染色体标本制备
染色体标本制备流程
染色体标本制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!染色体标本制备流程：1. 收集细胞，从组织或细胞培养物中收集分裂期的细胞。
染色体标本制备应用的原理
染色体标本制备应用的原理概述染色体是生物体内的重要遗传物质，对于研究生物遗传学和进化起着关键作用。
染色体标本制备应用则是通过特定的实验方法和技术，将染色体从细胞中提取出来，并制备成标本以供后续的研究分析。
本文将介绍染色体标本制备应用的原理，并分别介绍核型分析和荧光原位杂交（FISH）两种常见的染色体标本制备应用。
核型分析核型分析是一种常见的染色体标本制备应用，它通过观察和分析细胞的染色体形态和数量，可以确定染色体组成和结构的异常。
核型分析在遗传学、肿瘤学和胚胎学研究中有广泛的应用。
核型分析的原理主要包括以下几个步骤：1.细胞培养：将细胞样本培养在合适的培养基中，使其增殖到适当的数量。
常见的细胞样本包括血液、组织和胚胎等。
2.细胞停滞：通过加入特定的药物或物理因素，使细胞在特定的有丝分裂期停滞。
这样可以使染色体处于最佳的形态和数量状态。
3.细胞溶解：使用适当的细胞溶解方法，使细胞膜破裂释放出染色体。
常见的方法有加入低渗透压缓冲液或进行超声波处理等。
4.染色体标本制备：将溶解后的细胞标本进行处理，使染色体完整可见。
通常采用的方法有滴胶法、展片法和墨西哥帽抛物线法等。
5.染色体鉴定和分析：通过观察染色体的形态、大小和结构等特征，进行染色体鉴定和分析。
可以使用光学显微镜或高分辨率染色体分析仪等设备进行观察和分析。
核型分析可以帮助科学家了解染色体的基本特征和性质，同时也可以发现染色体的异常，如染色体数目异常、结构异常等。
荧光原位杂交（FISH）荧光原位杂交（FISH）是一种常用的染色体标本制备应用，用于检测和分析染色体上特定的序列。
通过在染色体标本中引入荧光探针，可以标记出特定的基因序列或染色体区域，从而实现对染色体结构和功能的研究。
荧光原位杂交的原理主要包括以下几个步骤：1.探针设计：根据研究的目的，选择合适的探针序列。
探针一般由DNA或RNA构成，其序列可以特异性地与目标染色体上的序列结合。
2.探针标记：将探针标记上荧光物质，常见的标记物包括荧光染料和荧光素。
良好小鼠染色体标本的关键步骤
良好小鼠染色体标本的关键步骤染色体标本制备是进行细胞遗传学与基因组学研究的重要步骤之一，尤其在小鼠模型中。
良好的染色体标本可以为后续的染色体分析提供准确可靠的数据基础，因此染色体标本的制备过程至关重要。
本文将介绍良好小鼠染色体标本制备的关键步骤。
1. 细胞培养与预处理在开始染色体标本制备之前，首先需要对小鼠细胞进行培养和预处理。
细胞应该在无菌条件下培养，以确保细胞的健康状态和纯度。
同时，在细胞培养的过程中，应加入适量的细胞分裂抑制剂，如科林霉素或染色体解旋酶抑制剂，以防止染色体的损伤和断裂。
2. 细胞采集与固定经过适当的培养和预处理后，可以开始进行细胞采集与固定的步骤。
通常采用离心沉淀法或原位固定法进行细胞的采集。
离心沉淀法适用于大规模采集细胞，而原位固定法适用于对特定细胞进行选择性标本制备。
无论采用哪种方法，细胞在采集后应立即进行固定以避免细胞结构的变形和损伤。
3. 细胞裂解与染色体释放细胞固定后，接下来需要进行细胞的裂解与染色体释放。
常用的裂解方法有加入低渗透压缓冲液或高渗透压缓冲液，使细胞膜破裂释放染色体。
此外，还可以通过超声波处理或机械剪切等方法促进细胞的裂解和染色体的释放。
裂解后的细胞溶液应进行离心，以分离出染色体。
4. 染色体的固定与染色离心后的染色体需要进行固定与染色，以保持其形态结构和增强对染色体的观察。
常用的固定方法包括加入甲醛或醋酸乙酯等，固定时间需根据实验需求进行调整。
染色体的染色可以通过Giemsa染色、DAPI染色等方法进行。
染色后的染色体应进行洗涤以去除多余染料。
5. 染色体的显微观察与分析经过固定和染色的染色体标本可以进行显微观察与分析。
通常使用光学显微镜或荧光显微镜进行观察，并可以利用图像分析系统对染色体进行计数、测量和分析。
在观察和分析过程中，应注意保持显微镜和标本的清洁，以避免杂质的干扰和误判。
良好小鼠染色体标本的制备是一个复杂的过程，需要经过细胞培养与预处理、细胞采集与固定、细胞裂解与染色体释放、染色体的固定与染色以及染色体的显微观察与分析等关键步骤。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
实验五-人类染色体标本制备
实验五-人类染色体标本制备实验目的了解人类染色体的结构和形态，学习制备人类染色体标本的方法。
实验原理人类染色体是由DNA和蛋白质组成的细胞核内生物大分子。
它们是非常细小的、线性的、染色体形态因不同的染色体而异。
人的细胞内共有46条染色体，其中，44条是自动对应的配对染色体，男性有一对性染色体（XY），女性有两条同源性的性染色体（XX）。
制备人类染色体标本需要对细胞进行处理，使其在显微镜下展示出明显的染色体结构。
常用的制备方法是细胞悬液滴落法，即将细胞悬液滴于载片上，在经过一系列的处理后，使其形成明显的染色体结构。
实验步骤1.取合适数量的细胞悬液，滴在已经清洗干净的载片上；2.将载片在干燥器中干燥1小时左右；3.取三瓶试剂，分别为80%乙醇、95%乙醇、细胞色素，放置在洁净的台面上备用；4.将载片沉于80%乙醇中，浸泡5分钟；5.将载片取出，去除乙醇，挥干后，再将载片沉于95%乙醇中，浸泡5分钟；6.将载片取出，去除乙醇，挥干后，将其浸泡在细胞色素溶液中15-30秒；7.将载片在流动自来水下快速漂洗干净，挥干，然后在100%乙醇中固定3-5分钟；8.将载片气干（可用酒精灯），涂两三滴甘油，再覆盖薄玻璃片即可。
实验结果制备好的人类染色体标本可以用显微镜观察到细胞核内的染色体。
成品的标本应该能够清晰地显示出染色体的结构和形态，如下图所示：chromosome1.jpg实验注意事项1.操作时要注意卫生和安全；2.选择细胞悬液的质量对制备染色体标本的质量会有影响；3.操作中需要用到一次性手套；4.操作时尽可能避免离心过度，避免对细胞造成破坏。
实验通过本次实验，我们学习了制备人类染色体标本的方法，掌握相关的操作技巧，对人类染色体的结构和形态有了更深入的了解。
在实验过程中，需要注意卫生和安全，避免对实验者本身和实验环境造成不必要的伤害。
人类染色体G显带标本的制备
注意事项
良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多， 且染色体分散要好。
染色体长度应能适应显带分析技术的要求。
G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间 之搭配。
实验结果
低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍 镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱 满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可 显出深浅不同的G带横纹。
试剂及器材
试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、 Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理 盐水。
器材： 37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴 头。
实验步骤
取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的 染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2 滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。
Байду номын сангаас
Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖 于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色 首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础 上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环 境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预 处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结 构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的 蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。
原理
常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各 种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理 再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两 臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰 蛋白酶法。
可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对， 在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之 一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且 与结合DNA的染色质非组蛋白有关。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
实验四 植物染色体标本的制备与观察
实验四植物染色体标本的制备与观察一、实验目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。
2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。
二、实验原理染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。
植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。
（二）材料：蚕豆(Vicia faba, 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale, 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum, 2n=2x=42)、玉米(Zea mays, 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum, 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa，2n＝16）等根尖。
（三）试剂1、Carnoy固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。
2、苯酚品红染色液。
四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本：(1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h后幼根长至1—2cm左右，于上午9—11时剪下根尖。
(2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h。
(3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液中固定2-4h，转入70％乙醇中，4℃保存备用。
(4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl中60℃解离8－10min，再用蒸馏水洗净。
(5) 染色：改良苯酚品红染色5—10min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 4、制片： （1）离心：从温箱中取出培养瓶，用毛细吸管将培 养液转入5ml的刻度离心管内。1200rpm，离心 8min。 （2）低渗：弃去上清液。加入37℃预热（中午开 水浴箱）的0.075mol/L KCl低渗液，加至5ml，用 毛细吸管轻轻吹打均匀，放在37℃恒温水浴中 20min。 （3）预固定：在离心管中加入现配的（实验前配制） 甲醇-冰醋酸(3:1)固定液约0.5ml，用毛细吸管吹 打轻轻混匀, 室温固定20min。 （4）再次离心：1200rpm离心8min。
实验步骤
• 1、采血：将皮肤常规消毒后静脉采血约2-3ml 。 • 2、种血及培养：将7号针头缓慢加15滴（约0.3 ml 血样）立即接种含到5ml培养液（含PHA ）的培养 瓶内，轻轻摇匀后将培养瓶放在37℃温箱中培养 72h。培养过程中，每天应轻轻摇动两次培养瓶。 • 3、秋水仙素处理：在终止培养前4h加秋水仙素处 理（星期五上午11：30加），向各培养瓶中加2滴 秋水仙素（终浓度20µg/ml），轻轻摇匀后继续培 养。
外周血染色 • • • 血样：每班6个同学采集外周血 试剂： 1640培养液含植物血凝素(PHA)， 20µg/ml秋水仙素液， 0.075 mol/L KCl溶液 固定液：甲醇-冰醋酸(3:1) （实验前配制） Giemsa液
实验仪器及用具
• 恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱 、冰箱 • 注射器以及消毒酒精 • 培养瓶120个、吸管120支、离心管 (5ml)120支、 • 冰载玻片： 饭盒加纯净水，加冰，4度冰箱， 120张。
（5）第一次固定：弃上清液，加入固定液约5ml， 立即用吸管吹打使之成细胞悬液，室温固定 20min。1 200rpm离心8min。 （6）第二次固定：同第一次固定。 （7）弃上清液，根据沉淀量的多少，加入适量固定 液1～2滴，用吸管吹打使均匀后制成细胞悬液。 （8）滴片：在30-40cm高处将细胞悬液滴在预冷的 载玻片上，注意动作应迅速，避免载片升温。马 上吹散，酒精灯烘烤（烘干50－60％程度），滴 －吹－烤。 样本编号后学生本次实验结束。老师课后染色。
（9）扣染：用10%吉姆萨染液扣染30min， 染色结束后用清水将浮色冲去，干燥后即 可进行镜检。 （10）照相：在显微镜下寻找分散较好的分 裂相(核型)，再置于显微照相仪下拍摄照片， 并保存。 （11）核型分析：应用核型分析软件，进行 染色体核型分析。
注意事项
1、 秋水仙素处理的时间与浓度要控制得当：秋水仙素处理 时间过长，分裂细胞多，染色体短小；反之，则少而细长。 都不宜观察形态及计数。 2、低渗处理的时间与浓度要适当：低渗使红细胞膜破裂， 淋巴细胞膨胀，其处理浓度及时间要 适当。且低渗后混 匀细胞一定要轻，否则引起膜破裂、染色体散失。 3、在滴片时一定要迅速、准确，高度足够高，玻片保持足 够冷。 4、离心前配平，离心速度过高，细胞团不易打散；反之， 细胞易丢失。 5、固定液应在使用前临时配制。 6、载玻片一定要洁净，否则染色体分散不好。