免疫产蛋鸡，IgY 可预防多种疾病。
卵黄抗体生产和应用技术
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(二) IgY转移时间、产量及影响产量的因 素
1.用HI、ELISA、ID检查卵黄中IgY，抗体应答形成时间
晚于血清1～2周（Theresa H P,1985；鸭腺病毒），以后与 血清测得的HI滴度一致，也有报道卵黄卵黄抗体具有 累积作用；
卵黄抗体生产和应用技术
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续（2）
5.影响IgY产量的因素包括： （1）抗原的质与量（颗粒/可溶性抗原、类毒素/菌体抗原、活菌/死菌，
免疫麻痹；高免疫原性和安全）
（2）机体方面，A包括产蛋鸡品种（来航鸡、洛岛红鸡及其杂交后代
的特异性IgY最高平均浓度有显著差异（D Carlander,2002)、B产蛋率和产蛋 间歇与IgY浓度、C蛋重及卵黄重、D营养影响免疫系统发育、免疫 机能状况和生产性能、E健康状况（SPF鸡群，起码应无免疫抑制 性疾病和垂直传播性疾病，对父母代IBD的免疫）
6.提纯方法的选择取决于IgY产量、纯度、费用要求和技 术水平。
7.常用ELISA测定IgY活性。
第二步用硫酸葡聚糖钠等进一步沉淀，提纯出纯度大于80%的IgY， 此时的IgY要低温或冻干保存；
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续（1）
第三步是精提法：使用凝胶渗透层析、阴离子交换层析或超滤方法 进一步纯化，获得纯度96%～99%的IgY。
3.Akita等建立的水稀释法：先在微酸条件下用水稀释卵 黄，分离出卵黄蛋白；再用盐析、超滤、乙醇沉淀、 凝胶过滤等进一步纯化IgY。
由于缺乏铰链区，两个抗原结合片段（Fab）紧密 排列，使IgY缺少韧性及功能种类，在确定条件下沉淀 及聚合反应能力降低（Warr等，1995），这使其具有 抵抗幼龄动物胃酸屏障的能力。 3.IgY能介导过敏反应，与哺乳动物的IgE相似。
卵黄抗体生产和应用技术
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（四） IgY相对IgG的优势
1.高度保守的哺乳动物蛋白质对禽有较强的免疫原性，且产生有效 免疫反应所需抗原量小（Danielpour.D,1993），如IGF-1，且免 疫应答快；
2.经加强免疫，卵黄中特异性IgY效价能维持数月奶至1 年；
3.一个卵黄约含100～400 mgIgY，一只产蛋鸡每年可获
得40～50gIgY（D .Carlander,2002），相当与30只家兔同期 内血清IgG 产量；
4.卵黄中抗原特异性抗体数量占IgY平均10%，范围是5% （抗胰岛素抗体）～28%（抗鼠IgG抗体），取决于免疫个体、免 疫程序及抗原的免疫原性；
2.用于诊断分析或纯化生物活性分子，或在人医临床上 则需要提高IgY纯度或提纯特异性IgY。
IgY纯化分三步：
第一步是粗提，将含有IgY的水溶性蛋白与水不溶的脂类和脂蛋白 分离，即除去脂质；方法有超滤、有机溶剂萃取、以及PEG、SDS 沉淀脂蛋白等，经粗提的上清液或水溶液中IgY含量占蛋白质的 15%；
卵黄抗体生产和应用技术
一、 生产技术
(一) IgY产生过程 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因素 (三）IgY结构特点 (四) IgY相对与IgG的优势 (五) IgY纯化、活性测
1.腔上囊是禽类特有的控制体液免疫的淋巴器官；
(一2.腔)上I囊g中YB产细胞生受过到抗程原刺激后分化成浆细胞，后者
2.免疫反应具有交叉性，血缘越近，交叉反应程度越高；由于结构 上差异，IgY 与IgG几乎没有交叉免疫反应，减少了非特异结合和 假阳性；减少非特异性结合使免疫学检测灵敏性提高（达50%）；
3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解能力 （相对于IgG），提纯后IgY在合适条件储存10年滴度没有损失 （Olovson等，1993），幼畜可以口服，经保护处理后成年动物也 可以口服，提纯后可以肌注（孙希琪，1995） ；
4.特异性抗体采用亲合色谱法纯化，离子交换层析法浓 缩；或用免疫亲合法直接从水溶液中提取。
5.普洛玛格公司的卵黄抗体纯化系统（Promega's EGGstract IgY）提供了快速和简易的IgY分离方法。 该系统能在约1小时内提取2～5mg/ml纯度75%的IgY。
卵黄抗体生产和应用技术
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续（2）