肠道微生物的分离与鉴定方法
猪肠道微生物研究方法
猪肠道微生物研究方法
猪肠道微生物研究方法主要包括以下步骤：
1. 样本采集：采集猪肠道内容物样本，可以用于后续的微生物培养、基因测序等分析。
2. 微生物培养：将采集的样本进行微生物培养，以分离和鉴定不同类型的肠道微生物。
3. 基因测序：采用基因测序技术，对肠道微生物的基因组进行测序，以获取微生物的基因信息。
4. 生物信息学分析：对测序得到的基因数据进行生物信息学分析，包括菌种鉴定、基因功能预测等。
5. 统计分析：对实验数据进行统计分析，包括比较不同处理组之间肠道微生物组成和丰度的差异、分析微生物与猪生长性能之间的相关性等。
6. 结果呈现：将分析结果以图表或文字的形式呈现，并撰写研究报告或论文。
在进行猪肠道微生物研究时，需要注意以下几点：
1. 样本采集要具有代表性，尽可能采集不同生长阶段的猪肠道内容物样本。
2. 微生物培养和基因测序要遵循相关的实验操作规范和标准，以保证结果的准确性和可靠性。
3. 数据分析要结合猪的生长环境和生长性能等因素，进行综合考虑和解释。
4. 结果呈现要清晰明了，并按照论文或研究报告的规范进行撰写和整理。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程鉴定粪便中的大肠杆菌是一项十分重要的实验，它可以帮助我们评估肠道健康状况，检测是否存在致病性大肠杆菌的感染，对于疾病的防控具有重要意义。
下面，我将详细介绍一下分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程。
我们需要准备实验所需的材料和试剂。
材料包括培养皿、接种环、培养基等，而试剂包括洗涤剂、生理盐水、大肠杆菌特异性培养基等。
在实验开始前，我们需要确保实验器具和培养基无菌，并且消毒实验台面和使用的工具，以避免外界微生物的干扰。
我们需要进行样品的处理和制备。
取一定量的粪便样品，并将其进行振荡或均匀搅拌，使其中的微生物均匀分布。
我们将取一小部分样品进行稀释，目的是为了在培养皿上获得适当的菌落数，方便观察和鉴定。
接着，我们把经稀释处理后的样品加入到培养基中，使细菌能够在适宜的温度下进行培养。
大肠杆菌通常在37摄氏度下培养，因此我们需要将培养皿放入恒温箱中，在一定的时间后进行观察。
在培养的过程中，我们需要定期检查培养皿的状态，观察是否有典型的大肠杆菌形态的菌落出现。
除了观察菌落形态之外，我们还可以利用生化试剂进行鉴定。
通过添加特定的生化试剂，如甲酚红葡萄糖琼脂培养基、大肠杆菌的IMViC生化试剂等，可以帮助我们鉴定大肠杆菌。
这些试剂可以根据大肠杆菌的代谢特点，进行色素反应或气体产生反应，从而帮助我们确认目标菌株的身份。
我们需要进行进一步确认。
在鉴定出大肠杆菌后，我们可以利用进化树分析等生物信息学方法，对其遗传特征进行分析，以确保其准确性。
我们还可以进行致病性检测，通过PCR等分子生物学技术检测目标菌株是否携带致病因子，从而评估其致病性。
通过以上的实验流程，我们可以较为准确地分离鉴定粪便中的大肠杆菌。
这项实验的结果将为我们提供重要的信息，有助于评估肠道健康状况，及时发现致病性大肠杆菌的感染，为疾病的预防和控制提供重要依据。
肠道菌的分离与鉴定
肠道菌的分离与鉴定一、背景介绍肠道菌是指生活在人类肠道内的微生物群落，其中包括细菌、真菌、病毒等多种微生物。
这些微生物与人体之间存在着密切的相互作用关系，对于人体的健康和疾病发展都有重要影响。
二、肠道菌的分离方法1. 粪便样品采集：粪便是肠道菌分离的主要来源，采集前应注意卫生和消毒。
2. 菌落计数：将粪便样品经过稀释后接种在含有富营养成分的琼脂平板上，培养一段时间后进行菌落计数。
3. 纯化：从培养出来的单个菌落中挑选纯化出目标细菌。
4. 鉴定：通过形态学特征、生理生化特性和分子生物学方法等手段对目标细菌进行鉴定。
三、肠道菌的鉴定方法1. 形态学特征鉴定：通过观察目标细菌在琼脂平板上形成的形态和颜色等特征来进行初步鉴定。
2. 生理生化特性鉴定：通过对目标细菌的代谢特征、生长条件和对不同物质的反应等进行测试来进一步鉴定。
3. 分子生物学方法鉴定：通过PCR扩增目标细菌的特异性基因序列，或者进行全基因组测序等方法来进行高精度的鉴定。
四、肠道菌分离与鉴定的意义1. 研究肠道微生物群落结构和功能，探究其与人体健康和疾病发展之间的关系。
2. 为临床诊断提供参考依据，如对于某些疾病的诊断和治疗方案制定等。
3. 为微生物资源库建设提供重要数据，有助于保护和利用微生物资源。
4. 对于工业发展也有一定作用，如利用某些肠道菌进行发酵制品生产等。
五、肠道菌分离与鉴定存在的问题1. 样品来源不确定：粪便样品来源受到个体差异、食品摄入和环境污染等多种因素影响，可能导致结果不稳定。
2. 培养条件不确定：培养条件也会影响菌落的形成和生理生化特性表现，可能导致鉴定结果有误。
3. 鉴定方法存在局限性：不同的鉴定方法对于不同细菌有不同的适用范围，可能会漏检或误判。
六、肠道菌分离与鉴定的发展趋势1. 高通量测序技术的应用：利用高通量测序技术可以对肠道微生物群落进行全面深入地研究，揭示其更多的结构和功能信息。
2. 人工智能技术的应用：通过人工智能技术可以对大量数据进行处理和分析，提高分离和鉴定效率和准确性。
实验一大肠杆菌的培养和分离
操作时右手无名指和小指 夹住封口膜，另外三指持 三角瓶，左手拿培养皿并 打开上盖的一边，在酒精 灯火焰旁操作。
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（三）大肠杆菌的接种
将斜面上培养的大肠杆菌菌种用接种环接种到灭菌后的LB液 体培养基中，将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。
注意事项: 1.在火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌，冷却后方能取菌； 3.接种时右手拿着接种环，右手 无名指和小指夹住斜面的棉塞和 三角瓶封口膜； 4.取菌后封口膜和棉塞复原.
LB（Luria-Bertani）液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取液5g/L，
氯化钠10g/L。
（可用于大肠杆菌的扩大培养）
配制50mL的LB培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠 0.5g，加50mL水溶解。
LB（Luria-Bertani）固体培养基：50ml LB（Luria-Bertani）液 体培养基中再加入1g琼脂制得。（可用于大肠杆菌的划线分离） 固体培养基可根据需求制成平面或斜面。
培养基：一般 121℃灭菌15min 有葡萄糖：500g/cm2（90℃以上）灭菌30min 有尿素等不能加热的物质：G6玻璃砂漏斗（玻璃砂漏斗用
后需用1mol/L的HCl浸泡，抽滤去酸）
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
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大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
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• 实验器材
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（四）大肠杆菌的扩大培养
三角瓶在37℃，每分钟200转的摇床上振荡培养12h。
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（五）大肠杆菌的划线分离
1、操作步骤 （1）灼烧接种环； （2）接种环冷却后，从在摇床上培养了12h的菌液中蘸取菌液； （3）在近火焰处，用带菌液接种环在固体培养基上划线。
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
小鼠肠道菌群的检测方法
小鼠肠道菌群的检测方法小鼠肠道菌群的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两种。
传统培养法是利用胃荧光标记法、溶菌酶切法、超声法等手段分离和培养小鼠肠道中的细菌，然后通过形态、生理、生化等特性进行鉴定和分类。
这种方法简单易行，但由于绝大多数小鼠肠道菌群难以培养，所以对菌群的种类和数量了解有限。
相对来说，分子生物学方法更为常用和准确。
这些方法利用PCR、DNA测序和高通量测序等技术，对小鼠肠道中的微生物DNA进行直接分析，可以直观地获得菌群的组成、变动和功能信息。
下面将对分子生物学方法中常用的几种检测技术进行介绍。
1.16SrRNA基因测序法：16SrRNA基因是细菌特有的序列，其特点是保守区域与变异区域交替出现，可以用于细菌分类和种属鉴定。
通过提取小鼠肠道细菌的总DNA，利用特异引物扩增16SrRNA基因片段，然后进行测序和分析，可以获得菌群的组成和结构信息。
2.宏基因组测序法：该方法是指对微生物DNA中的所有基因进行测序和分析。
它可以提供更详细的菌群组成信息，并揭示菌群的功能潜力。
通过高通量测序技术，可以快速获取大量的测序数据，进而进行菌群多样性分析、物种丰度分析和功能注释等研究。
3.元转录组测序法：元转录组测序是一种综合了转录组学和宏基因组学的方法，它能够检测出微生物菌群在不同环境下的基因表达情况。
通过对小鼠肠道中的总RNA进行测序和分析，可以获得菌群的功能表达信息，如基因表达水平和调控机制等。
4.定量PCR法：这是一种相对简单和快速的方法，通过特异引物和荧光探针对感兴趣的细菌基因进行定量PCR分析，可以估计菌群中特定菌种的数量变化。
该方法可以用于研究菌群的动态变化和菌种的优势度等问题。
综上所述，小鼠肠道菌群的检测方法主要依赖于分子生物学技术，如基因测序、宏基因组测序和元转录组测序等方法。
这些方法具有高度准确性和广泛适应性，可以揭示小鼠肠道微生物群落的组成、结构和功能。
同时，这些方法的不断发展和创新也为小鼠肠道菌群的研究提供了更多的可能性。
家蚕肠道微生物的检测
家蚕肠道微生物的分离实验方法1、目的：对4-5龄的家蚕肠道进行解剖，分离出其中的微生物，进行培养纯化，最后得到单一的菌种，进行菌种鉴定分类。
2、材料及试剂2.1 供试材料供试家蚕品种为苏秀×春丰，桑叶品种为育711。
2.2 培养基肉汤蛋白胨培养基：蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化钠5 g、蒸馏水1000 ml煮沸后调节ph 7.2-7.4分装到三角瓶中，121 ℃高压灭菌15 min。
富集培养基:称取胰化蛋白胨1 g,酵母提取物0.5 g ,Na Cl g,溶解并定容于100 ml容量瓶中,转入锥形瓶中,高于灭菌,接种,摇床培养6 h。
2.3 主要试剂乙醇、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、稀释液为生理盐水3、试验方法3.1 菌种纯化与分离（1）将4-5龄蚕的头尾夹住，在70 %的酒精中浸泡几秒钟后，在酒精灯上燃烧，进行体表消毒，然后用灭菌剪刀剪开体表，取出中肠，将肠液小心挤入盛有9 ml稀释液的试管中，取肠液1 g。
（2）为了达到对蚕肠道微生物良好的分离效果，有必要对提取的肠液进行较好的稀释。
将4-5龄蚕肠液用灭菌生理食盐水按10-1、10-2、10-3、10-4浓度进行梯度稀释,各浓度稀释液取0.2 ml接种于12 cm 培养皿的肉汤蛋白胨培养基上,均匀涂布,37 ℃下培养2天，挑取单菌落，编号，观察菌生长情况。
根据的生长情况和菌落数，选取最佳稀释均匀浓度。
（3）将得到的菌落进一步纯化，直到镜检为单一菌为止。
将纯化好的菌接种到斜面培养基上进行保存。
3.2 菌种鉴定（1）菌落形态观察将纯化好的菌在相应的琼脂平板上划线，30℃培养箱中培养2天，待长出单菌落后，根据颜色、形状、大小、边缘、透明度、突起等。
（2）菌体特征的显微观察取一个干净的载玻片,在无菌操作条件下,用接种环挑取少许已活化的优势菌菌落均匀地涂布在载玻片上,室温条件下自然干燥。
接着,手执载玻片并使标本面朝上,在酒精灯外焰上快速通过3-4次,使标本固定在载玻片上。
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一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地衣）。
5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽孢杆菌。
1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。
2种注：境中生长最好。
最适温度为37～42℃。
在正常大气或无氧环境中均不能生长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。
三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养，1m3空间用焦性没食子酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸包好，放在圆柱上。
继而放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指示剂一管。
盖上缸盖并用石蜡封闭。
再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。
置于温箱37℃培养24一48h观察结果。
2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖,放入密封性较好的玻璃罐(用凡士林封口)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。
一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须小于1000ppm（千分之一），更严格的环境是小于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。
（1ppm即百万分之一）。
目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。
2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。
低温对一些厌氧菌有害。
1.采样和运输：同时间、同地点、同位置分别取两管平行粪样，可适量多取，一管做需氧菌分离和提纯，另一管做厌氧菌的分离和提纯；需氧菌按原方案用冰块运输，厌氧菌放置于厌氧生物袋常温运输（一般认为，低温对某些厌氧菌有害，并且氧的溶解度较高）。
2.保存: 标本送至实验室后，应尽快处理，最迟不超过24h。
需氧菌放置于4℃冰箱保存，厌氧菌放置于常温保存。
3.分离、纯化：需氧菌按原计划进行。
厌氧菌培养基中添加万分之五的半胱氨酸或硫化钠做还原剂，消除培养皿内部氧气。
1.一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。
2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。
低温对一些厌氧菌有害。
文献名称研究位置样品培养基种类培养条件培养时间培养温度微生物种类胃肠道菌群和胃肠黏膜屏障的检测胃肠道菌粪便选择性培养基，具体不详需氧，厌氧 24-72h检测菌株包括：双歧杆菌，拟杆菌，优杆菌，消化性球菌，乳杆菌及菌，肠杆菌，肠球菌，葡萄球菌，及酵母菌。
10种贵州小型猪胃肠道正常菌群的初步检测肠道菌粪便10种菌的选择性培养基和需氧、厌氧的非选择性培养基需氧，厌氧需氧菌:24-48h,厌氧菌:48-72h 37℃双歧杆菌，乳酸菌，拟杆菌，消化球荣球菌，梭菌，肠杆菌，肠球菌，葡萄球菌，酵母菌。
10种健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定肠道菌粪便普通琼脂培养基，甘油肉汤浸液琼脂，EC培养基，伊红美蓝培养基，乳酸杆菌选择培养基，生化试验用培养基需氧，厌氧 24-48h 37℃双歧杆菌，乳酸杆菌，酵母拟杆菌，芽孢杆菌。
5种健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析肠道菌粪便麦康凯琼脂，MRS增菌液，HYA琼脂，TYP琼脂需氧，厌氧需氧菌:24h,厌氧菌:48h 37℃大肠杆菌，乳酸杆菌，双歧杆菌。
3种健康与腹泻幼犬肠道菌群数量差异分析研究肠道菌粪便普通和SS琼脂培养基，甘油肉汤浸液琼脂培养基，MRS乳酸菌、EC肠球菌、EMB肠杆菌，TPY双歧杆需氧，厌氧 24-48h 37℃大肠杆菌，沙门氏菌选择培养基，麦康凯培养基，生化试验用培养基菌，肠球菌，乳酸杆菌，双歧杆菌。
5种健康鸽与腹泻鸽肠道菌群比较研究肠道菌取肠道MRS培养基，营养琼脂平板，双歧杆菌培养基，麦康凯培养基，EC培养基，生化试验培养基需氧，厌氧 24-72h 37℃芽孢杆菌,乳酸杆菌,双歧杆菌,大肠杆菌,肠球菌。
5种水貂粪便粪营养琼脂培养基，莫厌氧 48-72h 37℃乳酸乳酸杆菌的分离与鉴定便匹罗星锂盐改良MRS培养基，营养肉汤培养基，生化试验培养基杆菌，嗜酸性乳酸杆菌，干酪乳酸杆菌。
3种猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析粪便LB培养基，淀粉培养基，酪素培养基，羧甲基纤维素钠培养基。
需氧，厌氧 18-24 h 37℃嗜热脂肪芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌。
3种厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。
如有梭状芽孢杆菌。
7.疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。
疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境。
厌氧菌标本采集与送检必须注意两点：标本绝对不能被正常菌群所污染;应尽量避免接触空气。
1. 采集：采集标本须注意：不被正常菌群污染，并尽量避免接触空气。
采集深部组织标本时，需用碘酒消毒皮肤用注射器抽取，穿刺针头应准确插入病变部位深部，抽取数毫升即可，抽出后可排出一滴标本于酒精棉球上。
若病灶处标本量较少，则可先用注射器吸取1ml还原性溶液或还原性肉汤，然后再抽取标本。
在紧急情况下，可用棉拭取材，并用适合的培养基转送。
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长医。
用于厌氧菌培养的标本不同于一般的细菌培养，多采用特殊的采集方法，如针筒抽取等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
不同部位标本采集方法也各有不同特点。
2.送检方法与处理标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2 h，以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。
如不能及时接种，可将标本置室温保存(一般认为，冷藏对某些厌氧菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高)。
1)针筒运送：一般用无菌针筒抽取标本后，排尽空气，针头插入无菌橡皮塞，以隔绝空气，立即送检。
这种方法多用于液体标本的运送，如血液、脓液、胸腹水、关节液等医.2)无菌小瓶运送：一般采用无菌的青霉素小瓶，瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂，用橡皮盖加铝盖固定密封，排除瓶内空气，充以C02气体。
同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色，以判断瓶内是否为无氧环境，如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
3)棉拭子运送一般不采用棉拭子运送，如果使用该方法，一定使用特制运送培养基，确保无氧环境，确保不被污染，确保快速送检。
4)厌氧罐或厌氧袋运送将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质，确保无氧环境。
该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。
厌氧菌广泛存在于外界环境和人体的口腔、肠道和女性生殖道等部位，常引起内源性感染。
据文献报道，约60 % 的临床感染有厌氧菌参与，且大多数是与需氧菌混合感染，故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
一、厌氧菌样品的采集Collection of anaerobic bacteria' s speci mens标本避免正常菌群污染和氧接触，采用下列方法：(1) 脓胸及未破溃的脓肿：皮肤消毒后，以无菌注射器抽取(排尽空针及针头内的气体) ，将针头插入无菌橡皮塞内送检。
(2) 肺分泌物和痰标本：用支气刷采取或环甲膜穿刺术。
(3) 尿液标本：用无菌注射器从耻骨上缘行膀脱穿刺术抽取。
(4) 血液标本：可用两端接有无菌针头的塑料袋或橡皮导管，将一端针头刺入静脉，待血液流出后将另一端针头立即插入培养瓶内(瓶内负压) ，使血液直接流入培养瓶内。
(5) 窦道、深部脓肿等的标本:可用特别采样器采取。
二、涂片与染色Smear preparation and stain标本涂片、革兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，并估计标本中大致的含菌量，可用"少量”" + "、" ++ "、" + ++"、" ++++ "表示。