高免血清及卵黄抗体的制备技术
猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的制备
猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的制备作者：郭一陈洁金尔光等来源：《湖北畜牧兽医》2011年第11期摘要：进行了制备猪瘟－猪蓝耳病－猪圆环２型三联高免血清的试验。
试验采用三种疫苗对试验牛只进行多次免疫后，对其进行颈静脉采血和分离血清，并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全性试验，通过间接ＥＬＳＩＡ检测血清中的猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒三种抗体的效价。
结果显示，猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒抗体效价分别达到１∶２０５６、１∶１２８０、１∶１２８０，获得的三联血清无菌，且对仔猪安全，该血清有望为猪瘟、猪蓝耳病和猪圆环病的防治提供理想的生物制剂。
关键词：高免血清；免疫抑制；疫苗中图分号号：Ｓ８５９．７９＋７文献标识码：A 文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０11）11-0006-02经过多年的努力，我国养猪业生产水平已有了长足发展，但是随着国外猪种的引入，国内各猪场种猪调运频繁，许多猪病由原来的单一病原转变为多因子协同作用，加之免疫程序不当，疫苗质量良莠不齐等因素，使得猪病越来越复杂，尤其是免疫抑制性疾病为主的混合感染，给我国的养猪业造成了巨大的损失［１］。
免疫抑制性疾病对养猪生产造成的危害已引起了兽医科技工作者的广泛关注，目前研究确定的免疫抑制性病毒有猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒2型等，它们感染猪以后不仅造成原发病变，导致猪的免疫功能下降，从而继发感染其他疾病，还能致使常规疫苗接种后无法达到预期效果。
而在规模化猪场疫病发生早期，高免血清配合疫苗使用是防控疾病的有效措施之一［２］。
由于高免血清中含有较高的针对病原的特异性抗体，能与体内相应病原发生特异性中和作用，从而能有效地抑制免疫抑制性病原的致病作用，使机体恢复健康［３］。
针对目前普遍存在的猪瘟＋猪蓝耳病＋猪圆环病混合感染的现状，本研究拟筛选市场上保护效果良好的猪瘟疫苗、高致病性猪蓝耳病疫苗和猪圆环病毒2型疫苗制备三联异源高免血清。
该血清可为快速控制疫病的蔓延、减少养殖企业的损失提供新的方法，并对同类疾病的预防及治疗具有积极的示范作用。
卵黄抗体的特性及在兔病防治上的应用
2020.4卵黄抗体的特性及在兔病防治上的应用李高冰(甘肃省景泰县一条山镇畜牧兽医工作站730400)摘要:卵黄抗体是通过禽类特定性抗原来刺激B 淋巴细胞产生并移动到卵黄中的带有特异性质的抗体。
而且卵黄抗体有制作流程简单、生化性质较为稳定、产量高等优点,在动物的疾病防治上的应用极为广泛。
本文着重就卵黄抗体的特性及其在兔病防治上的应用进行探讨,希望能给卵黄抗体科研以及兔病防治带来帮助。
关键词:卵黄抗体;兔病;防治;应用作者简介:李高冰(1982.11-),男,甘肃省景泰县人,本科,助理畜牧师,主要从事畜牧兽医技术等方面的相关工作。
卵黄抗体,又可称为卵黄免疫球蛋白。
经过长期的研究发现,卵黄中卵黄抗体的浓度是极高的,而其他免疫球蛋白却在卵黄中的含量极少。
而卵黄蛋白凭借自身稳定性强、制作价格低廉,能够进行大规模生产等优势,能够很好的起到防治各种禽类的疾病的效果,并且这种治疗方式与我国大陆地区的禽类养殖条件与环境状况相契合,并且其发展趋势也是极好的。
而运用卵黄抗体来对兔病进行防治,就是一种极好的卵黄抗体的应用方向。
1卵黄抗体的特性1.1卵黄抗体的结构特点卵黄抗体分值量180kD,其结构与血清免疫球蛋白类似,都是由两条重链与两条轻链构成。
而且卵黄抗体与血清免疫球蛋白比较,前者没有铰链结构,因此结构会更加稳定,同时卵黄抗体比血清免疫球蛋白疏水性也更强,这是因为卵黄抗体中有着含量很高的脂类[1]。
另外,卵黄抗体的pH 在5.4~7.8之间,因此其有着耐酸的特性。
1.2卵黄抗体的作用机理卵黄抗体抗菌的作用机理是由于卵黄抗体能很好的依附在细菌细胞壁上,从而使细菌细胞壁受到破坏,阻碍细菌滋生与繁殖。
并且卵黄抗体还能与细菌毒素进行中和,从而缓解细菌毒素对动物机体的损伤。
与此同时,有一些卵黄抗体能被肠道消化酶降解成以易被肠胃吸收的肽类物质,而这些肽类物质能进入血液后与相应的病原因子融合,使得病原致病性丧失,进而防止易感染细胞遭受到病毒入侵[2]。
副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较
副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较翟玥;金明华;曲笑锋;庞博;李丽;徐坤;王梦涵;高孜博;宋佳音;宋秀玲【摘要】目的:通过比较聚乙二醇(PEG)沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法3种卵黄抗体(IgY)提纯方法的提纯效果,为批量提纯高质量IgY提供依据.方法:制备副溶血性弧菌灭活疫苗,采用肌肉多点注射法免疫高产蛋鸡,收集鸡蛋,分别采用PEG沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法对鸡蛋中的IgY进行提纯,比较3种提纯方法获得的IgY的蛋白质量浓度、抗体效价和纯度,结合操作过程、成本效益及安全性对3种提纯方法进行综合分析比较.结果:3种方法所提纯的IgY中,蛋白质量浓度从高到低依次为氯仿抽提法、氯仿/PEG法、PEG法;抗体效价相差不大,氯仿抽提法稍高;抗体纯度由高到低依次为PEG法、氯仿/PEG法、氯仿抽提法.PEG法安全性较好,但提取效率相对较低,成本投入较高;氯仿抽提法能够高效地从卵黄中获得IgY,但提取物中掺杂了大量的杂质蛋白;氯仿/PEG法提纯效率高,抗体纯度好,成本效益相对较高.结论:PEG法适用于实验室中少量IgY的提取;氯仿/PEG法的提取效率高,抗体纯度好,可用于批量提取高质量的IgY.%Objective:To compare the effectiveness between three methods for purifying the immunoglobulin of egg yolk(IgY) which are polyethylene glycol (PEG) method, chloroform extraction method and chloroform / PEG method, and to provide basis for obtaining the batch of IgY.Methods:The inactivated vaccine of Vibrio parahemolyticus (V. parahemolyticus) was prepared and the hens were immunized by multi-point intramuscular injection.The eggs were collected and the IgY was purified by PEG method, chloroform extraction method and chloroform/PEG method.The protein extraction rate, the IgY titer and the purity of the antibody which purified by different methods weredetected.Furthermore, the operation process, cost and safety of the three methods were analyzed.Results:The protein contents of the extraction belonging three methods from high to low in turn were chloroform extraction method, chloroform/PEG method, and PEG method.There was no significant difference in the antibody titer between three methods, and the tiler of chloroform extraction method was slightly high.The purities of purified antibody from high to low in turn were PEG method, chloroform/PEG method and chloroform method.The PEG method had better security but relatively lower extraction efficiency and higher cost.The chloroform/PEG method had high extraction efficiency and good antibody purity.Conclusion:The PEG method is suitable for a small amount of extraction in the laboratory.The chloroform/PEG method is appropriate for extracting the high quality IgY in a batch as it has high extraction efficiency and good antibody purity.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)002【总页数】5页(P441-445)【关键词】副溶血性弧菌;鸡卵黄抗体;聚乙二醇法;氯仿法【作者】翟玥;金明华;曲笑锋;庞博;李丽;徐坤;王梦涵;高孜博;宋佳音;宋秀玲【作者单位】吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021;吉林大学公共卫生学院卫生检验学教研室,吉林长春 130021【正文语种】中文【中图分类】S852.43鸡卵黄抗体 (immunoglobulin of egg yolk，IgY)是由母鸡血液中的 IgG 经过受体介导转移至卵黄中的一种免疫球蛋白[1]。
一种精制卵黄抗体的制备方法[发明专利]
![一种精制卵黄抗体的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0d11260986c24028915f804d2b160b4e767f8199.png)
(10)申请公布号 CN 102492035 A(43)申请公布日 2012.06.13C N 102492035 A*CN102492035A*(21)申请号 201110420124.1(22)申请日 2011.12.15C07K 16/02(2006.01)C07K 1/14(2006.01)(71)申请人天津济命生生物科技有限公司地址300384 天津市南开区兰苑路五号4号楼B 座303室(72)发明人张伟 赵钢 王国新 王智佳(54)发明名称一种精制卵黄抗体的制备方法(57)摘要本发明提供了一种精制卵黄抗体的制备方法。
本发明包括下列步骤：(1)收集经抗原强化免疫的产蛋鸡所产的鸡蛋；(2)分离出鸡蛋中的卵黄；(3)将聚乙二醇溶解于生理盐水中与高免卵黄按比例充分混合搅拌均匀，沉淀，取上清；(4)再按比例加入甲醛对卵黄抗体液进行再次脱脂，同时对卵黄抗体内微生物进行灭活，所得即为卵黄抗体。
此方法既保留了卵黄内的抗体，又对残留微生物进行了灭活。
大大提高卵黄抗体使用的安全性。
此方法成本低，获得卵黄抗体纯度高，操作简单。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 2 页1/1页1.一种精制卵黄抗体的制备方法，其特征在于：无菌取出高免蛋的卵黄，按比例加入聚乙二醇溶液，充分混合搅拌后静止取出上层清液，再在上层清液中按比例加入甲醛溶液进行灭活，制成去除卵黄磷脂，灭活卵黄内残留的其他微生物，制成安全有效副作用小的精制卵黄抗体。
2.一种精制卵黄抗体的制备方法，根据权利要求1所述，其特征是：具体步骤为：(1)高免蛋的消毒：高免蛋消毒：3～5％新洁尔灭消毒液浸泡30分钟，取出后用碘酊溶液再次进行表面消毒，最后用75％乙醇溶液进行脱碘及消毒。
放入超净台内晾干，备用；(2)无菌分离卵清与卵黄：在无菌条件下对步骤(1)消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂，打开，将卵清与卵黄分离开，将卵黄收集于灭菌容器内，封口；(3)称重卵黄：对步骤(2)的卵黄原液进行称重，得到y 克；(4)聚乙二醇溶液的配制：在无菌条件按步骤(3)中卵黄原液体积量取n 倍的无菌生理盐水(1＜n ＜5)；按卵黄原液重量y 克，称取x 克(m ％×y ＝x ，1＜m ＜5)的聚乙二醇。
免疫原和抗血清制备技术(ppt 51页)
鉴定
水中
一滴 乳剂
乳剂不散 浮于液面
卡介苗
弗氏完全佐剂
•作用大于不完全佐剂 •局部形成肉芽种和溃疡 •不能用于人体
4.佐剂应用原则和评价
•目的:①增强抗原对机体的免疫原性； ②增强抗体的产生能力； ③为制备出高效价的免疫血清； ④增强可溶性抗原的免疫原性； ⑤在某种情况下，改变Ag免疫应答类型； ⑥延长抗原在免疫动物的时间； ⑦改变抗原的分布； ⑧增强局部对变应原的超敏反情况；
2．氧化法和还原法 是将免疫球蛋白轻、重 链分开的两种常用方法。
3. 还可用强变性剂或利用改变pH将免疫球蛋 白亚单位分开。
酶水解免疫球蛋白示意图
胃蛋白酶 (pepsin)
Fc段，用 以制备抗 重链血清
F(ab’)2， 常作为抗 体试剂用 于试验
氧化法和还原法评价
1. 氧化法：优点是切开后，肽链不能重新 形成二硫键、便于肽链纯化； 缺点是色氨酸侧链容易被破坏。
干燥菌体 或湿菌体
水中 混匀
加热
激烈搅匀 冰水 加热5min 急冷
上层的水层(含LPS) 下层的酚层
离心 降至10℃以下
菌体残渣于底部
吸取
透析 浓缩
超速离心
水层
除酚
得纯化LPS 绞出 悬于水中
离心
LPS 在上层 沉淀的透明
胶状部内
免疫球蛋白片段制备
1．酶裂解法 酶对免疫球蛋白的水解有极好 的专一性，不同的酶可将免疫球蛋白裂解 为不同的片段。
2.载体：蛋白质类 多肽聚合物 大分子聚合物
3.半抗原-载体连接方法:
载体类型
1.蛋白质：人血清白蛋白、牛血清白蛋白、兔 血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白等。
2.多肽聚合物：人工合成的，常见的有多聚赖 氨酸，其分子量大（可达十几万到几十万)， 这种多聚物和半抗原结合后，可刺激免疫动 物产生高效价、高亲和力的抗体。