自噬研究方法工具汇总---BIO-RAD
自噬研究方法工具汇总---BIO-RAD
自噬研究方法工具汇总---BIO-RAD细胞自噬细胞自噬（autophagy）是依赖溶酶体途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的一种过程。
这个过程可以清除功能异常的细胞器、细胞内病原体以及再循环细胞组分。
尽管自噬最早被发现是应答饥饿，现在发现自噬受到各种胁迫信号的诱导，基础水平的自噬有利于细胞内稳态的维持.很多因素包括激素刺激的天然免疫信号及能量耗尽或高温等引起的物理胁迫会诱导自噬上调。
相反，很多疾病如癌症、传染性疾病和神经退行性疾病及衰老和自噬的下调都有关联。
自噬主要有三种信号通路:●Microautophagy小自噬通过溶酶体的膜内陷“吞入”目标分子，起到降解细胞质中小体积物质的作用.这个过程研究得不是很清楚,膜内陷相关的GTPaseVps1p蛋白和自噬相关蛋白(Atg)参与其中。
● 分子伴侣介导的自噬（chaperone-mediatedautophagy,CMA）直接将细胞质蛋白带到溶酶体。
带KFERQ—序列的蛋白质和热休克蛋白Hsc70及其它分子伴侣相互作用形成的复合体和溶酶体膜上的Lamp-2A受体结合后，导致Lamp—2A 聚合引发复合体中的底物易位穿越溶酶体膜.● Macroautophagy大自噬被研究得最多,可以降解更大量的胞浆物质，由特殊的细胞器自噬小体介导。
大自噬起始于吞噬泡装配点(PAS）的形成和Unc51—likekinase (Ulk)复合体的组装,这启动了自噬小体的形成(图1）。
接着是成核阶段，Ulk复合物与由beclin—1、Vps15、Vps34、Atg14组成classIII PI3K 复合物相互作用形成吞噬泡。
接着吞噬泡膜扩展形成自噬小体，在这个过程中Atg12/5/16复合物促成了磷脂酰乙醇胺（PE）和LC3(酵母中是Atg8）的偶联，这是自噬小体膜唯一已知的标志物。
PE-LC3偶联物在几个关键步骤中起作用：自噬泡膜的扩展、自噬体的识别及自噬溶酶体的形成。
整个过程涉及30多个自噬相关基因（Atg蛋白），包括Beclin-1、溶酶体相关膜蛋白(Lamp—1 and Lamp—2)和微管相关蛋白1A/1Blight chains 3A/B （MAP1LC3A/B 或简称LC3)，这些都是自噬常见的标志物.最后一步，完全形成的自噬小体与溶酶体融合释放内含的物质被降解。
自噬的金牌研究工具
①主流定位示踪工具- LC3LC3是用来标记定位自噬小体到自噬溶酶体的动态变化，特别是利用mRFP-GFP-LC3差异化标记酸性和中性LC3阳性的囊泡，用颜色变化来指示自噬的不同阶段（由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光），可以在活细胞水平动态监测自噬流的强弱，满足定性和定量分析的要求。
GFP-LC3和RFP-LC3单标探针可以监测LC3蛋白参与自噬起始过程：自噬较少时，GFP-LC3和RFP-LC3融合蛋白主要弥散在胞浆中；自噬增加时，GFP-LC3和RFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。
我们可以在不同的药物处理时间点上采样进行静态分析，综合一起形成自噬流的动态分析；但RFP-LC3与mRFP-GFP-LC3的还可以对细胞进行活细胞成像，从而对自噬流进行动态监测。
比如对同一个视野每隔5 min采集一次数据等。
对于单标探针（GFP-LC3或RFP-LC3）与双标探针（mRFP-GFP-LC3）的主要区别需要作进一步的说明：GFP-LC3和RFP-LC3单标探针对于监测自噬体的形成特别有用，但这两种单标探针不利于自噬流的整个过程进行动态检测，比如无法精确监测溶酶体是否参与，也无法示踪自噬体的成熟过程等。
因此，单标探针往往需要联合其他探针，比如溶酶体探针（Lamp1-RFP、Lamp1-GFP）一起使用，根据共定位的信息来更加精细的示踪自噬体的成熟过程。
而mRFP-GFP-LC3串联双标记探针则可以解决这个问题，比如从自噬小体到自噬溶酶体的动态变化等（图4）。
进一步的，若联合红外标记的溶酶体探针（LysoTracker® Deep Red ，Thermo，L12492)则可以进一步研究自噬小体/自噬溶酶体/溶酶体三者的动态变化。
需要注意的是：外源过表达的LC3如果过量，会导致LC3非特异性的自发聚集，为了区分自发聚集与自噬诱导的聚集，我们提供了不能参与自噬的LC3突变体（G120A）来作为对照。
细胞自噬检测
细胞自噬检测引言细胞自噬（Autophagy）是一种维持细胞内稳态的重要细胞生理过程。
它通过将细胞内的有害垃圾物质、受损蛋白质和细胞器通过包裹成双层膜体而将其降解和回收。
细胞自噬不仅对于维持细胞内环境的平衡，也在细胞营养不足、应激等情况下发挥至关重要的作用。
为了研究细胞自噬的机制、功能以及其在疾病中的作用，科研人员常常需要进行细胞自噬的检测。
本文将介绍一些常用的细胞自噬检测方法，旨在帮助科研人员更好地开展相关研究。
方法一：免疫组化检测免疫组化检测是常用的细胞自噬检测方法之一，它利用特异性抗体识别和定位自噬相关的蛋白质标记。
以下是免疫组化检测的步骤：1.固定和透化：将细胞样品固定在载玻片上，并通过透化剂处理，以便抗体能够穿透细胞膜进入细胞内。
2.抗体反应：加入特异性的抗体，使其与目标自噬蛋白结合。
3.洗涤：进行多次洗涤，以除去未结合的抗体。
4.二抗结合：加入与第一抗体来源不同种类的第二抗体，它能连接到第一抗体上，使得目标蛋白能够被可见光或荧光染料标记。
5.洗涤：进行多次洗涤，以除去未结合的第二抗体。
6.显色或荧光检测：加入适当的显色剂或荧光标记物，观察细胞自噬标记的结果。
免疫组化检测方法适用于观察细胞内特定蛋白质的表达和定位情况，从而间接地了解细胞自噬的活性。
方法二：转染自噬标记基因为了直接观察细胞内自噬相关的蛋白质的表达情况，科研人员可以利用转染自噬标记基因的方法。
以下是一种常用的自噬标记基因：mRFP-GFP-LC3。
mRFP-GFP-LC3是一种融合蛋白，其中GFP（绿色荧光蛋白）和mRFP（红色荧光蛋白）与自噬相关的蛋白LC3融合在一起。
GFP能够在细胞自噬过程中被降解，而mRFP则能够在自噬过程中保持稳定。
转染mRFP-GFP-LC3基因后，科研人员可以通过观察细胞中的荧光信号来确定细胞的自噬活性。
当细胞自噬活性较低时，绿色和红色荧光都很强；而当细胞自噬活性增加时，绿色荧光减弱而红色荧光增强。
自噬及其的研究方法
⾃噬及其的研究⽅法⾃噬（Autophagy）及其研究⽅法概述⼀、背景概念:⽬前根据发⽣过程分为三类：Macroautophagy，Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA), ⼤⾃噬（Macroautophagy）即我们说的⾃噬（autophagy）;微⾃噬（Microautophagy）：是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的⼀种⽅式;分⼦伴侣介导的⾃噬(Chaperone-mediated autophagy，CMA)：⼀些分⼦伴侣，如hsp70，能帮助未折叠蛋⽩转位⼊溶酶体。
通常说的⾃噬泛指Macroautophagy.⾃噬是细胞内的⼀种“⾃⾷（Self-eating）”的现象，凋亡是“⾃杀（Self-killing）”的现象，⼆者共⽤相同的刺激因素和调节蛋⽩，但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调⽬前还不清楚. ⾃噬是指膜（⽬前来源还有争议，⼤部分表现为双层膜，有时多层或单层）包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋⽩质等形成⾃噬体（autophagosome），最后与溶酶体融合形成⾃噬溶酶体（autophagolysosome），降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳态和细胞器的更新。
⾃噬的步骤可以⼤概总结为下⾯四步:步骤1：细胞接受⾃噬诱导信号后，在胞浆的某处形成⼀个⼩的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，但它并不呈球形，⽽是扁平的，就像⼀个由2层脂双层组成的碗，可在电镜下观察到，被称为Phagophore，是⾃噬发⽣的铁证之⼀。
步骤2：Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，包括细胞器，全部揽⼊“碗”中，然后“收⼝”，成为密闭的球状的autophagosome，即“⾃噬体”。
电镜下观察到⾃噬体是⾃噬发⽣的铁证之⼆。
有2个特征：⼀是双层膜，⼆是内含胞浆成分，如线粒体、内质⽹碎⽚等。
步骤3：⾃噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合（这种情况不是必然要发⽣的）。
羰基氰氯苯腙调节非经典自噬的机制研究
羰基氰氯苯腙调节非经典自噬的机制研究高瑛;刘亚军;蔡欣然;刘培庆;李民【摘要】目的：探讨可以调控羰基氰氯苯腙（ carbonyl cyanide m－chlorophenylhydrazone，CCCP）诱导的不依赖自噬关键基因的非经典自噬的影响因素。
方法分别将野生型细胞和自噬关键基因敲除／敲低的细胞（ Atg5－KO MEF，FIP－200 KO MEF，ULK1－KO MEF， Beclin 1－KO U251）用CCCP 处理，观察GFP－LC3的分布聚集情况和LC3蛋白水平的表达。
荧光定量PCR检测CCCP处理后LC3B mRNA水平变化。
Western blot检测FIP200－KO MEF 中CCCP处理时，水通道蛋白抑制剂对LC3蛋白水平的影响。
结果在Atg5－KO MEF细胞中，和对照组相比，CCCP 处理组免疫荧光实验不能产生GFP－LC3自噬斑点，Western blot结果显示LC3－I 型不能转变为LC3－II。
而在ULK1－KO MEF，FIP200－KO MEF，及Beclin1－KD U251细胞中，CCCP处理组免疫荧光实验能产生GFP－LC3自噬斑点，同时LC3－I型也能转变为LC3－II型。
但CCCP处理不影响LC3B的mRNA水平。
CCCP诱导的非经典自噬能被水通道蛋白抑制剂所抑制。
结论 CCCP诱导的非经典自噬需要自噬关键基因Atg5参与，但不需要Beclin 1，ULK1，FIP200的参与，不影响LC3B 的转录调控。
渗透压不平衡可以调节CCCP诱导的自噬。
%Objective To identify the factors those regulate CCCP-induced non-canonical autophagy.Methods Different cells expressing GFP-LC3 were treated with or without CCCP (30μM) for 6h.Fluorescent images were taken and cell lysates were analyzed by western blot assay.Real-time PCR was used to measure the mRNA levels ofLC3B.FIP200-KO MEF cells were cultured and treated by 30 μM CCCP with or without water channel inhibitors, for 6 h.Cell lysates were analyzed byWestern blot assay.Results CCCP could not induced autophagy in Atg5-KO MEF CP could induce non-canonical autophagy in ULK1-KO MEF, FIP200-KO MEF, and Beclin1-KD CP treatment in FIP200-KO MEF cells had no effect on the expression level of LC3B mRNA.We also found two distinct aquaporin water channel inhibitors could inhibit the generation of LC3 which was induced by CCCP.Conclusion CCCP induced non-canonical autophagy was Atg5-dependent, but Beclin1-, ULK1-andFIP200-independent.Osmotic imbalance could regulate CCCP-induce non-canonical autophagy.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2016(036)004【总页数】4页(P34-36,40)【关键词】自噬;渗透压不平衡;羰基氰氯苯腙;LC3;MEF【作者】高瑛;刘亚军;蔡欣然;刘培庆;李民【作者单位】中山大学药学院/新药成药性评估与评价国家与地方联合工程实验室，广州广东 510006;中山大学药学院/新药成药性评估与评价国家与地方联合工程实验室，广州广东 510006;中山大学药学院/新药成药性评估与评价国家与地方联合工程实验室，广州广东 510006;中山大学药学院/新药成药性评估与评价国家与地方联合工程实验室，广州广东 510006;中山大学药学院/新药成药性评估与评价国家与地方联合工程实验室，广州广东 510006【正文语种】中文【中图分类】R329.2+7自噬(巨自噬)是对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬然后与溶酶体融合并降解内含物的过程，其在进化过程中具有高度保守性[1]。
自噬检测方法
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自噬流评价： 1.双标LC3,红色斑点/黄色斑点; 2.LC3与lamp1的共定位； 3.DQ-BSA; 4.稳转GFP-LC3细胞中检测游 离GFP
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Fusion of autophagosomes with endosomes/lysosomes is mediated by the class C VPS complex, Rab GTPase and the SNARE complex.
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自噬பைடு நூலகம்测方法
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常用细胞器标记物
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自噬体检测： 1.透射电镜 2.免疫荧光观察LC3斑点, （P62辅助说明）； 3.WB检测LC3+P62,并增加自 噬降解抑制剂处理组。
实验顺序：3 1
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机制研究：
CO-IP 比较各组处理后stx17结合的 SNAP29和vamp8
Cai, H., Reinisch, K. & Ferro-Novick, S. Coats, tethers, Rabs, and SNAREs work together to mediate the intracellular destination of a transport vesicle. Dev. Cell 12,671–682 (2007). Itakura, E., Kishi-Itakura, C. & Mizushima, N. The hairpin-type tail-anchored SNARE syntaxin 17 targets to autophagosomes for fusion with endosomes/lysosomes. Cell 151, 1256–1269 (2012). Takáts, S. et al. Autophagosomal Syntaxin17-dependent lysosomal degradation maintains neuronal function in Drosophila. J. Cell Biol. 201, 531–539 (2013)
中波紫外线诱导HaCaT细胞自噬的研究
中波紫外线诱导HaCaT细胞自噬的研究王超鹏;蒋丽君;陈富强;周美娟【摘要】目的探究中波紫外线(UVB)诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT自噬效应及其信号通路.方法 30 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后,透射电镜和MDC染色法观察自噬小体的变化,Western Blot检测自噬和凋亡相关蛋白的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 30mJ/cm2 UVB照射24 h后,电镜下可见自噬小体增多,内含待降解的细胞器和折叠蛋白;MDC染色可见细胞自噬囊泡增多,荧光强度增强;Western Blot结果显示自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和SQSTM1表达增加,AMPK/mTOR通路中的关键蛋白AMPK、p-ULK1表达增加,p-mTOR表达降低;运用3-Methyladenine(3-MA)和siATG5抑制自噬后,LC3-Ⅱ表达降低,细胞凋亡率增加,增殖减慢,凋亡蛋白Cleaved-PARP表达增加,AMPK/mTOR通路中的关键蛋白AMPK、p-ULK1表达下降,p-mTOR表达增加.结论 UVB通过AMPK/mTOR通路诱导了HaCaT细胞的保护性自噬.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2019(035)012【总页数】6页(P1910-1914,1919)【关键词】中波紫外线;人永生化角质形成细胞;自噬;凋亡【作者】王超鹏;蒋丽君;陈富强;周美娟【作者单位】南方医科大学公共卫生学院放射医学系,广东省热带病研究重点实验室广州510515;南方医科大学公共卫生学院放射医学系,广东省热带病研究重点实验室广州510515;南方医科大学公共卫生学院放射医学系,广东省热带病研究重点实验室广州510515;南方医科大学公共卫生学院放射医学系,广东省热带病研究重点实验室广州510515【正文语种】中文日光中的紫外线，尤其是中波紫外线（ultraviolet radiation b，UVB），是造成人体表皮细胞损伤最常见的环境因素之一。
检测自噬的实验方法
检测自噬的实验方法一、形态学检测。
1. 透射电子显微镜（TEM）- 这可是检测自噬的“金标准”呢。
就像用一个超级放大镜去看细胞内部。
自噬的时候啊，细胞里会形成自噬体，这个自噬体在TEM下有它独特的样子，双层膜结构，里面包着要降解的东西。
不过呢，TEM也有点小麻烦，它的样品制备不容易，就像做一道超级精细的菜，得小心翼翼的，而且对仪器要求也高，就像开豪车得有好的路况一样。
2. 荧光显微镜检测。
- 可以用一些标记自噬相关蛋白的荧光染料。
比如说LC3蛋白，它可是自噬的一个重要标志。
当细胞发生自噬的时候，LC3 - I会变成LC3 - II，并且会定位到自噬体膜上。
我们就可以用带有绿色荧光的标记物去标记LC3，然后在荧光显微镜下看。
就像给自噬体穿上一件绿色的小衣服，在黑暗里用特殊的灯一照就能看到啦。
这种方法相对简单一些，就像穿休闲装出门，没那么多繁琐的步骤。
二、生化检测。
1. 检测自噬相关蛋白的表达水平。
- 像Western blot就可以用来检测自噬相关蛋白的变化。
比如前面说的LC3蛋白，还有p62蛋白。
p62蛋白是自噬的底物，如果自噬正常进行，p62蛋白的水平会下降，因为它被自噬体降解了。
这就像看一个东西的库存一样，如果一直在消耗，库存就会减少。
通过检测这些蛋白的表达量的变化，就能知道自噬是不是在正常工作啦。
2. 检测自噬流。
- 可以用一些试剂来阻断自噬体和溶酶体的融合，然后看自噬相关蛋白的变化。
如果自噬流是正常的，阻断之后自噬体就会堆积，相关蛋白的表达也会有相应的改变。
这就像是在水管中间堵一下，看看水是不是真的在流，在哪个地方堵住了一样有趣呢。
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自噬研究方法工具汇总---BIO-RAD
细胞自噬
细胞自噬(autophagy)是依赖溶酶体途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的一
种过程。
这个过程可以清除功能异常的细胞器、细胞内病原体以及再循环细胞组分。
尽管自噬最早被发现是应答饥饿，现在发现自噬受到各种胁迫信号的诱导，基础水平的自噬有利于细胞内稳态的维持。
很多因素包括激素刺激的天然免疫信号及能量耗尽或高温等引起的物理胁迫会诱导自噬上调。
相反，很多疾病如癌症、传染性疾病和神经退行性疾病及衰老和自噬的下调都有关联。
自噬主要有三种信号通路：
●Microautophagy小自噬通过溶酶体的膜内陷“吞入”目标分子，起到降解细胞质中小体积物质的作用。
这个过程研究得不是很清楚，膜内陷相关的GTPaseVps1p 蛋白和自噬相关蛋白(Atg)参与其中。
● 分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediatedautophagy,CMA)直接将细胞质蛋白
带到溶酶体。
带KFERQ-序列的蛋白质和热休克蛋白Hsc70及其它分子伴侣相互作用形成的复合体和溶酶体膜上的Lamp-2A受体结合后，导致Lamp-2A聚合引发复合体中的底物易位穿越溶酶体膜。
● Macroautophagy大自噬被研究得最多，可以降解更大量的胞浆物质，由特殊的细胞器自噬小体介导。
大自噬起始于吞噬泡装配点（PAS）的形成和
Unc51-likekinase (Ulk)复合体的组装，这启动了自噬小体的形成（图1）。
接着是成核阶段，Ulk复合物与由beclin-1、Vps15、Vps34、Atg14组成classIII PI3K 复合物相互作用形成吞噬泡。
接着吞噬泡膜扩展形成自噬小体，在这个过程中Atg12/5/16复合物促成了磷脂酰乙醇胺（PE）和LC3（酵母中是Atg8）的偶联，这是自噬小体膜唯一已知的标志物。
PE-LC3偶联物在几个关键步骤中起作用：自噬泡膜的扩展、自噬体的识别及自噬溶酶体的形成。
整个过程涉及30多个自噬相关基因（Atg蛋白），包括Beclin-1、溶酶体相关膜蛋白(Lamp-1 and Lamp-2)和微管相关蛋白1A/1Blight chains 3A/B (MAP1LC3A/B 或简称LC3)，这些都是自噬常见的标志物。
最后一步，完全形成的自噬小体与溶酶体融合释放内含的物质被降解。
自噬细胞信号通路
如何检测自噬？
●Microautophagy小自噬研究的工具有限，最常用的就是用电子显微镜观察溶酶体膜内陷形成的囊泡。
● Chaperone-mediated autophagy (CMA) 被研究得较多，三种分子伴侣lys-Hsc70、膜相关Hsc70和lys-Hsp90有积极参与，作为CMA底物受体的膜蛋白Lamp-2A 的水平可以用来评估CMA的活力，Lamp-2A 和Hsc70的共定位可以用来识别CMA-active溶酶体。
另外对于CMA底物的评估可参考以下方面：
1. KFERQ-like targeting motif是否出现
2.与lys-Hsc70–positive溶酶体相关联
3.溶酶体活力依赖的降解速度
4. 与细胞质Hsc70的相互作用
5. 与Lamp-2A胞内区域相互作用;
6. Lamp-2A活力相关的浓度;
7.易位到纯化的溶酶体中的能力
● Macroautophagy大自噬的评估最好使用多个自噬阶段的标志物。
因为自噬小体数量的增加可能是自噬上调也可能是自噬最后阶段被抑制，所以放置合适的对照能说明得更清楚。
1.电子显微镜
透射电镜术(TEM)被广泛用于检测自噬过程中形成的各种结构，从吞噬泡到自噬小体到自噬溶酶体，但这个技术对使用者操作要求较高，且不能准确定量。
2.检测标志物LC3/Atg8和p62/SQSTM1
微管相关蛋白1A/1B light chains 3A/LC3A 和3B/LC3B (MAP1LC3A/B),
通常简称LC3 或酵母中称Atg8，是自噬小体最可靠的标志物。
在自噬过程中，非激活型胞质LC3 (LC3-I) 经过水解和脂质化后转变为激活的自噬小体膜结合LC3-II。
通过Western Blot可以观察到更小的LC3-II 条带, 或者通过免疫荧光或免疫组化，可观察到LC3从胞浆转移到膜结构上。
提示，自噬活跃时，LC3-II的水平也可能低，因为自噬小体与自噬溶酶体融合后LC3-II 会被降解。
另外某些anti-LC3抗体识别LC3-I和LC3-II灵敏度上有差异，且LC3-I 对于反复冻融和降解更敏感即使在SDS上样缓冲液中，因此样品要立即煮沸使用而不要反复冻融。
p62 降解是另一个常用的标志物，它在自噬清除多泛素化蛋白时会被优先降解。
自噬过程中LC3和p62的转录也会被调节，因此除了检测LC3和p62的降解，还需加上其它检测。
3.检测Lamps, Atg5,Atg14, and Beclin-1
针对溶酶体标志物Lamp-1 和 Lamp-2,或吞噬泡及自噬小体的标志
物 Atg5,Atg14,Beclin-1的抗体经常被用在免疫荧光显微镜上、western blot及流式细胞仪上追踪自噬过程的进展。
Lamp-2的检测应该与LC3-II检测联用，因Atg14也与ER关联它的检测也需要与其它标志物检测联用。
4.组织蛋白酶Cathepsin活力检测
荧光标记的组织蛋白酶底物可通过报告cathepsin B, K，L的蛋白酶活力来发现活细胞中的溶酶体。
这些可渗透细胞的无毒的试剂加入到细胞中被cathepsin 降解后产生荧光物质，与细胞核染料如Hoechst及溶酶体和细胞器标志物如acridine·orange联用，可检测自噬水平。
这些检测方法兼容荧光显微镜和酶标仪。
5.检测自噬潮autophagic flux
因为自噬是一个动态的过程，自噬潮是一个动态连续的概念，涵盖了自噬体的形成、自噬性底物向溶酶体的运送以及在溶酶体内降解的整个过程，对这整个过程进行监测较单纯定量自噬小体的数量更能反映自噬活性。
最后提醒大家，自噬和凋亡的关系很密切，例如cathepsins 和Beclin-1也介导凋亡的过程，因此建议大家多使用一些标志物检测以避免得到错误的结论。