噬菌体展示技术20..
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术第一篇：噬菌体展示技术介绍噬菌体作为一种针对细菌的病毒，与我们生活息息相关。
除了作为抗生素的发现者，噬菌体还可以被利用于噬菌体展示技术。
这种技术利用噬菌体表面展示的蛋白质，实现对目标蛋白质的快速筛选和鉴定。
本文将介绍噬菌体展示技术的原理、优缺点，以及在生命科学研究和工业生产中的应用。
一、原理噬菌体展示技术是将目的蛋白或肽插入噬菌体表面的一种方法。
噬菌体表面组分主要有三种：1）编码质粒的pIII蛋白质；2）编码细胞毒素E的pVIII蛋白质；3）编码专一结合的pV蛋白质。
它们在噬菌体的组成和结构上有不同的作用。
其中，pIII和pVIII蛋白质被广泛地应用于蛋白质展示，pV 蛋白质则被用于病毒特异性分离。
噬菌体展示技术的基本步骤为：首先，在噬菌体pIII或pVIII蛋白质基因的外侧区域中插入目的蛋白的DNA序列；然后使用这些噬菌体感染大肠杆菌。
噬菌体在感染过程中就会将目的蛋白展示在其表面。
最后，可使用具有亲和力的配体或抗体选择目的蛋白并纯化。
二、优缺点噬菌体展示技术的优点主要集中在以下几个方面：1）大容量：噬菌体可以在感染过程中表达众多的外表面蛋白，其中每个蛋白均可成为一个展示物，针对多种噬菌体展示技术。
2）直接鉴定：在已知多肽的情况下，可以使用特定的抗体直接鉴定噬菌体表面的展示蛋白。
3）高灵敏度：噬菌体展示技术对目标蛋白的识别灵敏，并且可以使用大量病毒颗粒进行检测。
4）高效率：噬菌体展示技术可将展示蛋白直接表达在噬菌体的表面，无需进行分离提纯，从而加快了蛋白纯化过程。
噬菌体展示技术的缺点主要有以下几方面：1）分子大小限制：目前仅适用于直径小于1/3噬菌体直径的蛋白分子。
2）生物安全：组装成噬菌体后，展示蛋白无法及时得到更新，可能会导致噬菌体的生物安全风险。
3）抗原性：由于目的蛋白常常被表达在噬菌体的表面，因此它们可能会被视为异物而引起免疫反应。
三、应用由于噬菌体表面蛋白质的展示，噬菌体展示技术已经被广泛应用于生物医学研究和工业生产中。
噬菌体展示技术的原理和方法
噬菌体展示技术的原理和方法噬菌体展示技术是一种利用噬菌体表面展示特定肽段或蛋白的技术。
这项技术自20世纪80年代问世以来，已在许多领域显示出广阔的应用前景，包括药物研发、疫苗设计、蛋白质相互作用研究等。
本文将详细介绍噬菌体展示技术的原理和方法，并探讨其优缺点和发展趋势。
噬菌体展示技术利用的是噬菌体的特性，噬菌体是一种病毒，专门感染细菌等微生物。
它们由蛋白质外壳和内部遗传物质组成，其中蛋白质外壳又由多个蛋白亚基组成。
噬菌体展示技术利用噬菌体表面展示特定的肽段或蛋白，这些肽段或蛋白可以来自天然蛋白质，也可以是人工合成的。
展示在噬菌体表面的这些肽段或蛋白能够与特异性受体结合，从而实现表面展示的功能。
噬菌体展示技术的关键之一是选择合适的展示载体。
载体通常是一种丝状噬菌体，其基因组可以容纳较小的外源基因片段。
常用的载体包括M filamentous phage等。
这些载体具有一些共同的特性，如对外源蛋白质的容纳能力较强，能在体内和体外环境中稳定存在等。
在噬菌体展示技术中，需要筛选出能感染特定细菌的噬菌体。
这些噬菌体可以是自生的，也可以是通过基因工程改造得到的。
在筛选过程中，可以利用不同细菌的特性，如受体类型、细胞壁结构等，来选择合适的噬菌体。
还需要考虑噬菌体的毒性、繁殖能力等因素。
在噬菌体展示过程中，需要反复感染以积累足够数量的展示肽段或蛋白。
这个过程中，通常需要使用超滤或凝胶过滤等手段对噬菌体进行纯化，以确保得到的展示肽段或蛋白的纯度和浓度。
反复感染的过程不仅可以增加展示肽段或蛋白的数量，还能帮助排除展示过程中可能产生的突变。
克隆选择是噬菌体展示技术的另一个关键步骤。
这个过程中，通过将展示肽段或蛋白与特定配体结合，筛选出能够与配体结合的克隆。
这些克隆可以进一步扩增和纯化，从而获得高亲和力和高特异性的克隆。
噬菌体展示技术的优点在于其能够将蛋白质或多肽特异性与噬菌体的生物学特性相结合，从而实现表面展示的功能。
噬菌体展示筛选抗体技术介绍
探索生物医学中的创新应用
目录
01 噬菌体展示筛选抗 体概述
06 噬菌体展示抗体的 发展前景
02 噬菌体展示技术原 理
03 噬菌体展示抗体筛 选流程
0Hale Waihona Puke 噬菌体展示抗体的 应用案例05 噬菌体展示抗体的 优点与缺点
01 噬菌体展示筛选抗体 概述
噬菌体展示筛选抗体概述
1 噬菌体展示筛选抗体技术介绍
疗效果并降低副作用。
05 噬菌体展示抗体的优 点与缺点
噬菌体展示抗体的优点与缺点
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术能够快速、 高效地筛选出特异性抗体， 大大缩短了实验周期，提高 了研究效率。
噬菌体展示抗体的局 限性
噬菌体展示技术虽然筛选速 度快，但存在假阳性率高的 问题，需要进一步的验证和 优化。
噬菌体展示筛选抗体技术是一种利用噬菌体表面
噬菌体展示筛选抗体的优势 2 展示特定蛋白质，通过生物淘选方法寻找与目标
噬菌体展示筛选抗体技术具有高度灵活性和多样
抗原特异性结合的抗体的方法。
性，能够快速、高效地筛选到具有高亲和力和特
异性的抗体，为免疫学研究和药物开发提供了重
要工具。 3 噬菌体展示筛选抗体的应用前景
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术具有高度灵 活性和多样性，可以快速、 大量地筛选出特异性强、亲 和力高的抗体，为生物医学 研究和药物开发提供了重要 工具。
噬菌体展示抗体的应 用前景
噬菌体展示抗体技术在肿瘤 治疗、免疫诊断、疫苗研发 等领域具有广泛应用前景， 有望为人类健康事业做出重 要贡献。
谢谢大家
噬菌体展示筛选抗体技术在疾病诊断、治疗和预
防等方面具有广泛的应用前景，包括癌症治疗、
噬菌体展示技术
原理
• 以噬菌体为载体，把待选基因片段定向插 入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽 或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而 通过亲和富集法表达有特异肽或蛋白质的 噬菌体.（基因VIII和基因III）
• p Ⅷ前体由73 个氨基酸残基组成，其中信 号肽为23 个氨基酸残基，根据构成外壳的 功能可分为四个区，6-24 氨基酸残基区域 占据噬菌体表面的大部分，25-35 氨基酸残 基区域高度疏水性,C 端(35-50 氨基酸残基区 域)与DNA相结合，构成完整的内壁，N端 (1-5氨基酸残基区域)为可活动的、外露在 噬菌体表面的肽段。
噬菌体展示系统的种类
丝状噬菌体展示系统
λ噬菌体展示系统 T4噬菌体展示系统 T7噬菌体展示系统
M13噬菌体展示外源基因模式图
λ 噬 菌 体 展 示 系 统
T4噬菌体展示系统
1.T4噬菌体病毒颗粒是在宿 主细胞内组装，被组装的 融合蛋白无需通过质膜， 不需要通过分泌途径，因 而其表面展示多肽和蛋白 的范围广。同时噬菌体还 能在体外组装，这对构建 表面展示噬菌体十分方便。 2. T4噬菌体展示周期在基于 T4生命的非必需衣壳蛋白 SOC和HOC。
淘洗过程
目标蛋白或肽固相化
展示的多肽与目标蛋白结合
洗去未结合的噬菌体
获得特异结合的噬菌体 扩增后进行下一轮淘洗 测序
• 筛选出的噬菌体的结合特性可以进 一步验证并从DNA 序列推导出来， 分析各个克隆间编码短肽的一致序 列，以确证筛选的特异性. 最后， 利用化学合成含一致序列的氨基酸 短肽，研究他们的亲和特性并推测 可能配体的生物学活性和结合或游 离状态的结构特点.
• pⅢ前体由424 个氨基酸残基组成，形成3-5 个拷贝，位于噬菌体的尾部，他由四个功 能区组成，信号肽区(18 个氨基酸残基)引导 pⅢ至细菌胞间质，在pⅢ分泌后被细菌蛋 白酶水解，其后的穿膜区与噬菌体的侵入 有关，受体结合区负责结合F 菌毛，而C 端 的疏水区组装前黏附在细菌内膜上，组装 后这段氨基酸序列锚在噬菌体外壳上，穿 膜区（N）是最外露的区域。
噬菌体展示技术
内容
1 2 3
• 噬菌体展示技术简介
• 噬菌体展示技术的过程 • 噬菌体展示技术的应用 • 噬菌体展示技术的展望
4
1
• 噬菌体展示技术简介
噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编 码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外 壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框 正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的 情况下，使外源蛋白或多肽与外壳蛋白 融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重 新组装而展示在噬菌体表面。
不可否认，目前噬菌体展示技术尚存在某些不 足，需要改进，如外源性多肽的折叠、库容量 的限制、筛选过程中阳性克隆的丢失及假阳性 克隆的获得等。但随着该技术的不断发展，越 来越多的具有良好生物活性的化合物会被发现 并得以鉴定，为新药的开发不断注入新的活力。 可以预测，功能基因组学、蛋白组学和噬菌体 展示技术三者的融合会不断为药学生物技术创 造新的概念,提供新的策略。基于机器人技术的 高通量筛选系统及其他对策的发展，期待噬菌 体展示技术能在寄生虫病诊断、致病机制研究、 疫苗开发、药物研制领域中开创一片新天地。
coated microtitre wells
Wash to remove unbound phage particles.
Elute bound phage
2.3 Amplify eluted phage
感选
3
• 噬菌体展示技术的应用
3.1 3.2 3.3 3.4 噬菌体抗体库技术 测定抗体的抗原决定簇 筛选酶抑制剂 构建cDNA3.2 测定抗体的 抗原决定簇
3.3 一步确认 确认插入片段种类
4
• 噬菌体展示技术的展望
随着噬菌体展示技术的不断成熟和完善，它 在生物学领域和医学领域取得的成就日益突出 ，尤其是为新药的开发拓宽了道路。运用噬菌 体展示技术筛选功能性的多肽，由此作为多种 人体生长因子的活性模拟表位，或作为受体新 型配体，已经成为当今世界医药领域最热门的 课题之一。通过噬菌体展示技术体外筛选具有 治疗活性的人源的scFv ，则以其分子量小、穿 透力强、易于大量生产等特点展示了极好的应 用前景，从而进一步加快了生物药学的发展进 程。
噬菌体展示
噬菌体展示
简介
噬菌体是一种能够感染细菌并在其中繁殖的病毒。
它被广泛用于生物学研究和生物技术应用中，特别是在基因工程和基因治疗领域。
噬菌体展示技术是一种将特定蛋白质或肽段展示在噬菌体表面的方法。
通过选择与目标蛋白质相互作用的噬菌体克隆，可以筛选出具有特定功能的蛋白质或肽段。
本文将介绍噬菌体展示技术的原理、应用和优点。
原理
噬菌体展示技术依赖于噬菌体基因组中的一个外源基因，该基因编码目标蛋白质或肽段。
这个外源基因通常被插入到噬菌体的毒力因子基因中，例如毒力因子III基因。
插入后，目标蛋白质或肽段会与细菌细胞的表面结合。
噬菌体携带的基因信息会导致细菌细胞表面展示目标蛋白质或肽段。
通过这种方式，科研人员可以通过筛选和选择的方法找到与目标蛋白质或肽段相互作用的噬菌体克隆。
应用
噬菌体展示技术在生物学研究和生物技术应用中有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：
抗体库筛选
噬菌体展示技术可用于抗体库筛选，以寻找与特定抗原相互作用的抗体。
通过将抗原展示在噬菌体表面，科研人员可以筛选出具有高亲和力和特异性的抗体，用于治疗和诊断应用。
肽库筛选
噬菌体展示技术也可用于肽库筛选，以寻找具有特定功能的肽段。
通过将肽段展示在噬菌体表面，科研人员可以筛选出与特定靶点相互作用的肽段，用于药物开发和治疗应用。
蛋白质互作网络研究
噬菌体展示技术可以用于研究蛋白质互作网络。
通过将一种蛋白质展示在噬菌体表面，并将其用作识别其他与其相互作用的蛋白质的。
噬菌体展示技术的原理及应用
02 噬菌体展示技术 原理
噬菌体结构与功能
噬菌体基本结构
由蛋白质外壳和内部遗传物质组 成，具有识别和感染宿主细胞的 能力。
噬菌体功能
通过感染宿主细胞，将自身遗传 物质注入细胞内，并利用宿主细 胞的资源进行复制和增殖。
展示原理及过程
展示原理
利用噬菌体感染宿主细胞的特点，将外源蛋白或多肽与噬菌体表面蛋白融合表达 ，从而展示在噬菌体表面。
发展历程
自20世纪80年代初期噬菌体展示技术 被首次提出以来，随着分子生物学和 基因工程技术的不断发展，该技术得 到了迅速发展和广泛应用。
技术特点及优势
技术特点
噬菌体展示技术通过将外源基因插入到噬菌体的基因组中，使得外源蛋白或多 肽能够在噬菌体表面表达，从而实现了对外源蛋白的高通量筛选和鉴定。
优势
等。
实验操作步骤
转化宿主菌
将构建好的噬菌体展示载体转化 到宿主菌中。
噬菌体繁殖和蛋白表达
在适当的条件下培养宿主菌，使 噬菌体繁殖并表达目标蛋白。
噬菌体收集和纯化
收集宿主菌培养物，通过离心、 过滤等方法纯化噬菌体。
构建噬菌体展示载体
将目标蛋白基因克隆到噬菌体载 体中，构建成噬菌体展示载体。
噬菌体展示验证
通过ELISA、Western blot等方 法验证目标蛋白是否在噬菌体表 面展示。
结果分析与解读
噬菌体滴度测定
通过测定噬菌体的滴度来评估实验的 可靠性和重复性。
目标蛋白表达量分析
通过SDS-PAGE等方法分析目标蛋白 的表达量，以评估展示效果。
展示特异性验证
通过与其他非特异性蛋白的对比，验 证目标蛋白在噬菌体表面的展示特异 性。
安全性问题
噬菌体作为病毒的一种， 存在潜在的安全风险，如 污染实验室、感染工作人 员等。
噬菌体展示实验步骤及总结
噬菌体展示实验步骤及总结噬菌体展示技术（Phage Display）是一种利用噬菌体（phage）作为载体表达、展示外源蛋白质或肽段的技术。
该技术可以通过体外筛选方式寻找与特定生物分子相互作用的肽段或蛋白质，并在医学、农业、环境科学等多个领域应用广泛。
本文将介绍噬菌体展示实验的步骤及总结。
一、噬菌体展示实验步骤1.分离噬菌体基因组首先需要从所需噬菌体中提取其基因组DNA，进行适当的酶切、纯化、修饰和扩增等操作，以获得高质量的DNA样品。
2.插入外源DNA将需要展示的外源肽段或蛋白质基因克隆到噬菌体基因组中的特定区域（通常是其Capsid蛋白的的N末端），使其与噬菌体基因组融合。
插入操作可采用PCR扩增、克隆或基因合成等方法进行。
3.包装噬菌体将重组噬菌体基因组与一定的病毒包装反应液混合，经过一定的反应时间，使其封装成噬菌体颗粒。
包装操作可在细菌宿主中进行，也可采用体外装配法，将噬菌体基因组与其他组件（例如，在非细菌宿主中回收的Capsid蛋白）进行反应，实现噬菌体的包装。
4.筛选目标配体将噬菌体颗粒通过筛选池，如固体支持物、细胞表面或溶液相应用目标体分别进行生物学或化学实验等。
通过筛选，得到与目标体有特异性、较高亲合力的噬菌体颗粒。
随后将噬菌体提取、扩增等操作，得到一系列具体的孤儿噬菌体（orphan phage）或配体噬菌体。
5.注意事项在实验过程中需注意的一些问题：（1）噬菌体的主要结构是头部和尾部，根据实验需要可对其进行不同的修饰（例如添加标签、调整展示方向等），以增加其展示效率和特异性等。
（2）外源蛋白的表达量、保持稳定性通常受到噬菌体载体、连接方式、插入位置、转化水平等因素的影响，实验中需对其进行合理设计。
（3）噬菌体筛选应选择样品的适当浓度、筛选反应时间等，以保证准确、高效地获得目标配体。
二、噬菌体展示实验总结噬菌体展示技术是一种非常有前景的生物技术，逐渐成为体外筛选的重要手段之一。
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Schematic representation of M13 Phage Schematic representation of T7 Phage
the leader in enzyme technology
M13噬菌体的组成和结构
Structure of M13 filamentous phage
phagemid vectors
the leader in enzyme technology
噬菌体质粒－方便克隆、增强遗传稳定性
Phage display with phagemid vectors
噬菌体质粒特征： 携带有欲在噬菌体上融合展示的蛋白基 因，没有其他噬菌体基因。 有质粒复制起点(322 ori)和噬菌体复制 起点(f1 ori－用于合成ssDNA)。 有包装序列信号（packing signal）。 有供筛选的抗生素标记基因。 Helper phage：提供噬菌体质粒复制、合成 ssDNA和病毒包装所需要的所有蛋白和酶（f1 ori defect)。 包装后的噬菌体包含有两种不同来源的成份：噬菌体质粒和Helper phage。
Exponential growth in publications referring to phage display. The number of Medline citations containing the terms ‘phage’ and ‘display’ are plotted against the year of publication. TIBTECH NOVEMBER 1999 (VOL 17).
the leader in enzyme technology
噬菌体展示的应用
筛选酶抑制剂 是寻找抑制酶活性肽段的 理想工具。 Dennis从肽库中筛选到非 竞争性地抑制 F VIIa 活 性的肽段。
Coagulation Cascade. A current simplified view of the coagulation cascade initiated by the TF•FVIIa complex is shown.
the leader in enzyme technology
噬菌体肽库淘选示意图： 亲和筛选
噬菌体肽库与靶分子相互作用
洗涤去未结合的或非特异性结合 的噬菌体
将特异性结合的噬菌体洗脱下来
三轮淘选后，克隆测序
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测定抗FLAG M2单克隆抗体的 抗原决定簇
淘选的方法－亲和淘选
• 直接包被法淘选法： • 优点：简单直接。 优点： • 缺点：偶尔会导致配体结合位点难以进入 缺点： • 可能是由于分子的立体封阻 • 或者是靶分子表面的部分变性而引起
• 液相法：先将噬菌体库在液相中与靶分子进行预结合，然后将噬 液相法： 菌体 - 靶分子复合物亲和捕获于亲和介质上，如：链霉亲和素包 被的表面。
丝状噬菌体：M13、f1和fd 。 单链DNA病毒,6407 bp。 基因组编码11种蛋白质，其中5 种为结构蛋白质。 与展示密切相关的有两种结构蛋 白质。 DNA在细菌内滚环复制，细菌不 被裂解，但生长速度减慢，并且 分泌大量噬菌体颗粒。
Schematic representation of M13 Phage
the leader in enzyme technology
Types of phage display system
pVIII 展示的多肽比较小，如 果太大会影响噬菌体壳蛋白的 组装。 pIII只要不影响感染，可以展 示300 aa的多肽。 噬菌质粒能展示的蛋白已经达 到86 kDa。
Smith et al. (1997) Chem. Rev. 97, 391-410
the leader in enzyme technology
多价展示？单价展示？
Polyvalent or monovalent display?
展示价位（Display valency)：噬 菌体表面展示的多肽的拷贝数。 展示价位不同所筛选的分子亲和力 就会不同。 用噬菌体质粒时，以pIII展示为例： <10%病毒展示为单价，非常少量的 展示为两个拷贝，绝大多数只展示 野生型pIII。 The major displaying species is monovalent, but most particles do not display at all.
改进 helper phage
the leader in enzyme cDNA libraries
Carmeri et al. Gene 1993
• • • • •
pJuFo噬菌质粒中加入了Jun and Fos Leu Zipper基因 两个基因都以 PelB 作为signal sequence，以lac作为promoter/operator。 NH2- pelB + Jun Leu zipper + C-terminal domain pIII-COOH NH2- pelB + Fos Leu zipper + cDNA-product –COOH Jun和Fos通过二硫键形成异源二聚体
the leader in enzyme technology
True phage
多价展示 筛选到的分子亲和力相对低 极少或无未展示的噬菌体 高拷贝数增加了抗原性 可能会影响噬菌体的组装和增殖
Phagemid
单价展示 亲和力高 大部分是未展示的噬菌体*
易克隆，遗传稳定性好
the leader in enzyme technology
噬菌体展示系统 Phage on display
• • • 噬菌体展示原理 噬菌体展示应用 商业化噬菌体展示系统
the leader in enzyme technology
噬菌体展示的应用
• • • • 抗原表位分析 制备特异性抗体 制备疫苗、多价疫苗 构建新型的生物催化剂 如Ren et al (1997)将T4 DNA连接酶展示于T4噬菌体，所表达的 融合蛋白能够高效连接黏性或者平末端。 有可能把催化某一代谢途径的多种酶展示到噬菌体上，制造人工 的多酶复合体。或者把成百上千个酶分子的活性位点展示到同一 个噬菌体颗粒上，制造superenzyme。
根据噬菌体不同 根据噬菌hage M13, f1, fd T7, T4, lamda
Vector Vector True Phage Phagemid
Libraeader in enzyme technology
噬菌体展示技术
Smith在1985年首次证实外源DNA可以插入丝状噬 菌体基因III中，并与pIII蛋白融合8:1315-7
the leader in enzyme technology
Infection of E.coli by Ff baceriophage
the leader in enzyme technology
主要衣壳蛋白pVIII
每个病毒子含约2700个拷贝，约10% 能有效地融合外源多肽或蛋白。 以pIII融合子方式表达的多肽是低 价的，而以pVIII融合子方式表达的 多肽则是高价的（每个病毒子~200 个拷贝）。 这种高价pVIII展示所增加的亲和力 有利于筛选到亲和力非常低的配体， 而低价pIII展示则将筛选限制在具个拷贝的外源多 肽）。
展示系统 Display System
Phage Display Cell Based Cell Surface Display
Cell Free
Ribosome Display mRNA Display
the leader in enzyme technology
噬菌体展示系统的分类
Classification of phage display systems
the leader in enzyme technology
NEB完美品质 成就科学梦想
报告人：杨毅 MD PhD
Email: support@
the leader in enzyme technology
噬菌体展示系统 Phage on display
Of Needles and Haystacks
the leader in enzyme technology
次要衣壳蛋白pIII
BRIEFINGS IN FUNCTIONAL GENOMICS AND PROTEOMICS. VOL 1. NO 2. 189–203. JULY 2002
406 aa 组成，5个拷贝，位于噬菌体的尾部。 由三个功能区组成： N1 穿膜区：作用于E.coli细胞膜上的TolA蛋白； 穿膜区： 与噬菌体的入侵有关。 N2 受体结合区：负责结合F菌毛。 区： CT 疏水区：组装前黏附在细菌内膜上；与噬菌 疏水区： 体组装终止有关。 G1、G2: 甘氨酸片段，在感染过程中，增加各个 功能域之间的灵活性。
为 了 确 定 FLAG 抗 原 决 定 簇 序 列 DYKDDDDK中哪一个氨基酸是抗体结合 所必需的，将单克隆抗测序，结果 清晰地显示核心抗原决定簇是DYKXXD, 其中X可以是任意氨基酸。
the leader in enzyme technology
the leader in enzyme technology
Life Cycle of M13
pIII蛋白结合于 E.Coli 的F 纤毛; 细菌的Tol蛋白复合体解聚噬 菌体的衣壳蛋白，转运至胞浆 （再用）; 病毒ssDNA进入细菌的胞浆合 成dsDNA； 以dsDNA为模版合成所有的病 毒蛋白，且通过滚环复制合成 组装病毒所需的ssDNA。 第一代噬菌体在感染10分钟后出现在培养液中（37oC）。 感染后1小时内平均每个细胞分泌1000个噬菌体。