分子生物学名词解释及问答题

名词解说操控子：是原核生物基因的一个基本转录单位，由编码序列及上游的调控序列构成。

编码序列往常包含几个功能有关的构造基因，调控序列有启动序列（启动子）、操控序列（操控基因）及其余调理序列构成。

顺式作用元件：是真核基因变大调控转录过程的特别DNA 序列，于转录因子联合而起作用，往常包含启动子、增强子、缄默子等。

反式作用元件：与其余基因的顺式作用元件联合，调理基因转录活性的蛋白质因子，依据功能不一样分为基因转录因子和特异性转录因子。

启动子：位于构造基因上游、与RNA 聚合酶辨别、联合的特异DNA 序列，与基因转录起始有关。

同源重组：是指发生在同源序列见得重组，它经过链的断裂和再连结，在两个DNA 分子同源序列间进行单链或双链的互换。

又称基因重组。

DNA 克隆：将重组分子导入适合指在体外对 DNA 分子依据既定目的和方案进行人工重组，细胞内，使其在细胞扩增和生殖，进而获取该DNA 分子大批拷贝的过程称为分子克隆，又叫基因克隆或重组 DNA 技术。

基因工程：在体外将目的基因和载体DNA 依据既定的目的基因进行人工重组，并将重组体导入宿主细胞，经过无性生殖和表达获取所需核酸、蛋白质、生物新品种。

包含转基因动物、植物、基因工程生产药物、基因诊疗和基因治疗等。

限制性核酸内切酶：指一类能辨别和切割双链DNA 分子内特定的碱基次序的核酸水解酶，绝大部分是从原核细胞中提取的，可分为三类，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。

pBR322 ：是研究最早、最清楚的质粒，其所有次序为4363bp，含有一个复制原点、一个Amp r 和 Tet r标志，有限制酶酶切位点，可供外源性基因插入，利用这种遗传标志，有益于挑选出重组转变菌。

gDNA 文库：即基因组 DNA 文库，是指存在于转变菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA 的会合。

它涵盖了基因组所有基因信息。

cDNA 文库：是细胞总mRNA 的克隆，文库只包含表达蛋白质或多肽的基因。

感觉态细胞：用适合的理化方法办理受体菌后，使宿主细胞处于最适摄入和容忍重组体的状态，此时的宿主细胞即称为感觉态细胞。

基因诊疗：又称DNA 诊疗，是利用分子生物学即分子遗传学的技术和原理，在DNA 水平剖析、判定遗传性疾病所波及的基因异样。

基因治疗：向有功能缺点的细胞导入拥有相应功能的外源基因，以纠正活赔偿其基因缺点，进而达到治疗的目的，包含体细胞基因治疗和性细胞基因治疗。

目的基因：要分别和克隆的相应基因常称为目的基因，宿主细胞内进行复制或表达，因此对宿主细胞DNA因目的基因片段需要插入载体，导入而言，又称它为外源性基因或外源性DNA 。

质粒：是独立于细菌染色体以外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA 。

细胞信号转导：细胞针对外源信息所发生的细胞内生物学变化及效应的全过程。

受体：（receptor ）是细胞膜上或细胞内能辨别外源化学信号并与之联合的成分，其化学实质是蛋白质，个别糖脂。

鸟苷酸联合蛋白（ G 蛋白）：亦称 GTP 联合蛋白，是一类信号转导分子，此类蛋白因为其生理活性有赖于三磷酸鸟苷（ GTP）的联合以及拥有 GTP 水解酶的活性而得名，在各样细胞信号转导门路中转导信号给不一样的效应蛋白。

核酸分子杂交：指用已知的DNA 或 RNA 来检测样品中未知核苷酸次序的分子生物学技术，若两者联合后，经显影或显色可知联合的地点和大小，这一过程称为核酸分子杂交。

印迹技术：将凝胶中分别的生物大分子转移（印迹）或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。

核酸探针：指用来检测某一特定核苷酸次序或基因次序的有同位素或非同位素标志的已知DNA 或 NA 片段。

Southern 印迹：由 E.Southern 创办，利用毛细作用将凝胶中的DNA 片段转移到载体膜上（ NC 膜），并将 DNA 固定于膜上的过程称为Southern 印迹。

PCR 及 RT—PCR：PCR 即聚合酶链反响，是体外DNA 的合成、扩增和放大技术。

经变性、退火、延长的若干循环，极微量的目的基因被特异扩增和放大，RT-PCR 即逆转录 PCR，又称 RNA-PCR ，是以 mRNA 为模板，经逆转录和体外扩增放大获取大批cDNA 的一种 PCR 技术。

基因组文库（gDNA library ）：包含某一个生物的所有基因组DNA 序列的克隆集体，以 DNA 片段的形式储存着某一世物的所有基因组DNA 信息。

cDNA 文库：包含某一组织细胞在必定条件下所表达的所有mRNA 经反转录而合成的 cDNA 序列的克隆集体，它以cDNA 片段的形式储存着该组织细胞的基因表达信息。

基因芯片：指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或许直接将大批DNA 探针以显微打印方式有序的固化于支持物表面，而后与标志的样品杂交，经过对杂交信号的检测剖析，即可得出样品遗传信息。

蛋白质芯片：将高密度集摆列的蛋白质分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测样品反响时，可捕捉样品中靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量剖析的一种技术。

写出以下代号的中文名称：PCR-RFLP:PCR 联合限制性片段长度多态性剖析（将正常和致病基因的PCR 制内切酶消化，可得长度不等的限制性片段，据此判断致病基因有无的剖析方法。

产物经同一限）PCR-ASO:PCR 产物与等位基因特异寡核苷酸探针的杂交剖析PCR-SSCP:PCR 产物的单链构象多态性剖析DGGE: 变性梯度凝胶电泳DMD: 杜氏营养不良症SRY 基因： Y 染色体性别决定基因CT-PCR：模板竞争PCRRAPD ：随即扩增的多态性DNADDRT-PCR ： RNA 差异显示逆转录PCR转基因技术：采纳基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，而后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。

核酸转移技术 : 核转移技术是将动物的一个体细胞核导入另一个体得去除了胞核的卵细胞内，将该卵细胞导入动物子宫，使之发育成个体。

基因剔除技术: 有目的地去向动物体内某种基因的技术或基因靶向灭活，其基来源理是成立在同源重组的基础上。

功能克隆和定位克隆：功能克隆是指对一种致病基因功能的认识出发克隆该致病基因。

定位克隆是指从一种致病基因的染色体定位出发逐渐减小范围，最后克隆该基因。

基因诊疗：经过直接检测基因的构造及其表达水平能否正常，进而对疾病做出诊疗的方法，往常用于遗传病、病原体、肿瘤等基本，基因补充：将目的基因导入病变细胞或其余细胞，经过目的基因的非定点整合，使其表达产物赔偿缺点基因的功能或使原有的功能得以增强。

基因疫苗：指 DNA 疫苗将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中，直接导入人体内，使抗原基因在一准时间内连续表达，不停刺激机体免疫系统，达到防病或治病目的。

自杀基因：指宿主细胞获取的外源基因，表达某种酶能将对宿主细胞无毒或低毒的药物前体转变成细胞毒性物质，致使宿主细胞死亡。

该基因称为自杀基因，可用于肿瘤的基因治疗。

写出以下代号的中文名称：RFLP ：限制性片段长度多态性性 PCR-ASO ：聚合酶链式反响VNTR：可变串连重复多态性-等位基因特异性寡核苷酸SSCP：单链构象多态问答题试述乳糖操控子的调控体制。

（ 1）乳糖操控子的机构中含有Z、 Y 、A 三个构造基因，分别编码利用乳糖乳糖的β-半乳糖苷酶、通透酶、乙酰基转移酶。

别的还有一个操作序列O、一个启动序列P 及上游的分解代谢物基因激活蛋白（CAP ）联合位点，构成乳糖操控子的调控区。

在操控子的上游还有一个调理基因I,编码一种隔绝蛋白，后者可与O 序列联合而使操纵子处于封闭状态。

（ 2）乳糖操控子的负调控：当细菌以葡萄糖为能源时，i 基因编码一种隔绝蛋白，与O 序列联合，阻挡 RNA 聚合酶与 P 序列联合和向构造基因挪动，而克制构造基因的转录。

（ 3）乳糖操控子的正调控：当细菌只好以乳糖为能源时，乳糖转变成半乳糖，后者与阻遏蛋白联合，使其构象变化而不可以联合O 序列，进而引诱转录过程。

同时，细胞内cAMP 的含量高升， cAMP 与 CAP 联合，使 CAP 联合到 CAP 联合位点上，促使转录过程。

何谓限制性核酸内切酶？Ⅱ型限制酶的作用特色是什么？指一类能辨别和切割双链 DNA 分子内特定的碱基次序的核酸水解酶，绝大部分是从原核细胞中提取的，可可分为Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型，此中Ⅱ型是分子克隆中最常用的工具酶。

Ⅱ型限制酶的作用特色：（ 1）之内切方式切断双链 DNA 的磷酸二酯键；（ 2）能辨别切割 4~8bp 回文构造；（ 3）切割可有两类切口，产生三种尾端。

何谓载体？分子克隆中优秀的载体应具备哪些条件？可以携带外源DNA （目的基因）进入受体细胞，实现外源DNA 的无性生殖或表达有意义的蛋白质所采纳的一些DNA 分子。

优秀载体应具备的条件：a、一定有自己的复制子，能在宿主细胞内独立自主复制并能携带重组DNA片段一起扩增。

b、一定有限制性内切酶酶切位点（即多克隆位点）以供外源DNA插入。

c、拥有可供选择的遗传标志（如抗药基因、酶基因、营养缺点型以及形成吞噬瘢的能力等），以供阳性重组体的挑选。

d、分子量应尽量小，以便容纳较大的外源DNA 片段，拥有拷贝数高，与宿主细胞核酸易分裂，抗剪切力强等特色。

e、表达型载体还应装备与宿主细胞相适应的启动子、前导次序、增强子等调控元件。

简述 DNA 克隆的基本步骤。

（1）目的基因的获取（2）基因载体的选择与建立（3）目的基因与载体的体外拼接（4）重组 DNA 分子导入受体细胞（5）挑选并没有性生殖含有重组分子的受体细胞（转变子）常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（ 1）限制性核酸内切酶（一定）：辨别并特异切割 DNA 碱基序列，（ 2）DNA pol Ⅰ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针（ 3）Klenow 片段（掌握）：合成 cDNA 的第二条链，补齐或标志双链DNA 3′端（4）多核苷酸激酶：催化多聚核苷酸5′ - 羟基尾端磷酸化，或标志探针（5）逆转录酶：催化合成 cDNA（6）尾端转移酶：将 3′- 羟基尾端进行同质多聚物加尾（7） DNA连结酶（一定）：催化 2 条 DNA链之间形成磷酸二酯键（8）碱性磷酸酶：切除常用的基因获取方法有哪些？制备基因组文库建cDNA 文库PCR 扩增目的基因人工合成DNA 技术常用的基因与载体连结方法有哪些？（ 1）粘性尾端连结:将靶基因片段和载体DNA 经同样限制酶分别切割，使它们两头产生同样的黏性尾端。

而后经黏性尾端碱基配对，再经DNA连结酶作用，共价连结成新的重组DNA 分子，（ 2）平头尾端连结：将平尾端的DNA 分子在 T4 DNA连结酶催化下，使DNA分子在 3′ OH 和 5′ P 进行共价联合（3）人工接头法：是指利用人工接头加在平端DNA片段的两头，而后用相应限制酶切割人工接头以产生黏性尾端，再与带同样黏性尾端的载体相连，（4）同源多聚尾联接法：在尾端脱氧核苷酸转移酶催化下，在线形载体分子的两头加上单调核苷酸加dG 构成的多聚尾，而在目的DNA分子的两头加上dC 尾，两者混淆退火，而后经 DNA聚合酶Ⅰ或 Klenow 填充裂口处缺失的核苷酸，再经过 DNA连结酶修复成环状的双链DNA什么是蓝白斑挑选法？这种方法是依据组织化学的原理来挑选重组体。