基于Gateway技术的植物表达载体的构建

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利用Gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库

利用Gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库李晨;沈海涛;张煜星;王爱英;祝建波【摘要】以天山雪莲为材料,利用gateway技术构建天山雪莲cDNA表达文库.从经低温处理后的天山雪莲叶片中提取并分离mRNA,合成双链cDNA;cDNA经BP 重组反应重组到入门载体pDONR222上,构建得到天山雪莲entry cDNA文库;天山雪莲entry cDNA再经LR重组反应将雪莲cDNA重组到植物表达载体pLEELA 上,从而构建了天山雪莲cDNA表达文库.结果表明:cDNA入门文库滴度达到1.2×107 cfu/mL,文库总容量为4.8×107 cfu.表达文库的滴度为6.9×106cfu/mL,文库总容量为2.76×107 cfu,插入片段平均大小1000 bp.阳性克隆率100%.天山雪莲cDNA表达文库的建立为进一步高通量筛选天山雪莲抗寒基因奠定了基础.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(028)005【总页数】3页(P534-536)【关键词】天山雪莲;cDNA入门文库;cDNA表达文库;gateway技术【作者】李晨;沈海涛;张煜星;王爱英;祝建波【作者单位】石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,石河子,832003【正文语种】中文【中图分类】Q785%S580.1Abstract:The construction of a cDNA library ofS aussurea involucrataKar.et Kir using gateway technology was reported in this paper.The mRNA was isolated from Saussurea involucrata Kar.et Kir leaves.Then the double-strand cDNAs(ds-cDNAs)was synthesized.The ds-cDNAs were cloned into pDONR222 vector using BP reaction of Gateway cloning technology,and the entry clone was ing the LR reaction of Gateway cloning technology,the plant express vector pLEELA was ligated with the entry clone.Results showed that the entry cDNA library constructed in this report has a high titer of 1.2×107cfu/ml and contain a total clones of 4.8×107cfu and the expression library show a high titer of 6.9×106cfu/ml and contains a total clones of 2.76×107cf u,with an average inserts size of 1000bp.This cDNA library provides an important tool for filtrate the cold resistant genes.Key words:Saussurea involucrataKar.et Kir;cDNA entry library;cDNA expression library;gateway technologyGateway克隆技术是利用细菌λ噬菌体的整合酶-切除酶反应系统创建一种通过体外特异位点重组反应[1-2],并在该重组系统的基础上进行一系列修饰、改造,提高了这一重组系统的效率与特异性[3]。

基于Gateway技术的表达载体构建

基于Gateway技术的表达载体构建基于Gateway技术的表达载体构建1. Gateway-T载体（pGWC）的酶切反应pGWC除具有传统T载体的克隆功能外，还可以作为入门克隆（Entry Clone）与Gateway 重组克隆技术兼容。

该载体中的ccdB基因编码一个能够使大多数E. coli致死的毒蛋白，可作为重组子的负选标记取代了蓝白斑筛选。

该载体在使用前，需经过AhdI（实验中采用其同裂酶Eam1105 I）酶切，使载体两端产生5’T，用与PCR产物的两端的3’A互补。

PCR产物回收后与pGWC载体连接，挑取正向克隆送测序。

pGWC载体的酶切反应体系如下：pGWC10 μl（约2μg）10×Eam1105 I Buffer5 μlEam1105 I2 μlddH2O34 μl共计50 μl将反应混和液于37℃温育6h。

取1μl酶切反应液走1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果，估测载体片段的浓度，该酶切反应液可直接用作连接无需纯化。

2. PCR产物的回收与连接反应PCR产物用琼脂糖凝胶回收试剂盒（北京天根生化科技有限公司）进行回收，与pGWC载体进行连接。

DNA片段与pGWC-T的连接：pGWC-T1μl（约50ng）DNA回收片段4μl（600bp片段约需40ng）Solution I （TaKaRa）5μl共计10μl反应混合液于4℃下连接过夜（约12~16h）。

3. 连接产物的转化取大肠杆菌DH5α感受态细胞（50μl/管）于冰上融化，加入5μl 连接产物，用移液器轻轻吸打混匀，在冰上放置30min，42℃水浴热激90s，冰上放置5min，加入无抗生素的LB培养基300μl，37℃，160rpm振荡培养45min，将菌液铺在氯霉素抗性（25mg/L）LB平板上，在超净台吹干后37℃倒置培养过夜。

4. LR反应与表达载体构建表达载体均采用Gateway重组克隆技术构建，目标基因连入pGWC后即为入门克隆（EntryClone），通过与表达载体做LR反应构建目标基因的表达载体。

以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建

doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2010．01．008研究报告以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建阎淑滑，周波，赵霞，李玉花东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室，黑龙江哈尔滨150040［摘要］目的：构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。

方法：克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因，利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector（pH7WG2D）中酶切位点XbaⅠ和Hin dⅢ之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR－ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中，构建表达载体pCAMBIA1301－xylA－GW，利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应，获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301－xylA－HY5，并导入根癌农杆菌LBA4404中。

结果：抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301－xylA－HY5。

结论：利用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体，可简化、方便植物转基因表达载体构建。

［关键词］Gateway技术；木糖异构酶基因；LR反应；植物表达载体［中图分类号］Q78［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2010)01－0035－04Construction of Gateway Plant Expression Vectors with xylA Gene as Selection MarkerYAN Shu－Hua,ZHOU Bo,ZHAO Xia,LI Yu－HuaDepartment of Developmental Biology,College of Life Sciences,Northeast Forestry University,Harbin150040,China［Abstract］Objective:To construct plant expression vector with xylose isomerase gene xylA as the selection marker used in Gateway technology system．Methods:First,xylA gene was cloned from Escherichia coli,and was constructed into pCAMBIA1301by substituting for hpt gene．Second,the fragment including P35S,T35S,attR1,at-tR2and CmR－ccdB of the Gateway Binary Vector(pH7WG2D)was cut by XbaⅠand Hin dⅢand was recombi-nanted into the expression vector pCAMBIA1301－xylA．Third,the donor vector with HY5gene［cloned from‘Tsu-da’Turnip(Brassica campestris L．ssp．rapa)after BP reaction］was mixed with pCAMBIA1301－xylA－GW vector by LR reaction．Then,the recombinant plasmid was transformed into Agrobacterium tumefaciens LBA4404by electro-poration．Results:The plant expression vector pCAMBIA1301－xylA－HY5for Gateway technology system was suc-cessfully constructed by identification．Conclusion:The results showed that it is convenient to construct non－an-tibiotic marker plant expression vector by using xylA as selective marker and Gateway cloning technology．［Key words］Gateway cloning technology;xylose isomerase gene;LR recombination reaction;plant expression vector目前，随着植物转基因技术的飞速发展，已获得了大批转基因植物，但是伴随着转基因作物的广泛推广，人们开始对转基因植物中抗性标记基因的安全性产生越来越多的顾虑[1－4]。

GatewayTM系统快速构建番木瓜环斑病毒CP和CI基因的反向重复序列表达载体1

min, 然后 94 ℃ 变性 30 s, 55 ℃ 退火 30 s, 72 ℃ 延伸
1 min，30 个循环，以鉴定基因是否真正重组到
pDONRTM221 中，代替了
基因的位置。
1.2.5 利用 LR 重组反应创建表达克隆利用 LR
克隆酶 LR ClonaseTM 域催化入门克隆与目的载体之
间的重组反应。将入门克隆 pDONRTM221 、目的
当表达载体的质粒 DNA 经玉酶切消化时，琼
脂糖凝胶电泳可观察到长度约为 1 700 bp 的片段产
生(图 4，b)。1 700 bp 是 LR 重组反应发生后，两个反
向重复的基因长度加上两个内含子长度及
长度之和。PCR 扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳分
析，表明：在引物对（P35S 和 PT1）和（Pocs 和 PT1）的作用下，可分别扩增获得 582 和 773 bp 的 DNA 片段（图
进行 PCR 扩增，获得侧翼含有位点的基因
扩增产物（图 2）。
图 2. 基因的 PCR 产物的凝胶电泳分析
Fig.2. Gel electrophoresis analysis PCR products of gene
M, DL2000 marker;1 和 2, 917 bp 的基因片段。
上清，用 20 滋L TE 缓冲液溶解残留物。该纯化过程
可以去除 300 bp 以下的片段，包括含的引物及
其引物二聚体。
1.2.4 利用 BP 重组反应创建入门克隆用侧翼含
有 B 位点的 PCR 产物与受体载体 pDONRTM221
进行重组反应，预先，将受体载体 pDONRTM221 转
化 DB3.1 感受态细胞，并提取质粒 DNA。根据试剂

科技论文文献综述

科技论文课程综述题目：几种植物转基因表达载体的构建方法姓名: 保勇学院：农学院班级: 生物技术102班学号: 103135202几种植物转基因表达载体的构建方法作者：保勇指导老师：郭庆元摘要：表达载体的构建在植物基因工程研究中占据重要地位直接关系到目的基因的表达效果，本文比较分析了5种不同载体构建方法的特点，给出了不同载体构建方法的适用性建议，在构建多片段连接的复杂的大载体时采用相应的复杂载体构建技术在已获得无选择标记的转基因植株时采用三段T-DNA构建方法构建载体在做基因功能验证时采用的Gateway技术非常简单的载体构建可以采用传统的酶切连接的构建方式。

现在的主流构建载体方式是利用结合其他手段Gateway技术未来载体的发展趋势将是无酶连接。

关键词：载体构建：Gateway技术三段：T-DNAApproaches of Constructing Expressional Vectors Utilized inPlant GeneticTransformationName:BAO YongAbstract ：Construction of Expression Vector occupy an important position is directly related to the effect of target gene expression in plant genetic engineering, comparative analysis of five different vector construction method is characterized by given different vector construction applicability of the method recommended, build morecomplex large vector fragment connection when using the corresponding complex vector construct technology has marker-free transgenic plants using three sections of T-DNAbuild method to build carrier do gene function validation using the Gateway technology is very simple and the carrier buildenzyme digestion and ligation built. The the mainstream build carrier is using Gateway technology in combination with other means of the development trend of the future carrier enzyme-linked.Key words :construction ; vector ; gateway ; three T- DNAs ;在植物基因工程研究中,载体是携带靶DNA 片段进入宿主细胞进行扩增和表达的媒介,没有载体,目的基因无法进入受体,即使进入受体细胞也无法表达[1] 。

利用Gateway技术快速构建棉花GhANS基因植物表达载体

利用Gateway技术快速构建棉花GhANS基因植物表达载体孙宏伟;李艳军;王雅琴;刘永昌;薛飞;孙杰【摘要】[目的]为了进一步探讨GhANS(花色素合成酶)基因的上调表达对彩色棉纤维色素合成的影响,构建了棉花GhANS基因的植物表达载体.[方法]利用Gateway技术的同源重组原理,将GhANS基因通过BP反应和LR反应分别重组到植物过表达载体pGWB17与干扰表达载体pANDA35HK中.[结果]经PCR和酶切鉴定,PCR扩增片段与酶切片段大小与预期结果相一致.[结论]基于Gateway技术的棉花GhANS基因的过表达载体和干扰表达载体已构建成功,为进一步研究该基因的功能及棉花的遗传转化奠定了基础.【期刊名称】《新疆农业科学》【年(卷),期】2013(050)010【总页数】6页(P1773-1778)【关键词】彩色棉;花色素合成酶;Gateway技术【作者】孙宏伟;李艳军;王雅琴;刘永昌;薛飞;孙杰【作者单位】石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学生命科学学院,新疆石河子832003;石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子832003【正文语种】中文【中图分类】S562;S188.10 引言【研究意义】近年来随着人们健康和环保理念的增强，彩色棉引起了广泛关注。

彩色棉纤维颜色的形成与色素合成酶基因在纤维细胞中的特异性表达有关[1，2]，克隆与鉴定彩色棉色素物质生物合成途径中的相关酶基因，可为解析色素形成机制和利用基因工程手段改良彩色棉纤维色泽品质提供目标基因和理论基础。

【前人研究进展】花色素合成酶（Anthocyanidin synthase，ANS）是类黄酮化合物合成途径中的关键限速酶之一，它能够催化无色花色素生成有色花青素，再进一步转化为花色素苷，在植物的颜色形成过程中起重要作用。

Gateway技术构建棉花GhSAMDC基因植物表达载体

第３Ｏ卷第２期２１０２年４月
石河子大学学报（自然科学版）ＪｕｌｆｈｈｚＵｎｅｓｙＮａｒｌｃｎｅｏｍａｏｉｅｉｒｉ｛ｔａＳｉｃ）Ｓｉｖｔｕｅ
Ｖｏ．ＯＮｏ２１３．
Ａｐｒ２１．０２
ＣｏｔｎＵｓｎｇＧａｅｙＴｅｈｎｌｇｔｏｉｔｗａｃｏｏｙ
ＧＥＮＧｅｄｎＬｎｕＺＨＡＮＧｎｕＳＷｉｏｇ，ＩＹａｊｎ，Ｘｉｙ，ＵＮｉ，ＨＵａｕＪｅＺＨｕｇｏ
（ｏｌｇｆＡｇｉｕｔｒ，ｈｈｚＵｎｖｒｉｙＴｈｙＬａｏａｏｙｏｓｓＥｃ — ｒｃｌｕｅＸｉｊｎＣｌｅｏｒｃｌｕｅＳｉｅｉｉｅｓｔ／ｅＫｅｂｒｔｒｆＯａｉｅｏＡｇｉｕｔｒ，ｎｉｇａ
ｂｅｃｉｎＡｆｅａＩａｄＸｈｅｔｉｔｏｎｙｉｅｔｎｗｅｇｔｔｒｇｎｓｗｉｈｓｍｅｓｚ，ｉｈｓｇｅｔｄｔａｙＢＰｒａｔｏ．ｔｒＸｂｎｏＩｒｓｒｃｉｎｅｚｍｅｄｇｓｉ，ｏｗｏｆａｍｅｔｔａｉｅｗｈｃｕｇｓｅｈｔｏ
ｔＮＡｉｖｅｔａｏｔｕｔｄｒｃｍｂｉｄｗｉｈｔｈｅＲｃｏｒｗｓｃｎｓｒｃｅｕｃｓｆｌＩｈｅｓｍｙ，ｈｅ１５９ｂｆａｎｔｗａｅｏｎｅｔｈｅｐＧＷＢ１７ｖｃｏｅｔｒ
文章编号：０７７８｛０２０ — １８０１０ —３３２１）２０３—４
Ｇｔｗｙ技术构建棉花ＧＳＭＤ基因植物表达载体ａｅａｈＡＣ

Gateway技术快速构建百合双价抗病毒RNAi表达载体

Gateway技术快速构建百合双价抗病毒RNAi表达载体徐品三;白建芳;刘纪文;李焕改【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2011(27)4【摘要】为获得适合转化百合的双价RNAi表达载体,以感病百合叶片的总RNA 为模板,分别扩增400bp左右的LSV和LMoVCP基因。

通过重叠延伸PCR技术获得长约800bp的LSV-LMoV融合基因。

利用Gateway技术,通过BP反应及LR反应将LSV-LMoV融合基因克隆到双元载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了含2种病毒基因的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV。

将构建好的双价表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致。

【总页数】4页(P144-147)【关键词】百合无症病毒;百合斑驳病毒;RNAi载体;重叠延伸PCR;Gateway技术【作者】徐品三;白建芳;刘纪文;李焕改【作者单位】大连理工大学生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】Q782【相关文献】1.大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化 [J], 张学明;宋阳;王丕武;马建;晏佳琳;付永平;曲静;张卓;董环宇2.啤酒花抗病毒双价RNAi植物表达载体的构建及遗传转化 [J], 王琨;裴娟;黎玉顺;祝建波;向本春3.中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建 [J], 廖正平;郑益平;罗鹏;吴雪琴;曾黎辉4.葡萄抗病毒双价RNAi植物表达载体构建及其对烟草的遗传转化 [J], 田莉莉;牛良5.同源重组快速构建百合LCHS2基因RNAi表达载体及其鉴定 [J], 化占勇;刘雅莉;徐伟荣;王跃进;张雄飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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基于Ｇａｔｅｗａｙ技术的植物表达载体的构建
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（）陕西杨凌７陕西杨凌７１西北农林科技大学ａ生命科学学院，ｂ植物保护学院，１２１００；２陕西省农业分子生物学重点实验室，１２１００
ａｃｉｅｎｓｅｄｉａｔｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｎａｍｅｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅａｖｅｒａｅｔｉｔｅｒｏｆｌａｎｔ１１０４Ｄｗａｓ１１０４Ｄｗａｓ－ｍｐｇｐｐｐｆ５／５．１１×１０ｃｆｕｍＬａｎｄｉｔｓｈｏｗｅｄｎｏｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｚｅｆｒａｍｅｎｔｓｏｆＤＮＡｉｎＢＰｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｉｔｓｆｕｎｃ－ｐｇ
（１ａＣｏｌｌｅｅｏＬｉｅＳｃｉｅｎｃｅ，ｂＣｏｌｌｅｅｏＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔＹａｎｌｉｎＳｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；ｇｆｆｇｆｙ，ｇｇ，２ＳｈａａｎｘｉＫｅＬａｂｏｒａｔｏｒｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏＡｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＹａｎｌｉｎＳｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）ｏｒｙｙｆｇｙｇｇｇ，ｆ
１６２
西北农林科技大学学报（自然科学版）
第３８卷
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第３８卷第１１期２０１０年１１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）（）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔＮａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．ｙ
Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．１１Ｎｏｖ．２０１０
：【】ＴＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｏｆａｃｉｌｉｔａｔｅｌａｎｔｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｒｅｓｓｉｏｎｂａｓｅｄｈｉｈ－ｊｐｇｐｐｇ，ｅｎｅｌａｎｔｓｔＢｉ１２１ａｎｄｔｈｒｏｕｈｕｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｉｎｈｅ３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｕｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａ－ｇｐｐｇｐｇｑｔｉｏｎｓｅｃｉｆｉｃｓｉｔｅｓａｔｔＰｓａｎｎｉｎｒｅｉｏｎｆｒｏｍＤＯＮＲ２２２ｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏＣＡＭＢＩＡ０３８０ｔｏｍａｋｅＧａｔｅ－－ｐｐｇｇｐｐ【】ｗａｔｅｃｈｎｏｌｏｃｏｍａｔｉｂｌｅＡｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅａｃｉｅｎｓｅｄｉａｔｅｄｌａｎｔｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．ＭｅｔｈｏｄＴｈｅ－ｇ－ｍｙｇｙｐｐｐｆ３５ＳｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｕｅｎｃｅａｎｄｔｈｅａｔｔＰｓａｎｎｉｎｒｅｉｏｎｉｎｔｈｅＧａｔｅｗａｖｅｃｔｏｒＤＯＮＲ２２２ｗｅｒｅａｍｌｉｆｉｅｄａｎｄ－ｑｐｇｇｙｐｐｉｎｓｅｒｔｅｄｌａｎｔＣＡＭＢＩＡ０３８０ｉｎｔｏｔｈｅｍｕｌｔｉｌｅｃｌｏｎｉｎｓｉｔｅｓｏｆＡ．ｔｕｍｅａｃｉｅｎｓｅｄｉａｔｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ－ｍｐｇｐｐｐｆｔｏｍａｋｅ１１０４Ｄ．Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｏｆｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｖｅｃｔｏｒ１１０４Ｄｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｃｌｏｎｉｎｍｕｌｔｉｌｅｅｎｅｓｐｙｐｙｇｐｇ【】ｉｎｔｈｅｓａｍｅＢＰｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｂＧＵＳｇｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔＡＧａｔｅｗａｔｅｃｈｎｏｌｏｃｏｍａｔｉｂｌｅＡ．ｔｕｍｅ－－ｙｐｙｇｙｐ
＊［收稿日期］０１００４１９２－－［ ” ）；）基金项目］计划项目（高等学校学科创新引智计划项目（９７３２００６ＣＢ１０１９０１Ｂ０７０４９科技部 “ ［，：作者简介］女，山东青岛人，在读硕士，主要从事植物免疫学研究。Ｅ－ｍ１９８５－）ａｉｌｓｈｓｈ２００６＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ郭姗姗（ｇ［，：通信作者］男，新疆伊犁人，教授，博士生导师，主要从事植物免疫学研究。Ｅ－ｍ１９６７－）ａｉｌｗｘｓｈａｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ单卫星（＠ｎ
５／无严格选择性；载体重组效率测试结果表明，１１×１０ｃｆｕｍ０４Ｄ重组平均滴度为５．ｐ
验结果表明，改造后的载体可以实现目标基因的顺利表达。【结论】基于Ｇ１１０４Ｄ的构ａｔｅｗａｙ技术的植物表达载体ｐ建，为实现ｃ有望推动植物－病原互作研究中关键基ＤＮＡ文库的高效构建和目标基因的高通量功能筛选提供了可能，因的鉴定与克隆。［关键词］植物表达载体；瞬时表达；功能克隆ａｔｅｗａＧｙ技术；［中图分类号］７８５Ｑ［文献标识码］Ａ［（）文章编号］６７１９３８７２０１０１１０１６１０６１－－－
ｃｉｅｎｓｅｄｉａｔｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｍａｋｅｓｉｔｔｏｃｏｍｂｉｎｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｈｉｈｌａｎｔｏｓｓｉｂｌｅ－ｍｐｙｇｐｐ
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａＧａｔｅｗａｔｅｃｈｎｏｌｏｂａｓｅｄ－ｙｇｙｌａｎｔｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐｐ
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