间接抗人球蛋白试验标准操作规程

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抗球蛋白试验标准操作规程

抗球蛋白试验标准操作规程1.检验目的保证抗球蛋白试验符合要求。

2.检验方法本试验包括“直接抗球蛋白”和“间接抗球蛋白”试验。

2.1直接抗球蛋白试验2.1.1原理患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。

但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接红细胞，仅使红细胞处于致敏状态。

加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸附的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见的凝集。

这种直接检测体内被抗体或(和)补体致敏红细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。

直接抗球蛋白试验主要用于检查受检红细胞是否在体内已被抗体或者补体致敏，用于新生儿溶血病，溶血性输血反应，自身免疫溶血性贫血，药物诱导溶血性贫血等检查。

2.1.2.标本EDTA抗凝的静脉血2.0ml。

2.1.3.试剂多特异性抗球蛋白试剂、抗IgG、抗C3d；2.1.4.器材离心机、小试管、刻度吸管或加样器（50～200μl）、37℃水浴箱等。

2.1.5.操作步骤2.1.5.1.取3支试管分别加入多特异性抗球蛋白试剂、抗IgG、抗C3d试剂各1滴，然后再加1滴受检者三洗后的2-3%红细胞悬液，混匀。

2.1.5.2.各反应管以3000r/min离心10秒，持一定的角度轻轻地摇动试管直到松动所有细胞。

先用肉眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察。

2.1.5.3.对照：用IgG致敏细胞（抗D血清加Rh阳性细胞，37℃水浴30分钟，洗3次配成3%红细胞盐水悬液）作为多抗及单抗IgG的阳性对照，阴性对照用正常人AB型血清与正常人“O”型红细胞反应。

2.1.6.结果判断先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无凝集，阳性对照管出现＋＋＋～＋＋＋＋凝集，说明检测管结果可信。

如被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。

如实验结果阴性要加试剂对照细胞检查，对照阴性实验结果可靠。

2.1.7．注意事项2.1.7.1.标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞中丢失。

抗人球蛋白试验标准操作规程

抗人球蛋白试验标准操作规程1.目的为规范抗人球蛋白试验（Cooms试验）的技术操作，保证试验结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。

2.适用范围适用于输血科（血库）进行抗人球蛋白试验。

3.职责输血科（血库）技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。

4.原理利用抗人球蛋白试剂可与致敏在红细胞上的抗体和（或）补体结合，使红细胞出血肉眼可见的凝集的原理，检测红细胞是否被抗体和（或）补体致敏。

5.所需设备和试剂设备普通离心机，血型血清学专用离心机，电热恒温水浴箱，普通显微镜。

试剂抗人球蛋白试剂（多特异性或单特异性），IgG抗-D试剂，AB型血清（红细胞不规则抗体筛选阴性），10%O型、RhD阳性红细胞悬液。

6.检测环境条件室温应保持在18-27℃，湿度应保持30%-70%。

7.步骤与方法7.1抗人球蛋白试验阴、阳性对照及DAT阳性红细胞的制备7.1.1抗人球蛋白试验阴性对照：取3%O型、RhD阳性红细胞悬液50ｕl,加入AB型血清（红细胞不规则抗体筛选阴性）100ｕl，37℃孵育30min，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min后镜检应无凝集。

7.1.2 抗人球蛋白试验阳性对照及DAT阳性红细胞的制备：取10%O型、RhD阳性红细胞悬液100ｕl，加入IgG抗-D试剂600ｕl，37℃孵育30min，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入生理盐水500ｕl，配成浓度约为2%的红细胞悬浮液备用，取该红细胞悬液50ｕl加抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min后肉眼观察红细胞应显凝集（阳性对照）。

配制的2%红细胞悬液即为DAT阳性红细胞悬液。

7.2 DAT步骤试验管取受检者3%红细胞悬液50ｕl，用生理盐水充分洗涤3次，每次洗涤后将盐水倒尽，以滤纸将管口残余的盐水吸去，最后1次洗涤滤干后加入抗人球蛋白试剂100ｕl，混匀，以120g离心1min，肉眼观察有无凝集，若不见凝集，以显微镜观察，并记录结果。

抗人球蛋白实验步骤

抗人球蛋白实验步骤
抗人球蛋白实验是一种常用的免疫学实验方法，以下是一种常见的实验步骤：
1. 准备实验材料：包括待检样本、抗人球蛋白抗体、标记有荧光物质的二抗、缓冲液和试管等。

2. 样本处理：待检样本（如血清、尿液等）需要进行预处理，例如离心等操作，以提取样本中的球蛋白。

3. 制备工作液：根据实验要求和所使用的抗体种类，配制合适的缓冲液。

4. 样本和标准品的加样：将待检样本和不同浓度的标准品加入试管中。

5. 加入抗体：向每个试管中加入特异性的抗人球蛋白抗体，与样本中的球蛋白结合形成免疫复合物。

6. 反应：将试管放置在适当的温度和时间下，使抗体与球蛋白反应。

7. 洗涤：用适当的缓冲液洗涤掉未结合的抗体和其他杂质。

8. 加入二抗：加入标记有荧光物质的二抗，与抗人球蛋白抗体结合。

9. 再次洗涤：用缓冲液洗涤去除未结合的二抗。

10. 测定：使用荧光分析仪等设备进行测定，检测样本中荧光强度的变化。

11. 数据分析：根据测定结果，计算出样品中球蛋白的浓度。

以上是抗人球蛋白实验的一般步骤，不同实验目的和实验方法可能会有所不同，具体操作的详细步骤应根据具体实验方案进行。

抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。

直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。

正常结果：均为阴性。

临床意义：阳性见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、药物致免疫性溶贫、输血引起溶贫和新生儿同种免疫性溶贫。

阴性不能排除免疫性溶贫。

试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。

2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。

4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。

直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。

间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序

间接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序1. 试验原理和目的将抗球蛋白血清加入巳经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝集。

指导间接抗人球蛋白试验（IAT）。

2. 样本收集和贮存2.1 标本采集：采集静脉血（患者与AB型血各3～5ml，O型血2ml）。

2.2 标本的抗凝与存放时间：O型血EDTA.K2抗凝，余不抗凝，立即进行实验。

2.3 拒收标本规定：拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。

2.4储存条件及时间：采完标本立即送检，标本禁忌放入4℃～8℃冰箱中，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。

血清标本不能含有纤维蛋白，否则出现假阳性反应。

已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。

3. 试剂3.1抗球蛋白血清（广谱及单价）本科使用上海血液生物医药有限责任公司的抗IgG、C3d（多特异性），抗IgG，抗C3d。

3.2 受检血清。

3.3 5% O型红细胞悬液。

3.4 不完全抗D血清。

3.5 AB型血清。

3.6 5% D阳性红细胞悬液。

3.7生理盐水。

4. 仪器4.1 日本OLYMPUS CX31普通光学显微镜。

4.2 SSW型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5. 操作步骤5.1 取试管3支，标明受检管、阳性对照管及阴性对照管。

5.2 按下表将各反应物加入相应试管内。

反应物受检者阳性对照阴性对照受检血清 2滴 - -5% O型红细胞悬液 1滴 - -不完全抗D血清 - 2滴 -AB型血清 - - 2滴5%D阳性红细胞悬液- 1滴1滴5.3 混匀，离心，检查溶血或凝集。

置37℃水浴1h，离心，检查溶血或凝集。

用生理盐水洗涤3次（3000rpm，1分钟）。

末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。

每管各留红细胞悬液1滴。

5.4 每管各加抗球蛋白血清2滴，混匀，3000r/min离心15秒，观察结果。

16 间接抗人球蛋白微柱凝胶法操作规程---作业指导书

1.1 微柱凝胶试剂卡的准备观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，将卡放置平衡至室温，使用前置离心机3000r/min 1 min离心。

1.2 检测标本的准备
1.2.1 待检标本的准备：将待检全血标本，离心分离红细胞与血浆（血清），取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。

1.2.2 红细胞悬液的制备：将待检制备1%红细胞低离子介质或生理盐水悬液。

操作步骤
2.1 将准备好的抗人球蛋白检测卡做好标记。

2.2 撕开卡封膜,于反应腔中侧待检1% 红细胞、悬液50μl，加待检血浆（血清）50
2.3 将加样后的检测卡，置37℃中孵育15分钟。

2.4 将检测卡取出，置离心机1000r/min 2min， 1800r/min 3 min离心
2.5 取出，按下表判断：
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。

抗人球蛋白试验操作规程

抗人球蛋白试验操作规程临床输血质量管理体系文件名称：抗人球蛋白试验标准操作规程持有部门：输血科医务科制订者：××××××制订日期：××年××月××日执行日期：××年××月××日审核者：×××审核日期：××年××月××日版本/修改状态：A/0技术性规程文件编号：HZYY-CBT/SOP 003核准者：×××核准日期：××年××月××日文件页数:共3页文件性质：□普通□限制（仅限本院范围，未经授权）抗人球蛋白试验操作规程抗人球蛋白试验（又称Coombs试验）分为直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验，直接抗球蛋白试验是直接把抗球蛋白加入患者的红细胞悬液中，若红细胞已被抗体致敏便出现凝集，用以检测红细胞表面结合的抗体，如新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血的检查。

间接抗球蛋白试验是将已知（未知）抗原的红细胞和未知（已知）抗体的血清混合，然后加入抗球蛋白血清，若抗原抗体相对应，即出现可见的红细胞凝集。

用以检测游离于血清中的抗体，亦可用已知抗原的红细胞检测血清中的相应抗体效价，输血前的交叉配血或不相容输血后的抗体测定。

抗球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测定补体组分（C3C49.1目的标准抗球蛋白实验的技术操作，包管实验成效的准确性，为临床举行诊断及治疗供给依据。

9.29.39.49.5职责输血科(血库)技术人员负责抗球蛋白试验。

合用范围合用于临床须举行抗球蛋白实验的各种血标本。

原理所需材料和设备9.5.1材料抗球蛋白试剂、IgG抗-D抗体、AB型血清、3%Rh（D）阳性红细胞悬液、患者血标本。

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间接抗人球蛋白试验标准操作规程
(微柱卡式法)
一、目的
为规范抗人球蛋白（Coombs 试验）的技术操作，保证试验的结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。

二、使用范围
适用于输血科进行抗人球蛋白试验的操作。

三、职责
输血科技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。

四、原理
利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。

五、试剂及材料
(一)试剂：抗人球蛋白检测卡（西班牙 Diagnostic Grifols,S.A公司生产）、IgG 抗D、正常人AB血清
(二)设备：戴安娜专用离心机（型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器、离心机、试管等
六、标本要求：
(一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml,在3000r/min条件下离心5分钟备用。

(二)标本保存：血液样本必须密封，2-8℃保存7天。

七、操作步骤
(一)标本及其他试剂处理：
1、实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于戴安娜专用离心机离心9分钟左右，取出待用
2、离心标本取血清备用（或准备已知抗体的血清）
3、配制1%已知抗原红细胞悬液（或1%受检红细胞悬液）
4、1%D阳性红细胞：任选3个O型D阳性红细胞混合，配成1%红细胞悬液
(二) 在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名、病房床号、阴性和阳性对照，撕掉卡上的封条
(三)按下表将各种反应物加入相应反应孔中。

间接抗人球蛋白试验操作步骤
反应物待测孔阳性对照孔阴性对照孔血清（已知或受检）25ul －－
1%红细胞悬液（受检或已知）50ul －－
IgG抗D血清－25ul －
1%D阳性O型红细胞悬液－50ul 50ul
AB型血清－－25ul
(四) 将卡放入37℃孵育箱15分钟，移出放入离心机9分钟，取出观察结果。

八、结果判定：
阳性对照孔凝集，阴性对照孔不凝集，待测孔凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体（或受检红细胞上有相应抗原），待测孔不凝集为阴性。

如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。

九、注意事项：
如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。