卵黄抗体的制作
卵黄抗体制备及应用
抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。
利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。
结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。
基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。
关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。
每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。
因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。
在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。
然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。
上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的研制
2020.6作者简介:潘建波(1975.9-),男,广西柳州市人,大专,兽医师,研究方向:畜禽疾病临床诊治等。
猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的研制潘建波(广西柳州市动物疫病预防控制中心545001)摘要:选取猪流行性腹泻病毒感染组织制备灭活苗,免疫蛋鸡制备卵黄抗体,3次免疫后琼扩抗体效价达到1:32;经动物实验证实,卵黄抗体可有效抵抗猪流行性腹泻病毒强毒的攻击,试验为猪流行性腹泻病毒的有效防控奠定基础。
关键词:猪流行性腹泻病毒;卵黄抗体;试验验证猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻的致病源,是一种高度接触性、急性的传染性疫病,可感染各日龄猪,主要临床特征为呕吐、腹泻、发热、食欲不振、精神沉郁等,仔猪的死亡率高达80%以上,给我国的养猪产业造成巨大经济损失。
鉴于该病的流行病学特点及对小猪危害的严重性,提升小猪的被动免疫能力,将是控制该病发生与流行的关键环节[1]。
卵黄抗体在动物疫病预防与治疗方面已得到广泛的应用,具有成本低、易制备、使用方便的特点[2]。
本研究用经鉴定保存的PEDV 强毒,制备成灭活疫苗免疫产蛋鸡制备特异性卵黄抗体,旨在为更加有效地防控PEDV 提供技术支持和物质保障。
1材料和方法1.1试验用病毒PEDV 由本实验室分离并保存。
1.2试验用动物约180日龄产蛋鸡。
1.3PEDV 灭活苗的制备1.3.1水相制备取发病后留存仔猪肠道组织,按1:3比例加入灭菌的磷酸盐缓冲液继续研磨,8000rpm 离心15min,取上清,加入抗生素后,再按0.4%福尔马林混匀,于37℃灭活24h,每隔6h 摇匀1次,再加入4%吐温-80,匀浆5min,即为水相,2~8℃保存。
1.3.2油相制备按96:4比例混合取10号白油与司本,摇匀后再加入2%硬脂酸铝,121℃高压灭菌10min。
1.3.3疫苗制备以约3:1的比例混合油相与水相,搅匀油相5min,然后缓慢加入水相搅匀,加完后10000rpm 搅拌3min,静置72h 不分层判为疫苗乳化合格。
高免卵黄抗体的制备与应用的注意事项
高免卵黄抗体的制备与应用的注意事项高免卵黄抗体在医学研究和诊断中具有广泛的应用。
制备和应用这些抗体需要遵循一些重要的注意事项，以确保其质量和有效性。
以下是有关高免卵黄抗体的制备和应用的50条注意事项：1. 在开始前，确保已获得适当的伦理批准和许可证。
2. 确保使用健康的动物作为抗体生产的源头。
3. 使用合适的免疫佐剂来增强动物的免疫反应。
4. 避免使用过多的佐剂，以防止对动物免疫系统的不良影响。
5. 需要对动物进行充分的疫苗接种来激发免疫反应。
6. 在制备抗体的过程中需要充足的光照和良好的通风条件。
7. 保持动物舒适，提供足够的饮食和水源。
8. 在制备的过程中避免动物暴露于可能引起感染的环境。
9. 定期监测动物的健康状况，并在必要时进行治疗。
10. 使用可靠的免疫检测方法来监测抗体的产生。
11. 建立严格的动物记录，以跟踪抗体生产的动态。
12. 在抗体制备的过程中进行周期性的动物背景检查，以确保细胞株的纯度和稳定性。
13. 遵循良好的实验室实践，以确保实验结果的准确性和可重复性。
14. 使用合适的方法和试剂来分离和纯化抗体。
15. 避免不必要的抗菌药物使用，以避免对抗体产生影响。
16. 示例处理时避免冻融循环。
17. 存储抗体的过程中需要注意温度和湿度。
18. 根据实际需要将抗体储存为合适的浓度和容量。
19. 避免抗体遭受不必要的震荡或振动。
20. 对抗体进行定期的质量检查和测试。
21. 在使用抗体之前，确保其对目标分子具有特异性和亲和力。
22. 选择适当的方法和实验条件来检测抗体与靶分子的结合。
23. 遵循正确的实验步骤和实验设计来保证结果的准确性。
24. 使用适当的阴性和阳性对照来评估抗体的反应性。
25. 需要在适当的实验条件下进行抗体活性和稳定性的评估。
26. 在应用抗体之前，了解其最佳工作浓度和条件。
27. 优化实验条件以达到最佳的抗体-靶分子结合。
28. 在实验中使用适当的负对照来排除非特异性反应。
鸡卵黄抗体_IgY_的制备工艺研究
工艺技术食品工业鸡卵黄抗体（IgY）的制备工艺研究任平国，徐启红漯河职业技术学院 （漯河 462000）摘 要对鸡卵黄抗体（简称IgY）的制备工艺进行研究。
通过低温乙醇沉淀、DEAE葡萄糖凝胶A-50离子交换层析、Tris-HCl缓冲液洗脱及Sephadex G200凝胶过滤等逐步纯化免疫球蛋白。
研究卵黄稀释倍数、pH值、乙醇添加量以及盐浓度对纯化效果的影响。
分离纯化后所得的提取物经检测IgY纯度可达98%。
用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定，效果良好，此方法能很好保持免疫球蛋白的活性。
关键词 鸡卵黄抗体(IgY)；乙醇沉淀；分离纯化Analysis on Preparationg Technologies of Immunoglobulin of Egg Yolk (IgY)Ren Ping-guo，Xu Qi-hongLuohe V ocational Technology College (Luohe 462000)Abstract This paper analyzes preparationg technologies of Immunoglobulin of egg yolk (IgY).Immunoglobulin can be purified gradually through the low temperature ethyl alcohol precipitation, Sephadex G-15 chromatography，A-50 ionic exchange chromatographic analysis, Tris-HCl buffer solution elution and Sephadex G200 gelatin filtration and so on. It has studied the influence on purifi cation of the yolk dilution multiple, the pH value, the ethyl alcohol recruitment as well as the salt density. After the separation purification and examination, the IgY purity in the obtained extraction can be reached 98%. Using Escherichia coli (E.coli) determine its activity, it’s good. This method can maintain the good activity of the immunoglobulin.Keywords immunoglobulin of egg yolk (IgY)；ethyl alcohol precipitation；separation and purifi cation鸡卵黄抗体，即鸡卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of egg yolk，简称IgY），具有不与人类补体结合[1]以及不与类风湿因子结合[2]等免疫学特性，现在已被广泛应用于免疫学诊断和医药等许多方面。
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卵黄抗体的制作
卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
强阳性反应时，24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。
治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1-2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升/只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。
目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。
预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。
当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。
应用方法解冻：一般包装有500毫升、250毫升、100毫升瓶装。
要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时~4小时以上，反复振摇。
用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。
注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃~20℃），再皮下注射1毫升~2毫升。
先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。
注射1只鸡要换1个针头。
口服：将解冻后的卵黄抗体以1∶10的比例，加入凉开水或新鲜井水及适量的抗生素，制成混悬液，让鸡在半小时内饮完，并要备足饮水器，让鸡都有位置饮水。
注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。
使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。
卵黄抗体兑水后，应呈混悬液，不要添加电解质，破坏其结构，使卵黄抗体失效。
兑水后饮用时，应先控制饮水，可根据气温高低确定，一般应控制饮水2小时~3小时。
在使用卵黄抗体防治鸡新城疫或传染性法氏囊病时，不得产生依赖思想，同时还要做好卫生、饲养管理和消毒工作，采取综合的防治措施，才能收到满意的效果。
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如果有一天，你发觉他们不再爱出门……也许是因为身体一天不如一天……
每个人都会老，父母会比我们先老。
当父母不能照顾自己的时候，很多事情做得不好的时候，请不要嫌弃他们，并请维持他们的“自尊心”.
当他们不爱洗澡时，请抽空定期帮他们洗身体，因为纵使他们自己洗也不可能洗干净；
当我们享受美食的时候，请替他们准备大小适当、容易咀嚼的一小碗。
他们不爱吃，可能是因为牙齿咬不动了。
曾经听到过这样一个说法：其实，每位母亲都是一位漂亮的仙女，她们有一件非常美丽的衣裳。
可是当她决定做某个孩子母亲的时候，当她准备呵护某个生命的时候，就会褪去这件美丽的衣裳，变成一名普通的女子，一辈子，平淡无奇。