卵黄抗体的制作
IGY鸡卵黄免疫球蛋白
1概述卵黄抗体（yolk antibody, IgY）：通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。
2IgY的形成、作用机理与制备卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。
IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而IgG可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的IgG。
与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用，但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。
其等电点约为5.2。
IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。
IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。
IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。
将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。
卵黄抗体制备及应用
抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。
利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。
结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。
基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。
关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。
每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。
因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。
在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。
然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。
上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
鳗弧菌卵黄抗体的制备[设计+开题+综述]
![鳗弧菌卵黄抗体的制备[设计+开题+综述]](https://img.taocdn.com/s3/m/e7f4d907fd0a79563c1e72f6.png)
开题报告生物技术鳗弧菌卵黄抗体的制备一、选题的背景与意义鳗弧菌是一种对水产鱼类具有严重危害性的细菌病原。
目前，鳗弧菌引起的水产养殖动物疾病在世界范围内广泛流行，可感染鱼、虾、鳖类，并常给水产养殖业造成巨大的经济损失。
鳗弧菌在危及水产鱼类的同时，也会通过食物链危害人类健康。
因此，研究由鳗弧菌等弧菌引起的细菌性疾病的相关治疗方法具有重要的意义。
目前在动物细菌性疾病防治上使用抗生素过多，造成药物残留。
破坏环境的同时极大的打击了消费者的信心。
而近些年来卵黄抗体的发展为弧菌病的治疗提供了良好建议。
卵黄抗体，是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。
当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，母鸡经免疫应答后，可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量均一高效的卵黄抗体IgY。
它能预防和治疗多种细菌性和病毒性疾病,无任何毒副作用,在很大程度上可替代抗生素和化学合成药物,同时还具有促生长的作用。
卵黄抗体已成为特异性抗体最方便、最廉价的来源，在动物疾病防治上取得了喜人成绩。
本实验的目的是借鉴陆生人、畜、禽相关研究的成功经验，以纯培养的鳗弧菌作为抗原，探讨鳗弧菌卵黄抗体的制备技术,并研究其对人工感染的保护作用，以期对水产鱼类的细菌性疾病提供良好的治疗建议，并为水产鱼类的养殖生产提供指导意义。
二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：基本内容：1、培养鳗弧菌，制作灭活疫苗。
2、用鳗弧菌疫苗对蛋鸡多点注射，经初免和加强免疫后，收集鸡蛋。
3、由收集的鸡蛋纯化卵黄抗体4、检测纯化的卵黄抗体效价；拟解决的问题：借鉴陆生畜禽病原相关研究的成功经验，经多次免疫制备出抗鳗弧菌的高免鸡蛋，建立简易、高效的由鸡蛋纯化鳗弧菌卵黄抗体的技术，建立ELISA鳗弧菌卵黄抗体的技术。
三、研究的方法与技术路线：1、取实验室已分离、鉴定后保存的鳗弧菌菌种,经活化后扩大培养，离心沉淀、用PBS清洗后悬浮、计数；2、用甲醛对鳗弧菌进行灭活，经涂板检测确定灭活即为抗原鳗弧菌卵黄抗体的制备；3、选择健康蛋鸡，用上述抗原多点注射免疫，免疫3-4次；4、收集高免鸡蛋，用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化卵黄抗体；5、用ELISA进行卵黄抗体的效价检测。
猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的研制
2020.6作者简介:潘建波(1975.9-),男,广西柳州市人,大专,兽医师,研究方向:畜禽疾病临床诊治等。
猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的研制潘建波(广西柳州市动物疫病预防控制中心545001)摘要:选取猪流行性腹泻病毒感染组织制备灭活苗,免疫蛋鸡制备卵黄抗体,3次免疫后琼扩抗体效价达到1:32;经动物实验证实,卵黄抗体可有效抵抗猪流行性腹泻病毒强毒的攻击,试验为猪流行性腹泻病毒的有效防控奠定基础。
关键词:猪流行性腹泻病毒;卵黄抗体;试验验证猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻的致病源,是一种高度接触性、急性的传染性疫病,可感染各日龄猪,主要临床特征为呕吐、腹泻、发热、食欲不振、精神沉郁等,仔猪的死亡率高达80%以上,给我国的养猪产业造成巨大经济损失。
鉴于该病的流行病学特点及对小猪危害的严重性,提升小猪的被动免疫能力,将是控制该病发生与流行的关键环节[1]。
卵黄抗体在动物疫病预防与治疗方面已得到广泛的应用,具有成本低、易制备、使用方便的特点[2]。
本研究用经鉴定保存的PEDV 强毒,制备成灭活疫苗免疫产蛋鸡制备特异性卵黄抗体,旨在为更加有效地防控PEDV 提供技术支持和物质保障。
1材料和方法1.1试验用病毒PEDV 由本实验室分离并保存。
1.2试验用动物约180日龄产蛋鸡。
1.3PEDV 灭活苗的制备1.3.1水相制备取发病后留存仔猪肠道组织,按1:3比例加入灭菌的磷酸盐缓冲液继续研磨,8000rpm 离心15min,取上清,加入抗生素后,再按0.4%福尔马林混匀,于37℃灭活24h,每隔6h 摇匀1次,再加入4%吐温-80,匀浆5min,即为水相,2~8℃保存。
1.3.2油相制备按96:4比例混合取10号白油与司本,摇匀后再加入2%硬脂酸铝,121℃高压灭菌10min。
1.3.3疫苗制备以约3:1的比例混合油相与水相,搅匀油相5min,然后缓慢加入水相搅匀,加完后10000rpm 搅拌3min,静置72h 不分层判为疫苗乳化合格。
高免卵黄抗体的制备与应用的注意事项
高免卵黄抗体的制备与应用的注意事项高免卵黄抗体在医学研究和诊断中具有广泛的应用。
制备和应用这些抗体需要遵循一些重要的注意事项，以确保其质量和有效性。
以下是有关高免卵黄抗体的制备和应用的50条注意事项：1. 在开始前，确保已获得适当的伦理批准和许可证。
2. 确保使用健康的动物作为抗体生产的源头。
3. 使用合适的免疫佐剂来增强动物的免疫反应。
4. 避免使用过多的佐剂，以防止对动物免疫系统的不良影响。
5. 需要对动物进行充分的疫苗接种来激发免疫反应。
6. 在制备抗体的过程中需要充足的光照和良好的通风条件。
7. 保持动物舒适，提供足够的饮食和水源。
8. 在制备的过程中避免动物暴露于可能引起感染的环境。
9. 定期监测动物的健康状况，并在必要时进行治疗。
10. 使用可靠的免疫检测方法来监测抗体的产生。
11. 建立严格的动物记录，以跟踪抗体生产的动态。
12. 在抗体制备的过程中进行周期性的动物背景检查，以确保细胞株的纯度和稳定性。
13. 遵循良好的实验室实践，以确保实验结果的准确性和可重复性。
14. 使用合适的方法和试剂来分离和纯化抗体。
15. 避免不必要的抗菌药物使用，以避免对抗体产生影响。
16. 示例处理时避免冻融循环。
17. 存储抗体的过程中需要注意温度和湿度。
18. 根据实际需要将抗体储存为合适的浓度和容量。
19. 避免抗体遭受不必要的震荡或振动。
20. 对抗体进行定期的质量检查和测试。
21. 在使用抗体之前，确保其对目标分子具有特异性和亲和力。
22. 选择适当的方法和实验条件来检测抗体与靶分子的结合。
23. 遵循正确的实验步骤和实验设计来保证结果的准确性。
24. 使用适当的阴性和阳性对照来评估抗体的反应性。
25. 需要在适当的实验条件下进行抗体活性和稳定性的评估。
26. 在应用抗体之前，了解其最佳工作浓度和条件。
27. 优化实验条件以达到最佳的抗体-靶分子结合。
28. 在实验中使用适当的负对照来排除非特异性反应。
卵黄囊抗体制备及其应用研究进展
【关键词】卵黄囊抗体卵黄囊抗体即卵黄免疫球蛋白(Egg Yolk Immunoglobulin，IgY)是抗原免疫禽类后由卵黄中分离得到的特异性抗体。
与哺乳动物来源的IgG比较，卵黄囊抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好等优点，在疾病诊断、防治等诸多方面得到了广泛的应用，一直是生命科学相关科研领域的研究热点。
本文就卵黄囊抗体的分离纯化方法及其应用研究进展作一综述。
1 卵黄囊抗体的基本结构及其性质与哺乳动物血清免疫球蛋白相似，卵黄囊抗体的基本结构包括2条轻链和2条重链，分子量约为180kD。
卵黄囊抗体的疏水性大于IgG。
Lee和Kim等〔1,2〕研究表明，卵黄囊抗体具有良好的稳定性，对pH及酶等作用引起的失活效应有较强的抵抗力。
2 卵黄囊抗体的制备21 实验动物的免疫 Schwarzkopf等〔3〕研究结果表明：经皮下注射的方法比肌肉注射能产生更高滴度的抗体，免疫间隔时间对抗体的产生影响较大。
通常，初次免疫与第一次加强免疫之间的时间间隔至少4周。
另有研究分别于第0d，10周及15周免疫产蛋鸡，获得了高达1∶160000的抗体滴度。
22 卵黄囊抗体的分离从卵黄液中分离卵黄囊抗体的关键是除去卵黄中高含量的脂肪及脂蛋白，以获得水溶性组分(Water Soluble Fraction，WSF)。
根据纯度要求、技术工艺以及对环境的影响等因素，可以选择不同的分离方法。
常见分离方法包括以下几种。
221 水稀释法先将卵黄液用蒸馏水稀释10倍，调整pH值至50～52，4℃静置6h以上，上清液即为水溶性组分。
水稀释法工艺简单，若采用适当的方法进行纯化，可获得较高的回收率和纯度。
222 有机物沉淀法聚乙二醇(PEG)法是较常用的方法。
Bizanov和Normantiene〔4〕用仙台病毒免疫产蛋母鸡，收获高免鸡蛋。
以TBS作为缓冲液，将卵黄液稀释4倍后，加入35%的聚乙二醇6000，沉淀脂类，卵黄囊抗体保留在上清液中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
卵黄抗体的制作
卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
强阳性反应时，24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。
治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1-2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升/只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。
目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。
预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。
当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。
应用方法解冻：一般包装有500毫升、250毫升、100毫升瓶装。
要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时~4小时以上，反复振摇。
用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。
注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃~20℃），再皮下注射1毫升~2毫升。
先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。
注射1只鸡要换1个针头。
口服：将解冻后的卵黄抗体以1∶10的比例，加入凉开水或新鲜井水及适量的抗生素，制成混悬液，让鸡在半小时内饮完，并要备足饮水器，让鸡都有位置饮水。
注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。
使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。
卵黄抗体兑水后，应呈混悬液，不要添加电解质，破坏其结
构，使卵黄抗体失效。
兑水后饮用时，应先控制饮水，可根据气温高低确定，一般应控制饮水2小时~3小时。
在使用卵黄抗体防治鸡新城疫或传染性法氏囊病时，不得产生依赖思想，同时还要做好卫生、饲养管理和消毒工作，采取综合的防治措施，才能收到满意的效果。
爱情的世界里，究竟是什么样子？我曾经问了自己无数遍，我想象着，却给不出任何答案。
我只知道：我要遇见你，我渴望见到你,我要把全部的爱给予你！我为什么如此渴望爱情？因为我相信我们的爱情早已命中注定。
都说，住在爱情世界里的人会变傻，她的欢喜和忧愁都会牵动着你的心，她哭了，你会心疼不已；她高兴，你会开心一整天。
你会无时无刻的关注她的喜怒哀乐，第一时间回复她的消息，只要有时间,你的脑海里都是她的影子，为了让她开心快乐，做什么都是值得的。
从此，你的世界里最重要的人就变成了她。
有时候，你们也会吵架，可你从来不生气，因为你爱她，换作别人你会置之不理，而她的一句玩笑话你都会深思半天，到底是自己哪里做的不够好。
因为你怕她生气，怕她伤身，怕她不够幸福，你只想把全世界的爱都给她，这样的吵架让你更心疼、更深爱她。
而他也和你一样，小心翼翼的呵护你们的爱情，都愿意为对方付出，都愿意对方是那个被爱多一点的人。
爱情的世界里，没有对与错，只有爱与被爱，两个人都想多爱对方一点点,都想做那个爱的最深的人,她会把你放在心底，让你聆听她想你时的心跳，让你感受连呼吸的空气都有你的味道。
有人说，爱情有保鲜期，哪怕两个深爱的人，也逃不了魔咒。
还有人说，男人比女人更容易动情，也更容易放弃爱情，甚至移情别恋,而我却笃定爱情的世界里只有你和我 .
还记得吗？你曾经无数次问我，什么时候去看你，而我何尝不想时刻在你身边！或许我们的爱情就是适合天南海北各居一方，也许这才是我们爱情保鲜的秘籍，静静的欣赏，悄悄的守望，深深的爱着 .
最美的爱情莫过于，一起漫步夕阳西下，看岁月写满人世繁华，一起欣赏落日余晖，听时光吟唱岁月静好。