微生物检验与控制精品PPT课件
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《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
《临床微生物检验》课件
临床微生物检验的质量管理
1
质量控制的作用
保证临床微生物实验室的检验结果
质量控制的重要性
2
的准确性、可靠性和重复性。
临床微生物检验的结果直接关系到
病人的治疗和康复，因此是至关重
要的。
3
常用的质量管理措施
实验室管理规范、设施环境维护、 标准质控规程的贯彻落实等措施。
分子生物学检验技术
DNA分离和纯化
它们在人和动物接触的过程中传播，会 引起严重的感染病，甚至导致死亡。
生物化学检验技术
什么是生物化学 检验技术
利用生物化学分析技术来 检测生物样本中的化学物 质的一种检测方法。
应用领域
可用于疾病的诊断和治疗， 并广泛应用于生物技术的 前沿研究中。
常用技术分类
• 酶联免疫法 • 光子计数法 • 随机放大荧光检测法
临床微生物检验PPT课件
本课程将向大家介绍临床微生物检验的定义、作用和意义，以及微生物检验 的常见流程、方法和技术。
常见致病微生物
1 大肠杆菌
2 病毒
在传染病流行病学中，是诊断和预防疾 病的重要指标。
病毒性感染在人类社会中是医学防治一 直要面对的难题。
3 金黄色葡萄球菌
4 弓形体
常见的致病菌之一，对呼吸系统、泌尿 系统、乳腺、皮肤等具有感染性。
利用微生物检测技术及时准确分析身体内存在的微生物病原体，识别出病原体的 种类和数量。
2
诊断和治疗疾病
根据临床微生物检测结果，及时确认病情的诊断，选择最合适的治疗方法。
3
公共卫生防控
通过研究疾病传播规律和控制机制，加强疾病预防和控制措施，保障公共卫生安 全。
感染部位
微生物可感染人体的各 个部位，如呼吸系统、 肠胃道、泌尿系统、生 殖系统等，表现出的症 状和体征也会有很大差 异。
微生物检验技术 PPT课件
菌种保藏的目的： 防止优良性状菌种的退化或变异。 注意：在实际工作中菌种的退化或变异是 难以避免的。微生物的遗传与变异是正常 的生物进化规律，变异是绝对的，稳定性 是相对的。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
药物制剂的微生物学检验PPT课件
微生物药敏试验是测定微生物对 各种抗菌药物的敏感程度的方法。
通过药敏试验可以了解致病菌对 抗菌药物的敏感性和耐药性，为
临床合理用药提供依据等。
03
药物制剂的微生物污染 来源与控制
微生物污染来源
生产环境
生产车间、设备、容器具 等可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
常用的微生物计数法有直接计数法、 间接计数法和流式细胞计数法等。
微生物鉴定的方法
微生物鉴定的方法是根据微生 物的形态、生理生化特征等对 其进行分类和识别的技术。
常用的微生物鉴定方法有形态 学鉴定、血清学鉴定、基因型 鉴定等。
微生物鉴定对于确定病原微生 物、研究新发传染病等方面具 有重要意义。
微生物药敏试验
水源传播
生产过程中使用的水源，如清洗用 水、冷却水等，可能含有微生物， 进而污染药物制剂。
微生物污染的控制措施
环境控制
定期清洁和消毒生产环境，保 持车间卫生，降低微生物的滋
生。
人员管理
操作人员需经过培训，严格遵 守卫生规定，定期检查手部卫 生。
原材料控制
对原材料进行质量检查，确保 不携带微生物，并对辅料等进 行灭菌处理。
培养基是微生物生长繁殖的介质，由水、碳源、氮源、无机盐等组成，根据不同微 生物的需求，培养基的成分和配比也有所不同。
微生物培养法常用于分离、纯化特定的微生物，以及测定微生物的生理生化特征。
微生物计数法
微生物计数法是通过一定的技术手段， 对样品中微生物的数量进行计数的方 法。
微生物计数法在药物制剂的微生物限 度检查、环境监测等领域有广泛应用。
原材料
药物制剂的原材料，如药 材、辅料等，可能携带微 生物。
生产人员
操作人员的手部、衣物等 可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
《微生物学质量控制》课件
医疗器械微生物学质量控制 的目标是预防和控制医疗器 械中致病菌的生长和繁殖， 同时促进有益菌的生长，以 提高医疗器械的卫生状况和
使用效果。
医疗器械微生物学质量控制 需要遵循国家和国际相关法 规和标准，如《医疗器械生 产质量管理规范》(GMP)和
ISO 11000等。
环境微生物学质量控制
环境微生物学质量控制是环境保护和公共卫生领 域的重要工作，通过控制环境中微生物的数量和 种类，降低环境污染和公共卫生事件的风险。
微生物学质量控制的发展历程
初期阶段
微生物学质量控制起源于20世纪初，当时主要是针对临床实验室的 管理和控制。
发展阶段
随着微生物学研究的深入和应用领域的拓展，微生物学质量控制逐 渐发展成为一门独立的学科，并不断完善和规范。
当前阶段
现代微生物学质量控制已经形成了较为完善的体系和方法，广泛应用 于各个领域，为人类健康和公共卫生安全提供了有力保障。
显微镜
分光光度计
观察微生物形态和结构，进行初步鉴 定。
用于检测微生物细胞浓度和生长曲线 。
培养箱
控制微生物生长所需的温度和湿度条 件。
微生物学检测数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、统计和分析，确保数据的准确性和可 靠性。
质量控制
通过绘制质控图、计算质控指标等方式，对实验过程进行监 控和评估，确保实验结果的可靠性。
微生物学样品处理
对采集的样品进行适当的预处理 ，如稀释、均质化等，以便后续 的检测和分析。
微生物学检测方法与技术
传统培养法
通过培养基培养微生物，观察菌落形 态、染色等特征，进行微生物鉴定。
分子生物学技术
利用基因测序、PCR等分子生物学技 术，对微生物进行快速、准确的鉴定 和分型。
微生物检验ppt课件
微生物检验ppt课件
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
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药品微生物检验与控制
培训主题：
1、新修订的“微生物限度检查法”介绍 2、药品微生物实验室质量管理和质量保证 3、药品微生物检验操作技术 4、洁净环境微生物监测
2
3
4
培训主题：
1、2010版《中国药典》第一增补本介绍 2、新修订的“微生物限度检查法”介绍 3、药品微生物实验室质量管理和质量保证 4、药品微生物检验操作技术 5、洁净环境微生物监测
微生物测试方法
平皿法
1、倾注发；
薄膜过滤法
2、涂布法
MPN法
涂布法：
新引入的方法 关键点：涂布供试液不少于0.1mL.
微生物限度标准解释：
101 可以接受的最大菌数为20； 102 可以接受的最大菌数为200； 103 可以接受的最大菌数为2000；
非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法
对于固体培养基，获得的生长结果不得 超过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
回收率：
对照组计数
—————— ≤ 数 2
测试组计数
≤ 2 X 对照组计
计数方法适用性试验：
实质：微生物计数方法验证。
几个数字要求： - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准：回收率低于50%
非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法
主要特点
需氧菌概念 回收率测试方法与合格限度
培养基适用性检查：
培养基： 胰酪大豆胨琼脂/胰酪大豆胨肉汤 TSA / TSB
沙氏葡萄糖琼脂/沙氏葡萄糖肉汤 SDA
需氧菌总数计数：
培养基：胰酪大豆胨琼脂 TSA
试验菌株：金黄色普通球菌、铜绿假单胞菌、枯 草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
培养基储存不得超过有效期
重要区域环控用培养基必须
-双层包装 -最终灭菌，否则进行全数预培养及用前检查
培养基质量控制：
所有待用的培养基应检查：
-生长能力
每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典，供应商说明及环境中分离得到的菌株
生长能力测试不合格 -调查 -不得使用该批号
接种量：不大于100 cfu
培养条件：温度：30-35℃
过5天
时间：不超过3天；不超
霉菌和菌总数计数：
培养基：沙氏葡萄糖琼脂 SDA 试验菌株：白色念珠菌、黑曲霉菌 时间：不超过5天
培养基适用性检查：
范围： - 成品培养基（新引入概念） - 有脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基
防止过度加热或潜在污染 -融化时，使用
水浴或流通蒸汽 微波炉，热板要防止过度加热 -融化的培养基储存 在40~45℃水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干
培养基应标示:
-制备批号 -制备日期，有效期 -培养基名称
有效期确定
-根据成分，配方，容器，储存条件等确定 -生长能力试验数据支持
培养基储存: 培养基应根据生产商的说明书，并在验 证过的条件下储存
培养基适用性检查
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考 察。
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考 察。
检验方法适用性试验：
实质：控制菌检验方法验证。
适用性试验：
规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。
供试品检查：
规定最长时间下的控制菌试验。
微生物限度测试的必要性：
1、非无菌药品的微生物污染可能性很低，因 此测试的价值不大。
2、微生物限度测试属于“小概率事件”；以 小概率事件衡量整批产品质量不妥。
3、微生物测试延长了产品放行周期，增加了 库存成本和市场缺货的机会
微生物控制菌检验结果解释：
-阳性。产品报废。 -阴性，（1）未检出；
（2）非控制菌。怎么办？
微生物实验室检验技术
15min
培养基灭菌条件
-在无菌和过度加热之间平衡 -消毒锅灭菌结束后，不建议在其中存储培养基 -不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的
颜色 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性
制备培养基的储存:
-低于0℃，凝胶结构破坏 -避光 避热 -琼脂培养基密封
融化 -重复融化应被限制（不超过一次），
作为重要组成的微生物控制：
原料和组分的微生物控制 环境的微生物控制 生产过程的微生物控制 成品的微生物控制 人员的微生物控制 所有微生物控制的整合
微生物实验室重要的控制点：
-无菌技术 -培养基控制 -菌种控制 -设备控制 -实验室布局和运作 -数据文件控制 -员工培训
无菌技术：
防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染 的操作方法和管理方法。
培养基
不要过度加热
-加热帮助溶解，通常培养基变深说明过度加热 -添加剂加入后需充分混合
清洁的玻璃器皿
-防止外来污染和抑菌剂 -玻璃器皿清洁
培养基
灭菌条件
-供应商提供参数，或自己验证 -高压蒸汽灭菌，过滤除菌 -验证应考虑无菌和培养基生长能力 - 湿 热 灭 菌 要 考 虑 装 载 分 布 ， 通 常 121℃
-无菌环境 -灭菌 -消毒 -卫生要求 -无菌操作技术
培养基
微生物实验室工作质量的核心是培养基，应根据既定的 目的选用正确的培养基。生产商应提供相关的COA和说 明书:
-配制 -储存 -菌种选用
水:
-纯化水，去离子水，蒸馏水 -记录用量
成分的测量:
-校准过的天平，天平的量程应准确 -清洁的容器和工具 -记录称量
培养基适用性检查合格标准：
1、回收率比值：0.5-2 范围内； 2、菌落：形态大小与对照培养基一致； 3、液体培养基：被检液体培养基与对照培养
基比较，生长良好。
回收率：
USP34-61：
For solid media, growth obtained must not differ by a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum。
5
中国药典修订版整体特点：
微生物检验方法与国外药典接近 符合微生物生长特性 标准与国际药典USP/EP/JP相近
微生物学是开发、生产及成品测试的一部分
无菌控制也适用于非无菌产品 控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场 到成品控制的整个过程
整个过程中的各种微生物控制的整合将提高 最终产品微生物质量的保证
培训主题：
1、新修订的“微生物限度检查法”介绍 2、药品微生物实验室质量管理和质量保证 3、药品微生物检验操作技术 4、洁净环境微生物监测
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培训主题：
1、2010版《中国药典》第一增补本介绍 2、新修订的“微生物限度检查法”介绍 3、药品微生物实验室质量管理和质量保证 4、药品微生物检验操作技术 5、洁净环境微生物监测
微生物测试方法
平皿法
1、倾注发；
薄膜过滤法
2、涂布法
MPN法
涂布法：
新引入的方法 关键点：涂布供试液不少于0.1mL.
微生物限度标准解释：
101 可以接受的最大菌数为20； 102 可以接受的最大菌数为200； 103 可以接受的最大菌数为2000；
非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法
对于固体培养基，获得的生长结果不得 超过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
回收率：
对照组计数
—————— ≤ 数 2
测试组计数
≤ 2 X 对照组计
计数方法适用性试验：
实质：微生物计数方法验证。
几个数字要求： - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准：回收率低于50%
非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法
主要特点
需氧菌概念 回收率测试方法与合格限度
培养基适用性检查：
培养基： 胰酪大豆胨琼脂/胰酪大豆胨肉汤 TSA / TSB
沙氏葡萄糖琼脂/沙氏葡萄糖肉汤 SDA
需氧菌总数计数：
培养基：胰酪大豆胨琼脂 TSA
试验菌株：金黄色普通球菌、铜绿假单胞菌、枯 草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
培养基储存不得超过有效期
重要区域环控用培养基必须
-双层包装 -最终灭菌，否则进行全数预培养及用前检查
培养基质量控制：
所有待用的培养基应检查：
-生长能力
每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典，供应商说明及环境中分离得到的菌株
生长能力测试不合格 -调查 -不得使用该批号
接种量：不大于100 cfu
培养条件：温度：30-35℃
过5天
时间：不超过3天；不超
霉菌和菌总数计数：
培养基：沙氏葡萄糖琼脂 SDA 试验菌株：白色念珠菌、黑曲霉菌 时间：不超过5天
培养基适用性检查：
范围： - 成品培养基（新引入概念） - 有脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基
防止过度加热或潜在污染 -融化时，使用
水浴或流通蒸汽 微波炉，热板要防止过度加热 -融化的培养基储存 在40~45℃水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干
培养基应标示:
-制备批号 -制备日期，有效期 -培养基名称
有效期确定
-根据成分，配方，容器，储存条件等确定 -生长能力试验数据支持
培养基储存: 培养基应根据生产商的说明书，并在验 证过的条件下储存
培养基适用性检查
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考 察。
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考 察。
检验方法适用性试验：
实质：控制菌检验方法验证。
适用性试验：
规定最短时间培养，试验菌检出能力试验。
供试品检查：
规定最长时间下的控制菌试验。
微生物限度测试的必要性：
1、非无菌药品的微生物污染可能性很低，因 此测试的价值不大。
2、微生物限度测试属于“小概率事件”；以 小概率事件衡量整批产品质量不妥。
3、微生物测试延长了产品放行周期，增加了 库存成本和市场缺货的机会
微生物控制菌检验结果解释：
-阳性。产品报废。 -阴性，（1）未检出；
（2）非控制菌。怎么办？
微生物实验室检验技术
15min
培养基灭菌条件
-在无菌和过度加热之间平衡 -消毒锅灭菌结束后，不建议在其中存储培养基 -不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的
颜色 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性
制备培养基的储存:
-低于0℃，凝胶结构破坏 -避光 避热 -琼脂培养基密封
融化 -重复融化应被限制（不超过一次），
作为重要组成的微生物控制：
原料和组分的微生物控制 环境的微生物控制 生产过程的微生物控制 成品的微生物控制 人员的微生物控制 所有微生物控制的整合
微生物实验室重要的控制点：
-无菌技术 -培养基控制 -菌种控制 -设备控制 -实验室布局和运作 -数据文件控制 -员工培训
无菌技术：
防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染 的操作方法和管理方法。
培养基
不要过度加热
-加热帮助溶解，通常培养基变深说明过度加热 -添加剂加入后需充分混合
清洁的玻璃器皿
-防止外来污染和抑菌剂 -玻璃器皿清洁
培养基
灭菌条件
-供应商提供参数，或自己验证 -高压蒸汽灭菌，过滤除菌 -验证应考虑无菌和培养基生长能力 - 湿 热 灭 菌 要 考 虑 装 载 分 布 ， 通 常 121℃
-无菌环境 -灭菌 -消毒 -卫生要求 -无菌操作技术
培养基
微生物实验室工作质量的核心是培养基，应根据既定的 目的选用正确的培养基。生产商应提供相关的COA和说 明书:
-配制 -储存 -菌种选用
水:
-纯化水，去离子水，蒸馏水 -记录用量
成分的测量:
-校准过的天平，天平的量程应准确 -清洁的容器和工具 -记录称量
培养基适用性检查合格标准：
1、回收率比值：0.5-2 范围内； 2、菌落：形态大小与对照培养基一致； 3、液体培养基：被检液体培养基与对照培养
基比较，生长良好。
回收率：
USP34-61：
For solid media, growth obtained must not differ by a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum。
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中国药典修订版整体特点：
微生物检验方法与国外药典接近 符合微生物生长特性 标准与国际药典USP/EP/JP相近
微生物学是开发、生产及成品测试的一部分
无菌控制也适用于非无菌产品 控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场 到成品控制的整个过程
整个过程中的各种微生物控制的整合将提高 最终产品微生物质量的保证