银杏苦内酯B对内毒素血症幼年大鼠肠氧化损伤的保护作用_王丽杰_孙莹_孙梅

银杏苦内酯B 对内毒素血症幼年大鼠肠氧化损伤的保护作用王丽杰1，孙莹1，孙梅2（中国医科大学附属盛京医院1.儿科重症监护病房；2.儿科消化病房，沈阳110004）摘要目的氧化应激与炎性反应引起的肠组织损伤密切相关。

应用血小板活性因子（PAF ）受体拮抗剂银杏苦内酯B 对幼年大鼠内毒素血症模型中肠黏膜氧化损伤的保护作用作初步研究。

方法18日龄Wistar 大鼠，随机分为内毒素脂多糖（LPS ）组和PAF 受体拮抗剂组（预防组和治疗组）及对照组，注射LPS 后1.5，3，6，24，48，72h 取回肠。

LPS 组和对照组分别腹腔注射内毒素5mg/kg 及生理盐水1mL/kg ；预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS 前、后30min 腹腔注射PAF 受体拮抗剂（银杏苦内酯B ）BN520215mg/kg 。

苏木精-伊红染色及透射电镜作形态学检查，剩余部分回肠于-80℃深低温冰箱中保存，检测黄嘌呤氧化酶（XOD ）、超氧化物歧化酶（SOD ）。

结果LPS 组1.5，3，6，24h 可见绒毛水肿，固有层血管充血，间质淋巴管扩张，肠腔炎性渗出，；微绒毛变细、稀疏，部分对照组，6h 从（239.85±17.64）U/g XOD 较LPS 组略低。

LPS 组1.5，3，60.01），预防组及治疗组SOD 变化定作用，预防和治关键词中图分类号doi网络出版地址The Protective WANG Li ⁃jie 1，（1.Pediatric Intensive ，Shengjing Hos -pital ，China Medical 基金项目：辽宁省教育厅科研项目计划（L2010607）作者简介：王丽杰（1968-），女，副教授，博士.E-mail ：wanglj@sj ⁃收稿日期：2012-03-19网络出版时间：Abstract We investigated the protective effect of in young rat withendotoxaemia.（LPS ）（5mg/kg ），LPS plus administered beforeor 30minutes after 24，48and 72h af -ter LPS injection.morphology evalua -tion.The rest ）.ResultsHis -tologic examination ，extension of thesubepithelial ，polymorphonuclear infiltration in enteric cavity on 1.5，3，6，24h.Edemas of the villus were found in antagonist group.Ultrami -crostructural change of TEM showed microvilli and tight junctions were intact in the control group.Enlargement of tight junctions were seen in the experiment group ，and the microvilli were thin ，rare or disrupt ，shed.The rough endoplasmic reticulum ，mitochondria ，and glycogen parti -cles were injured.The levels of XOD at 1.5，3，6，24h were obviously higher in LPS group than control group.The content of XOD in -creased mostly at 6h from （239.85±17.64）U/g to （330.99±61.73）U/g of control group （<0.01）.The tendency of antagonist group was the same as the LPS group.But the levels of XOD of antagonist group were lower than LPS group at each time point.The levels of SOD of 1.5，3，6，24and 48h were obviously decreased in LPS group compared with control group ，statistic significances were found.The content ofSOD decreased from （141.55±28.12）U/mg to （86.89±9.99）U/mg of control group at 6h （<0.01）.The tendency of antagonist group was the中国医科大学学报第41卷第8期2012年8月Journal of China Medical University Vol.41No.8Aug.2012700··2012-08-03 11:0020世纪80年代就有学者提出“胃肠道是多器官功能衰竭（multiple organ failure ，MOF ）的始动器官”，基础和临床研究都进一步认识到小儿急性胃肠功能衰竭常常继发于危重症，也是危重患儿病情加重的指标之一。

国内报道危重患儿急性胃肠功能衰竭发生率31.8%，病死率29.3%［1］。

严重感染是儿科危重症中胃肠功能衰竭（障碍）的常见病因之一，氧化应激与炎性反应引起的肠组织损伤密切相关［2］。

近年来血小板活化因子（platelet activating factor ，PAF ）在胃肠黏膜损害中的作用日益受到重视，PAF很可能是内毒素作用的主要效应因子，已有实验证实［3］，用PAF 和内毒素脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS ）引起的坏死性小肠结肠炎的改变相似，用PAF 受体拮抗剂WEB 2170可明显减轻LPS 所致的肠坏死。

通过对多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome ，MODS ）患者外周血PAF 受体mRNA 的测定发现［4］，LPS 不仅可以造成PAF 分泌增加，而且可以造成外周血淋巴细胞PAF 受体mR -NA 表达量明显升高。

PAF 可导致急性胰腺炎时肠黏膜屏障功能损伤，导致细菌移位，应用PAF 受体拮抗剂BB ⁃882可减轻肠道屏障功能损伤，抑制细菌移位［5］。

因此我们应用PAF 受体拮抗剂（银杏苦内酯B ）对幼年大鼠内毒素血症模型中肠黏膜氧化损伤的保护作用作初步研究。

1材料与方法1.1材料动物：健康18d 龄Wistar 大鼠，由中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供。

试剂：大肠杆菌精制内毒素LPS （lipopolysac -charide ，O55：B5脂多糖，Sigma 公司）；PAF 受体拮抗剂银杏苦内酯B BN52021（Ginkgolide B ，Sigma 公司）；黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase ，XOD ）、超氧化物岐化酶（superoxide dismu -tase ，SOD ）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2方法1.2.1实验对象及分组：健康18d 龄Wistar 大鼠，平均体质量（32.21±6.67）g ，雌雄不限，与母鼠共同饲养。

随机分为对照组8只，实验组分为内毒素脂多糖组（LPS 组）和银杏苦内酯B 组（预防组和治疗组），每一时相点（注射LPS 后1.5，3，6，24，48，72h ）各8只。

1.2.2动物模型制备：LPS 组腹腔注射内毒素5mg/kg （1mL/kg ）［6~8］，用生理盐水溶解。

对照组腹腔注射生理盐水1mL/kg 。

预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS 前、后30min 腹腔注射银杏苦内酯B BN52021（Ginkgolide B ）5mg/kg ［9~11］。

BN52021用二甲基亚砜配成20g/L ，用药当天37℃水浴，再用无菌生理盐水配成5g/L 。

用药后各组均放回鼠笼，继续哺乳，直至实验结束。

1.2.3标本采集：各组于注射LPS 后1.5，3，6，24，48，72h 分别断头处死动物，距回盲部4cm 处取回肠5cm ，部分回肠于10%甲醛中固定，待光镜检查。

约0.5cm 回肠于2.5%戊二醛溶液中固定，待透射电镜检查。

剩余部分回肠于-80℃深低温冰箱中保存，待生化检测。

1.2.4光镜观察：固定后的回肠组织用石蜡包埋，做4~5mm 连续切片，常规苏木精-伊红染色，光镜观察形态学改变。

1.2.5透射电镜观察：取固定后回肠组织1mm 3小块若干，用1%锇酸双固定，乙醇梯度脱水，环氧树脂Epon 812包埋，LKB 超薄切片机切片，厚度0.05μm ，钠、铅双染色，透射电镜观察肠上皮超微结构改变。

1.2.6XOD 、SOD 检测：严格按说明书要求操作。

1.3统计学处理采用SPSS 10.0数据分析软件，所有数据用±表示，组间比较采用方差分析LSD 法（least signifi -cant difference ），<0.05为差异有统计学意义。

2结果2.1HE 染色光镜下改变光镜下观察，LPS 组回肠1.5，3，6，24h 可见绒毛水肿，固有层血管充血，间质淋巴管扩张，肠腔炎性渗出，48h 及72h 无明显改变。

预防组及治疗组1.5，3，6，24h 可见绒毛水肿。

对照组各时相点回肠结构正常（图1）。

same as that of LPS group.But the levels of SOD of antagonist group were higher than LPS group at each point.ConclusionsOxidative damageplays a role in intestinal injury during endotoxemia.Preventive and remedial application of PAF receptor antagonist （Ginkgolide B ）may relieve in -testinal inflammatory response ，and have a protective effect on intestinal mucosal injury.Key words platelet activating factor ；superoxide dismutase ；xanthine oxidase ；gastrointestinal dysfunction ；Ginkgolide B王丽杰等.银杏苦内酯B 对内毒素血症幼年大鼠肠氧化损伤的保护作用第8期701··1.5h3h6h24h48h72hLPS group 287.50±29.692）320.35±30.031）330.99±61.731）290.42±38.692）272.59±17.55249.26±49.23Pretreatment group 265.79±44.44293.52±27.162）322.41±28.271）277.26±23.342）265.77±33.26226.73±37.83Treatment group 268.67±46.96271.63±28.94303.61±42.392）260.54±83.53236.00±17.64228.22±54.77Control group240.17±15.35239.79±12.53239.85±17.64239.98±18.12240.09±17.55236.93±15.891）<0.01；2）<0.05vs control group.A A ，control group ：microvilli and tight junctions were intact （×7200）；B ，6h：-2.4回肠组织SOD 活性变化LPS 组1.5，3，6，24，48h SOD 均较对照组明显降低，6h 降至最低，<0.01，72h 较对照组略低，无统计学差异。