红细胞血型及相关检测
冻干前后红细胞血型及生物活性指标的检测
冻干前后红细胞血型及生物活性指标的检测吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【摘要】目的检测冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性,了解冻干前、后红细胞血型抗原及其生物学活性的变化情况.方法红细胞血型抗原的检测采用血型血清学方法,2,3-DPG和ATP用ELISA法.结果在ABO、Rh、MNSs、Kell、Duffy、P血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原一致;在Lewis血型抗原中,冷冻前、冻干后红细胞血型抗原有变化.冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量均无明显变化.结论冷冻前、冻干后红细胞Lewis血型系统中的Lea和Leb血型抗原变化有明显差异;冷冻前、冻干后红细胞2,3-DPG和ATP含量变化无统计学意义.%Objective To detect the blood group antigens, the levels of 2,3-DPG and ATP of red blood cells (RBCs) before and after freeze-drying. Also the changes of blood group antigens and biological activity of RBCs beforeand after RBCs freeze-drying was observed. Methods The blood group antigens of RBCs were detected by the blood group serology, the levels of 2,3-DPG and ATP were detected by ELISA. Results The blood group antigens of RBCs were the same as before and after freeze-drying about ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy and P blood group systems. But the blood group antigens of RBCs of Lewis blood group systems were different before and after freeze-drying. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying didn't change significantly. Conclusion The Lea and Leb blood group antigens of RBCs before and after freeze-dryingof Lewis blood group systems have changed significantly. The levels of 2,3-DPG and ATP of RBCs before and after freeze-drying havn't chenged significantly.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2011(013)004【总页数】4页(P316-319)【关键词】冷冻干燥;红细胞;血型;生物活性【作者】吴学忠;刘忠;吕蓉;李敏;李素萍;於娟;赵丹【作者单位】230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;230031 安徽省合肥市中心血站;大连医科大学检验医学院【正文语种】中文【中图分类】R318.52;R331.1+41真空冷冻干燥保存是一种理想的红细胞保存方法,但该技术尚处于实验探索阶段。
ABO血型检测(玻片法)
3．ABO红细胞血型检测波片法原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型、及O型四种。
可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原.ABO抗体有天然和免疫两种。
天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体.人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体;到5-6岁时,具有较高的效价.样本:在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血,有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。
试剂:有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。
试剂盒组成：1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。
2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。
3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体.4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。
5．蘸试剂棒。
操作步骤:1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。
4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。
5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。
6．轻微倾斜波片2分钟.不要把波片放于发热的表面上。
7．判断，解释并记录所有的反应结果。
结果判读：见表:红细胞的ABO定型正向定型结果判读抗A 抗B抗A，B---O+-+ A-++ B+++ AB有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。
注意:1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。
血型的鉴定方法及操作
方法学评价
灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长时间保存 自动化程度高，实验过程标准化，ISO9000/CE认证 成本高
03
间接Coomb’s（indirect antiglobulin test, IDAT）
DAT：检查红细胞是否致敏
IDAT：检测血清中不完全抗体
原理和方法 低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液（resuspension)
正反定型不一致的可能原因（三）
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规则抗体和不规则抗体
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。
Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ
不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体均不符合上述规律。
正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体（unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
血型（blood type)
红细胞血型原理与检测策略
红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。
根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。
了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。
本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。
一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。
抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。
1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。
根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。
A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。
2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。
Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。
如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。
二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。
1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。
常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。
直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。
常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。
血型的鉴定方法及操作全解
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。 Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ 不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体 均不符合上述规律。 正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体 （unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗 原能发生凝集反应。 正定型：已知血型抗体试剂 + 红细胞
鉴定红细胞上血型抗原
反定型：已知标准红细胞 + 血清
鉴定血清中抗体
反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝 集反应 平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可 信赖。 应用：ABO血型定型、RhD抗原定型 （IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血
增强IgG抗体 的凝集作用
注意事项：
Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照
方法学评价
简单经济
稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血 型系统
3.抗人球蛋白实验（Coomb’s test）
原理和方法
抗IgG
待测红细胞 + 抗RhD（IgG）
红细胞凝集
+ 抗人球蛋白
应用延伸：
红细胞血型
红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion)
2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原
一、ABO血型系统
1. ABO血型抗原和抗体特性
2.ABO血型的遗传与生化
（1）ABO基因型与表型 A型——AA，AO B型——BB，BO AB型——AB O型——O
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。
筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。
这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。
在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。
对患者或供血者的血样不需要用这种方法。
在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。
筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。
这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。
如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。
因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。
红细胞血型检测技术
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞血型系统及其检测PPT课件
红细胞血型系统
主要内容： 红细胞血型系统免疫学基础 ABO血型系统 Rh血型系统 其他红细胞血型系统 多凝集红细胞
一、免疫学基础原理
（一） 抗原（antigen）
免疫原(immunogen）是能够刺激机体免疫 系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以 在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞 结合,产生免疫反应。
抗原抗体反应的特点
高度特异性 可逆性 比例性 两个反应阶段：致敏和凝集阶段
影响红细胞凝集反应的因素
抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度 红细胞间距离
常用红细胞抗原和抗体鉴定试验
生理盐水法
saline agglutination test
抗球蛋白试验 antiglobulin test , Coombs
抗原抗体反应的特异性
抗原的功能
抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液 免疫（humoral response）或细胞免疫（cellmediated response) 反应。
前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液 中；后者由淋巴细胞介导，出现延迟性超过敏反 应或排斥移植物的生物效应。
影响抗原免疫原性的因素
红细胞 红细胞
自然状态下的红细胞
黄色表示红细胞 表面的负电荷层
红细胞之间保持 24nm的距离
蓝色表示红细胞 周围的正电荷层
按抗体与抗原反应的最适温度，分为两种 冷型抗体 cold antibody 温型抗体 warm antibody
按照抗体与相应抗原的依存关系
规则抗体 不规则抗体（意外抗体）
输血前检查的要求
▪ 输入的红细胞 ▪ 输入的血浆成份
在受血者体内必须 不凝集或不溶血
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交叉配血的主次侧
（一）盐水介质交叉配血试验
• 本质凝集反应，直接凝集试验
• 检测IgM类抗体
• 方法：试管法
• ABO同型配血，主侧和次侧均无凝集及溶血，表示
抗球蛋白配血方法
患
者
37 ℃
主 侧
献 血 者
次 侧
37℃ 水浴30分钟
三洗
抗球蛋白方法配血方法
加 抗 球 蛋 白
阳 性
离心 看结果
阴 性
结果判读
• 直接抗球蛋白试验 • 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管 凝集，判定为阳性 • 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管 不凝集，需要做阴性确认后判定结果（无凝集 的被检管中加入IgG抗-D致敏红细胞后离心， 出现凝集判阴性，否则重新试验 • 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集， 结果不可信不发报告，分析原因重做
结果判读
• 间接抗球蛋白试验
• 阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管未呈现
凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，
被检者血清内含有抗体，如果自身对照无凝集 ，同种抗体；如果被检者结果阴性，被检者血 清中未被查出意外抗体。 • 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝
• （二）盐水介质玻片法
• （三）微柱凝胶血型定型检测卡法
• （四）质量保证：试管法、玻片法、卡式 • （五）方法学评价 • （六）临床应用 • （七）不一致原因及解决方法
ABO血型鉴定原理
正向定型：已知的特异性抗体（标准血清）检查红细胞的未知抗原
A抗原 B抗原 A和B抗原
无A和B抗原
反向定型：已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体
先加红细胞悬液，再加血浆或抗体试剂 红细胞悬液和血浆各加50ul 按照说明书操作
（五）方法学评价
试管法：常用，广泛，较玻片法灵敏，结果准确，反应时间短， 结果不能保存，人为因素大 玻片法：操作简单、无需特殊仪器，适用于血型普查；灵敏度差
，反应时间长，不能用于反定型，结果不能保存，人为因素影响大
重新采集献血者与受血者血液标本
查询受血者既往病史及输血史和用药史等
多次洗涤标本红细胞
应用抗-AB、抗-A1、抗-H检测红细胞
ABO正反定型不一致的原因
技术和 操作 受血者 红细胞 或血清
错加试剂或标本
试剂失效或污染
细胞与血清间 比例不适当
溶血现象未能识 别 漏加试剂 结果记录或判断错 误
血清异常 红细胞致敏 近期输血 疾病导致抗原 减弱 抗体减弱 不规则抗体 年龄 近期进行大量 血浆置换治疗
主要内容
ABO血型鉴定 RhD血型鉴定 交叉配血试验 红细胞抗体筛查及鉴定 血型鉴定和交叉配血自动分析 吸收放散试验
教学目标
• 掌握ABO和Rh血型鉴定、交叉配血试验原理、方
法和质量控制 • 熟悉红细胞不规则抗体筛查及鉴定方法 • 了解吸收放散试验
一、ABO血型鉴定
• （一）盐水介质试管法
RhD定型及其常见问题
1.Rh定型 RhD定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡 2.RhD阴性确认 IgM抗-D阴性
三个厂家IgG抗-D进行 确认
抗人球蛋白法进行确认
三种IgG抗-D试剂均为阴性，报RhD阴性
一种或一种以上IgG抗-D试剂为阳性，报弱D
三、交叉配血试验
概念：检测受血者和供血者血液中是否含有不相
体
• 间接试验：是检查血清中游离的不完全抗体
抗人免疫球蛋白 自身抗体
直接Coombs试验
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
抗人球蛋白交叉配血法示意图
1红细胞彼此之间有一定的间距
2不完全抗体可以结合在红细胞 表面,但是不能和两个红细胞 同时结合（致敏）。 3加入抗人球蛋白
4抗人球蛋白可以同时和两 个不完全抗体的FC段结合， 从而把红细胞连接在一起
，易发生血液污染 微柱凝胶血型定型检测卡法：特异性强、灵敏度高，结果准确， 保持时间长，标本和试剂用量少，操作可以标准化、自动化，减少 了医源性污染，但需要专门离心设备和试剂卡，成本较高
ABO正反定型的临床意义
输血治疗的首要步骤
组织器官移植
新生儿溶血病
ABO正反定型不符分析基本程序
首先重复试验
结果判定
新乡医学院第三临床检验教研室
微孔板法
（四）质量保证
试管法 标记 加样量、加样顺序 溶血是一种阳性反应 玻片法 标记 正定型 显微镜阴性确认
（四）质量保证
微柱凝胶血型定型检测卡
血清标本应完全取出纤维蛋白，血浆标本建议
EDTA-K2或枸橼酸盐康宁
C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂 或盐水层”相同。
原理：凝胶分子筛和亲和效应
微柱凝胶柱中填充凝胶（葡聚糖），及相应试 剂（抗体或抗原）。凝胶分子间的间隙只允许游 离红细胞通过，分子排阻层析原则将发生凝集反 应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的游离红 细胞则穿过微孔运动到管底，从而判定有无凝集 反应。
5
试管法
红细胞凝集强度判断标准
试管法结果判定
瓷板法
结果判定
凝胶技术的原理
反 应 室 反 应 室 底 孔 外管壁 亲和凝 胶
内 套 管壁
特殊粘液
试剂或 盐水 凝胶或 玻璃珠
凝胶技术的原理：
A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中 不会流入下方微柱中。 B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越 该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层 液体中的试剂反应。
抗A抗体 抗8/11/24
4
ABO血型鉴定结果判断
正向定型 （标准血清+被检者红细胞） 抗A + + 抗B + + -
反向定型 （标准红细胞+被检者血清） A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞 + + + + -
结果判断 A B AB O
2018/11/24
无输血禁忌，可以输血
盐水介质配血方法
患 者
主 侧 献 血 者 侧
阳 性
离心 次 看结果
阴 性
（二） 抗球蛋白介质交叉配血试验
抗人球蛋白试验：又称Coombs试验，是一种检
查不完全抗体的敏感方法
分类：直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
抗球蛋白试验原理
• Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接 与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞 凝集。 • 直接试验：是检查被检红细胞上有无不完全抗