鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析
鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
１ ． ２ ． ７ 动物试验
将纯 培养的细菌接种 一 ｆＳ ｍｌ 营 养肉汤。
置 于３ ７ ℃培养２ ４ ｈ 。取２ ０ 只小 白 鼠，雌雄各 半 随机 分为
２ Ｎ ，试 验组 小 白鼠为１ ４ 只 ，腹腔 注射菌 液０ ． １ ｍｌ ／ 只 ；对 照组小 自鼠６ 只 ，注 射Ｄ Ｈ值为７ ． ６ 的生理盐水０ ． １ ｍｌ ／ 只 ，４ ｈ
关键词 鸡 白痢 沙 门氏 分离 鉴定 药敏 试验
中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ １
文 献标识码 ：Ａ
文章编号：１ ０ ０ ７ ． １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ ｔ ２ ． ０ ３
酵管和 其他 生化反 应管 中 ，置 于３ ７ ＂ Ｃ温箱培养 ，每 曰观 察 ；采 用 沙 门 氏菌 诊 断 ｍ清 对 分 离 菌株 进 行ｊ ｆ 【 Ｌ 清 型鉴
取肺 组织进 行真 菌分 离培养 来分 离到任何 真菌 ；于
盲肠 内榆查到异刺线虫７ 条 ，ｆ肠道榆 查到绦虫ｌ 条 ，除此 之外 ，末见其他寄生虫和虫卵。 ３ ． ３ 分离菌株培养特性
特 征 。将细 菌 纯 培 养物 接 种 于 ｊ 糖 铁 琼 脂 ，３ ７ ＂ Ｃ培 养
２ ４ ｈ。
所。
养物分别用灭菌生理盐水冲洗 ，稀释 成浓度 为３ ｘ ｌ Ｏｔ ｅ ｆ ｕ ／ ｍｌ
的荫 液 ，吸取稀释 菌液 均匀涂 布 于普通平板 。室温 放置
５ ａｉ ｒ ｎ 后 ，分别 贴上 符 种药 敏 纸片 ，３ ７ ＂ Ｃ条件 下培 养 １ ６ ～
１ ８ ｈ ，观 察 并 测 量 抑 菌 环 大 小 。
鸡致病性大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验
中 图 分 类 号 ：８ ２６ ￥ ５ ．１ ４ ２
文 献 标 识 码 ：Байду номын сангаас Ｂ
文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （ ０ ）２ ０ ０ — ２ １０ — ０ ０ ２ １ ０ — ０ ３ ０ １
鸡 大肠 杆 菌 病 是 由大肠 杆 菌 的某些 致 病 性 血清 型 引
临床 剖检 有典 型心 包炎 、 周炎 、 肝 气囊炎 或 卵黄 性腹 膜炎 ，
疑 似 为 大 肠 杆 菌 感 染
１２ 试 剂 ． ・
分 离 、 定 ， 到接 种后 ７ｄ为止 。７ｄ后仍 存 活 的鸡 进行 鉴 直 解 剖 ．观 察病 变 作 细菌 分离 鉴 定 根 据 鸡 的死 亡 数 和病 变 程度确 定 分离株 的致 病性 １３ ．． 药 敏 试验 ４ 按 ＷＨ Ｏ推 荐 的 Ｋｒｖ Ｂ ｕ ｒ 片 扩散 ｉ — ａｅ 纸 ｂ
加 大肠 杆 菌病 给养禽 业造 成 了严 重的 经济 损失 ． 国每 我 年 因大 肠杆 菌病 造成 的经 济损 失达 ３ 多元 ． 亿 而且还 有增
加 的 趋 势 … 据 对 南 阳 市 及 周 边 主 要 养 禽 集 中 区 及 兽 医 门
诊 的调查 ． 规模 养禽场疫 病 的发 生 以大肠 杆菌病 居首位 。 由 于其 血清型 复杂 ． 耐药菌株 不断增 加 ． 给防治工 作带 来 了巨
苯尼 考 等有 一定 的 耐药 性 对 头孢 噻肟 、 丁胺 卡那霉 素 、 壮 观霉 素 和新 霉素 较 敏感
３ 讨 论 ３１ 血 清 型 分 析 ．
是卫 生 状 况差 、 养 密度 大 、 理 粗放 、 毒 不 严格 、 用 饲 管 消 使
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
通过革兰氏染色分离菌株显示阴性小杆菌，多单个验鉴定情况
分离出菌株的生化试验结果能发酵麦芽糖、乳糖、葡萄糖、 甘露醇，均能产酸产气，大多数菌株不发酵蔗糖，少数缓慢发 酵，VP实验、枸橼酸盐试验均为阴性，MR试验、吲哚试验均为 阳性，以上试验结果可以证明分离出的菌株为大肠杆菌。 2.4 毒力试验情况
用19种药物对分离出的菌株进行药敏试验，其结果如附表所 示。
附表 分离菌株的药物敏感性实验结果 （mm）
抑菌药物
判断标准 耐药 中敏 敏感
抑菌圈 直径
判定 结果
氟苯尼考
≤12 13～17 ≥18
13±2
中敏
复方新诺明 ≤12 13～16 ≥17
0±5
耐药
螺旋霉素 ≤13 14～17 ≥18
22±3 敏感
（2）试剂准备：麦康凯琼脂培养基及生化试剂均由市场采 购。
（3）药片准备：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素 等含药纸片。
（4）实验动物选用昆明系小白鼠雌雄各6只。 1.2 试验方法 1.2.1 病株的分离与培养 将提前采集的心血、肝、脾、等样品 接种在麦康凯琼脂培养基上，于恒温箱内37℃培养18～24h，观察 菌落生成情况，从培养基上挑取粉红色、表面光滑的单个菌落分 别接种到营养琼脂斜面上，于恒温箱内37℃培养18～24h后，置冰 箱备用。 1.2.2 染色镜检 将以上所得的菌株分别进行涂片，革兰氏染色 后镜检，通过观察细菌形态和染色特征，选取符合大肠杆菌形态 特征的菌株进行生化实验。 1.2.3 生化试验 用分离出的纯培养物进行吲哚试验、枸橼酸 盐试验、MR试验、VR试验、糖发酵试验，根据观察变化记录结 果。 1.2.4 毒力实验 选取通过镜检及生化反应的大肠杆菌特性的菌 株接种营养琼脂平板，于恒温箱内37℃培养18h，将菌落制成菌悬 液。选取小白鼠公母各3只，一组每只皮下注射0.2ml菌悬液，另 一组注射相同剂量的无菌生理盐水。观察将1～2d内死亡的小鼠立 即解剖，采取其心血接种于营养琼脂培养基上，于恒温箱内37℃ 培养18h，并对分离出的菌株进一步鉴定。 1.2.5 药敏试验 将0.1ml稀释好的菌液接种到平板上，让菌液
禽霍乱病原菌的分离鉴定及药敏试验
２ 方 法
禽 霍乱 病 原 菌为 多 杀性 巴氏杆 菌 ， 一种 环 境 是
． 济 损失 。常常造 成严 重 的 经 济损 失 ， 霍 乱又 称 禽 ２ １ 从流行 病 学特点 进行鉴 定 禽
当 败血 性传染 病 ， 病发病 率死亡 率较 高 ， 此 急性 型呈 败 中广泛存 在 的条件 性 致 病 菌 ， 细菌 和 鸡体 之 间 的 细 血症剧 烈下痢 ； 慢性 型 以发 生 肉髯 水肿 和关 节 炎为 平 衡状态 被破 坏时 ， 菌 毒力 增 强 而鸡 体 抵 抗力 下 特征 ， 由于引起 禽霍 乱 的 禽 多杀 性 巴 氏杆 菌 容 易产 生 耐药性 ， 因此 在生 产 上 常造 成抗 菌药 物 治疗 效 果 不好 的情 况 。禽 霍 乱可 以各种 年 龄 的禽类 ， 性 成 但 熟后 的鸡 更 为 敏 感 ， 常 ６月 龄 以 内 的 商 品 蛋 鸡 通
学 ） 。
（ ） 验动 物 。实 验选 用 晋 中种 鸡 场 疑 似禽 霍 １试
很高 ， 曾用 多种抗 生 素 治疗 ， 效 果 均不 理 想 ， 但 应用
（） ２病料 。病死 鸡 的肝 、 、 、 等 。 脾 肾 肺
多 杀性 巴氏杆 菌疫 苗也不 能控 制该疫病 的流 行 。经
（） ３ 培养基 。鲜 血琼脂 培养基 和麦 康凯培 养基 ， 剖检 死鸡 多 只 ， 理变 化 主要表现 为心包 积液 ， 病 心冠 均按 常规方法 配制 ， 类 生化 反 应 培 养基 和 试 剂购 脂肪和心外膜有多量针尖大小出血点 ， 各 有肌 胃和腺 自广州合 华科技 有 限公 司。
有鸡霍乱并从病鸡上分离到 １ 株禽多杀性 巴氏杆菌 ， 采用纸 片扩散法和试管 稀释法分别 测定 了青 霉素钾 、 土霉 素 、 酸卡那霉素 、 酸庆 大霉素 、 硫 硫 硫酸链霉素 、 甲砜 霉素、 氟哌酸 、 环丙沙 星和恩诺 沙星等 ９ 药物对分离 菌的 种 体外抗菌活性。结果表 明分离到的禽多杀性巴氏杆 菌对 青霉 素钾和土霉 素耐药 ； 对硫酸 卡那霉素 、 硫酸庆大 霉 素、 硫酸链霉素 、 甲砜霉素 、 哌酸敏感 ； 环丙沙星 和恩诺沙星极敏感 。结合临床症状及 实验 室诊断 ， 氟 对 确诊此 次
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。
为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。
关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。
1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。
液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。
禽多杀性巴氏杆菌病病原的分离鉴定和药敏试验-最新年精选文档
禽多杀性巴氏杆菌病病原的分离鉴定和药敏试验1 巴氏杆菌属概述巴氏杆菌［1］属(Pasteurella )分类地位未定的1属，为无芽孢，不运动，兼性厌氧，菌体两端常染色浓重的革兰氏染色阴性小杆菌［2］，因1880 年巴斯德氏首先自病鸡分离到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。
［3］该属已确定的种有多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和鸭疫巴氏杆菌等。
属中的多杀巴氏杆菌危害畜、禽最严重，主要引起动物发生出血性败血症。
从发病动物体液或组织中培养分离到的菌落基本有两型：一为在过45°折光，低倍显微镜下，呈现鲜明的蓝绿色而带金光，边缘有狭窄的红黄色带的Fg 菌落型，相当于血清型乙型；另一为在45°折光下，低倍显微镜下，菌落呈现橘红色、边缘稍带狭窄的黄绿光的F0菌落型，相当于血清型甲型［4］。
在中国，牛、猪、驴和马的多杀巴氏杆菌病绝大多数为Fg型菌所致，家禽流行性巴氏杆菌病都是F0型菌所致［5］。
多杀巴氏杆菌菌体抗原有12个型，荚膜抗原有5 个型，前者以阿拉伯数字表示，后者以英文大写字母表示，如1：A，2; A，1：B等，已知组成的菌型有16个。
本菌血清型与宿主的分布有一定关系，其细胞壁含有明显的内毒素活性，但未发现外毒素。
本菌可引起家禽霍乱的暴发性流行，牛的出血性败血病、原发性或继发性肺炎等，国外免疫用的菌苗以加不同佐剂的灭活菌为主，也使用禽霍乱弱毒活菌，中国已于1959年使用弱毒活苗[6] 。
2 多杀性巴氏杆菌及其危害多杀性巴氏杆菌( Pasteurella multocida ，Pro )是一种重要的病原菌，对多种动物和人均有致病性，可以导致猪肺疫、禽霍乱、牛羊兔出血性败血症等危害严重的畜禽传染病。
多杀性巴氏杆菌正常存在于多种健康动物的肺和咽喉部黏膜，当动物处于应激状态、机体抵抗力低下时，细菌侵入体内，大量繁殖并致病，发生内源性传染。
此菌类在同种或不同种动物间可相互传染，蝉和蚤被认为是自体传播的媒介昆虫[7] 。
雏鸡关节炎病原菌株分离鉴定及药敏性分析
做 两个 重 复 。把 抑 菌 圈直径 的大 小作 为 判定 药 物敏 感 性 的高 低 的 式 报告结 果 ，即敏感 、 中度敏 感和 耐药 （ 见表１ ）。
表 １具体判定标准
结 果表 明 ，对鸡 的细 菌 性疾 病 ，采 取 预 防措 施 ，对 症 下药 是 提 高 标 准 ，采用 ＷＨ Ｏ 质 控标 准 菌 的敏 感性 及 菌 环大 小 ，采用 划 分方
保定地区鸡多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
菌 落形 态 一 致 的 菌 落 ， 涂 片 ， 兰 氏 经 革
染 色 ， 检 。 染 色 特 征 上 应 为革 兰 氏 镜 在
阴性 小 杆 菌或 球 杆 菌 ，菌 体形 态也 一
发展 趋 势 ， 细 菌 来 讲 ， 现 单 一 耐 药 从 呈 到多 重 耐 药 趋 势 。 药 物 来 讲 ， 现 低 从 呈 耐 药 率 到 高 耐 药 率 的 趋 势 。 且 发 展 速 度 越 来 越 快 尤 其 是 人 类 在 畜 禽 疾 Ｉ 。 病 治 疗 过 程 中 大量 不 当 使 用抗 菌 药物
２ 察 菌 落 特 征 ， 选 典 型 菌 落 接 ４ｈ观 挑 种 到 斜 面 培 养 基 上 ， 温 保 存 ， 鉴 低 待
定。
病原 分 离鉴 定 ． 终 确 定病 原 体 为禽 多 杀性 巴 氏杆 菌 。 用 １ 种 药物 做 了药 敏 最 并 １ 试 验 ． 果 该 鸡 场 分 离的 鸡 多 杀 性 巴 氏杆 菌 除 对 恩 诺 沙 星 、 丙 沙星 两 种 药 物 结 环 敏 感 ， 氟派 酸 中介 外 。 其 余 的 ８种 抗 生 素 均 产 生 耐 药 性 。 对 对
医药 品监 察 所 。 １１ ．． 验 动 物 ： 重 ２ － ５ｇ小 白 鼠 ４实 体 ０ ２
１ 只。 ２
１２ 试 验 方 法 ．
１ ． 料 涂 片镜 检 ： 鸡 肝 脏 ， 其 ． １病 ２ 病 用 新鲜 切面在玻 片上压 印， 加 几滴 甲 滴
０ １０ ） ７ ０ １ 醇 ， 用 ２ ３ｍ ｎ 自然 干 燥 。 后 分 作 — ｉ， 然
关 键 词 多杀性巴氏杆菌
分 离鉴定
药敏试验
鸡
１ Ｉ 离 菌 的 生 化 鉴 定 ：１ 分 离 菌 ． ３分 ２ （） 的纯 度 检 验：分 离培 养 物 在 进 行 生 化 鉴 定 之 前 ， 检 查 培 养 物 的 纯 度 。 将 要
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鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析
作者：陈巨清，杨振燕
来源：《兽医导刊》 2016年第7期
陈巨清/ 石家庄市牧工商杨振燕/ 河北蔚县农牧局
大肠杆菌病和沙门氏菌病，是目前危害养鸡业最常见的细菌性疫病。
大肠杆菌和沙门氏菌
混合感染是目前禽病流行中的主要趋势，一旦感染死亡率较高，从而引起更为严重的经济损失。
两种细菌血清型种类较多，不同地区差别较大，不同菌株之间不产生交叉保护作用，极易产生
耐药性。
本文针对山东省某一养殖户发病鸡群，根据临床症状和剖检病变初步诊断为大肠杆菌
和沙门氏菌感染，为了进一步确诊送检病料至实验室检测。
一、材料与方法
（一）材料
1. 病料来源。
山东某养殖户鸡群23 日龄，出现死淘增加，日死淘1‰～2‰，鸡群有部
分鸡出现羽毛蓬松，精神不振，拉白色稀粪。
剖检死鸡80% 以上出现心包炎、肝周炎，肠黏膜
脱落，其它无明显病变。
初步诊断为大肠杆菌、沙门氏菌感染，取四只死鸡送至实验室进行检测。
2. 材料。
麦康凯培养基，自制药敏片，解剖刀，解剖剪，镊子，显微镜，细菌生化反应管，37℃温箱。
（二）方法
1. 细菌分离培养。
将送检的只死鸡进行剖检，取肝脏无菌接种到麦康凯培养基上，经过37℃培养24 h。
2. 细菌形态学观察。
取在麦康凯培养基上培养24 h 可疑菌落，抹片，进行革兰氏染色镜检。
3. 生化试验。
挑取疑似大肠杆菌和沙门氏菌菌落经过纯化培养后，用细菌生化反应管进行生化鉴定。
4. 药敏试验。
将10% 氨苄西林钠、5% 恩诺沙星、5% 阿莫西林、10% 强力霉素、10% 氟
苯尼考、10%粘杆菌素、硫酸头孢噻呋钠、10% 林可霉素8 种抗生素制成药敏片，将被检细菌
涂布接种于普通琼脂平板上，间隔一定距离贴上各种药敏片，于37℃温箱培养24 h，结果判断依据《纸片法抗菌药物敏感试验操作标准( 第四版)》进行。
二、结果
（一）细菌分离培养
麦康凯培养基上1#、2#、3#、4# 均长出米粒大小，桃红色菌落及淡橘黄色菌落（见图1）。
（二）细菌形态学观察
挑取可疑菌落革兰氏染色，400倍镜检，可见G- 中等杆菌，疑似大肠杆菌（见图2），G- 短杆菌，疑似沙门氏菌（见图3）。
（三）生化试验
1. 挑取疑似大肠杆菌的细菌分别做枸橼酸盐试验、靛基质试验、MR 试验、VP 试等生化试验，均符合大肠杆菌的生化特性（见表1）。
2. 挑取疑似沙门氏杆菌的细菌分别做色氨酸肉汤、赖氨酸、氨基酸对照、尿素、氰化钾、氰化钾对照、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、ONPG 等生化试验，均符合沙门氏杆菌的生化特性（见表2）。
（四）药敏试验
药敏试验表明：分离出的大肠杆菌、沙门氏菌对恩诺沙星、头孢噻呋敏感，对氨苄西林钠、粘杆菌素中敏，其它低敏或耐药。
见表3，表4。
三、方案制定及效果
方案：10% 氨苄西林钠1 g 兑水1.5 L 水，配合10% 粘杆菌素1 g兑水1.5 L 水，连用
四天。
效果：连用四天后，粪便明显好转（见图4，图5），死淘也有所下降（表5），治疗结果
明显。
四、讨论
1. 随着养殖设备的更新换代，饲养技术的提高，饲养密度也越来越大，这对鸡舍环境和生物安全要求越来越高，否则鸡群极容易发生细菌感染，造成损失。
2. 近年来，为了防治某些细菌感染，在饲料和治疗中常盲目使用一些抗菌药物，以致产生许多耐药菌株。
大肠杆菌和沙门氏菌易产生对抗生素的耐受性，而且多重耐药现象严重。
因此，有条件的应做药敏试验，根据药敏试验结果选择敏感药物。
3. 从药敏试验结果可以看出该鸡群对很多药物产生耐药性，恩诺沙星敏感，但目前屠宰企业已将氟喹诺酮类列为禁用药，所以该病例不能使用恩诺沙星。
头孢噻呋钠也是敏感药物，但
是鸡群23 日龄，使用成本较高，因此选择10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素配伍使用。
4.10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素配伍使用，从鸡只死淘情况以及粪便改善情况来看取得较好效果，10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素在鸡上的休药期是7 d，不会造成药物残留，且成本不高。