肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物学活性测定
肿瘤坏死因子的检测
肿瘤坏死因子的检测一、生物学检测法TNF的主要生物学活性之一就是对某些肿瘤细胞的细胞毒作用。
根据这一特点，可利用TNF敏感的靶细胞测定TNF活性，根据细胞死亡得出TNF的相对活性。
该法的关键是选择敏感特异的靶细胞。
靶细胞可以是长期传代培养的细胞系，也可以是新鲜分离的原代细胞（如瘤细胞）。
现以贴壁生长的L929细胞为例，简述TNF活性的检测原则。
两种TNF均可伤体外培养的L929细胞，细胞死亡率与TNF活性成正比。
某些染料如中性红、结晶紫等能使活细胞染上相应颜色，再用脱色液将染料脱出，通过测定其吸亮度值间接监没细胞存活状态。
试验原则是收集对数生长期的L929细胞，用培养液调细胞至适当浓度，加入培养板小孔中，置37℃，5％CO2温箱中培养16～24h，换液后，在各孔中加入不同稀释度的待检样品，再加适当浓度的放线菌素D和适量培养液，继续温育16～24h，弃培养液，经Hanks液洗涤后，每孔加入适当浓度的结晶紫染色液，37℃培养1h，使活细胞充分着色。
然后各孔加1％SDS短时温育使染色细胞溶解，再以酶标测定仪测各孔A 570nm值。
每次检测均设培养液（阴性）对照和不同浓度的rTNF（阴性）对照。
以使阴性对照50％细胞溶解的标本最大稀释倍数为TNF活性单位，以u/ml表示。
由于放线菌素D能抑制DNA的合成、降低靶细胞对损伤的修复机制，因而在检测中加入放线素D可使靶细胞对TNF的敏感性增高10～200倍。
二、免疫学检测法通常采用ELISA，该法特异性高、敏感性强且快速使捷，而且能够区别TNFα和TNFβ，为临床检测病人血清中TNF水平的有效方法，但不能反映TNF活性。
三、其它检测法检测TNF还可用生物发光法及NAG微量酶反应比色法。
这类方法是应用生化技术检测细胞内代谢的变化，从而推知靶细胞功能变化及死亡情况。
其优点是不仅反映细胞的死亡情况，而且能反映细胞的功能变化。
此外，还具有快速、方便、微量的特点。
肿瘤坏死因子TNFα
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。
用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
人肿瘤坏死因子α(TNF-α)说明书
人肿瘤坏死因子人肿瘤坏死因子αα（TNF-α）酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T20 ng/L -400 ng/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定人血清样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。
用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP 标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（800ng/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
肿瘤坏死因子的研究进展
参考内容
摘要
肿瘤坏死因子（TNF）是一种重要的细胞因子，在免疫应答和炎症反应中发 挥关键作用。近年来，关于TNF的研究已取得显著进展，本次演示将重点其生物 学功能及其在临床应用中的前景。通过综述最新的研究结果，我们将有助于更深 入地了解TNF的生物学功能及其潜在应用。
引言
肿瘤坏死因子是一种能够诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子，其在免疫应答和炎 症反应中发挥关键作用。自TNF发现以来，大量研究致力于探讨其生物学功能和 临床应用。尽管TNF在某些情况下可促进肿瘤生长，但其主要作用仍是抑制肿瘤 细胞生长和诱导细胞凋亡。本次演示将重点综述TNF的生物学功能及其在临床应 用中的前景，以期为相关研究提供参考。
研究成果
虽然TNF在肿瘤治疗中的直接作用尚不清晰，但其与免疫反应的调控密切相 关。研究表明，TNF可以激活免疫细胞，促进肿瘤细胞的凋亡和坏死，进而诱导 抗肿瘤免疫反应。然而，过度的TNF活化也可能导致炎症反应和免疫病理损伤。 因此，针对TNF的免疫调节作用进行深入研究可能为肿瘤治疗提供新的策略。
历史回顾
自TNF被发现以来，其在肿瘤治疗领域的作用一直是研究的热点。早期的研 究主要集中在TNF-α，其在体外实验中具有显著的抗肿瘤活性。然而，临床试验 中，TNF-α的抗肿瘤效果并不显著，部分原因是其在体内的半衰期短，同时缺乏 特异性肿瘤靶向性。随后，TNF-β（也称为淋巴毒素）的研究也逐渐受到重视。 与TNF-α不同，TNF-β主要在淋巴细胞中表达，但其抗肿瘤作用却十分显著。
然而，TNF在肿瘤治疗中也存在一些挑战。例如，一些研究表明，长期使用 TNF可能会导致免疫抑制和炎症反应加重等问题。因此，针对TNF治疗肿瘤的研究 仍需权衡其利弊，以确定最佳治疗方案。
2、抗病毒治疗
免疫法血清tnf-α正常水平
免疫法血清tnf-α正常水平
TNF-α即肿瘤坏死因子α，是一种具有广泛生物学活性的细胞因子，在机体的免疫调节、炎症反应、细胞凋亡等过程中发挥重要作用。
血清TNF-α的正常水平可能因不同的检测方法、试剂盒和实验室而有所差异。
一般来说，血清TNF-α的正常水平在健康人体内通常较低，一般在1-2pg/ml 之间。
需要注意的是，血清TNF-α水平的正常范围可能受到多种因素的影响，如年龄、性别、身体状况、炎症性疾病等。
在某些疾病状态下，如炎症性肠病、类风湿关节炎、自身免疫性疾病等，血清TNF-α水平可能升高。
血清TNF-α水平的检测结果应结合临床表现、其他实验室检查和影像学检查等综合评估，以确定疾病的诊断和治疗方案。
小鼠肿瘤组织中tnfa含量
小鼠肿瘤组织中tnfa含量摘要：本研究旨在探讨小鼠肿瘤组织中TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的含量，并分析其与肿瘤发生发展的关系。
通过使用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法，我们检测了小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量。
实验结果显示，小鼠肿瘤组织中TNF-α含量显著高于正常组织。
这一结果提示，TNF-α可能在小鼠肿瘤发生发展中发挥重要作用。
一、引言肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种具有广泛生物活性的细胞因子，参与免疫应答、炎症反应等多种生理过程。
近年来研究表明，TNF-α在肿瘤发生发展中也发挥重要作用。
然而，关于小鼠肿瘤组织中TNF-α含量的研究尚不多见。
因此，本研究旨在通过实验方法检测小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量，并探讨其与肿瘤发生发展的关系。
二、材料与方法1.实验动物与肿瘤模型2.选取健康成年小鼠作为实验对象，建立小鼠肿瘤模型。
将实验小鼠随机分为两组：对照组（未接种肿瘤细胞）和实验组（接种肿瘤细胞）。
3.样本采集与处理4.采集实验小鼠肿瘤组织及对应正常组织样本，处理后保存待测。
5.TNF-α含量检测6.采用ELISA方法检测小鼠肿瘤组织中TNF-α的含量。
按照试剂盒说明书操作，测量各样本的吸光度值，计算TNF-α浓度。
7.数据分析8.使用统计软件对实验数据进行处理和分析，比较两组间TNF-α含量的差异，分析其与肿瘤发生发展的相关性。
三、结果实验数据显示，实验组小鼠肿瘤组织中TNF-α含量明显高于对照组正常组织（P<0.05）。
具体数据如表1所示：表1：小鼠肿瘤组织与正常组织中TNF-α含量比较为实验组平均TNF-α含量；Y1为对照组平均TNF-α含量。
图1：小鼠肿瘤组织与正常组织中TNF-α含量柱状图【请在此处插入柱状图】四、讨论本研究结果表明，小鼠肿瘤组织中TNF-α含量显著高于正常组织，提示TNF-α可能参与了肿瘤的发生发展过程。
这与其他相关研究的结果一致，表明TNF-α在肿瘤发展中的重要作用。
ELISA法检测人血清血浆样本中肿瘤坏死因子α TNF-α的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度TNF-α简介：肿瘤坏死因子（TNF-α）是由单核细胞和巨噬细胞产生的多肽类细胞因子，在炎症反应、免疫系统的发展、细胞程序性死亡和脂代谢中起重要的作用。
其功能主要是在免疫反应中是一个多功能的调节器甚至作为一个强烈的热原性物质刺激中性粒细胞，改变血管内皮细胞的特性，调节其它组织的代谢活性。
TNF-α也可通过抑制脂蛋白脂肪酶的活性而导致恶液病。
爱泼斯坦病毒引起的细胞活化也可被TNF-α所抑制。
巨噬细胞表面的淋巴因子和肉毒素也可介导包括上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等产生TNF-α。
据报道干扰素能显著提高TNF-α的分泌量。
TNF-α在关节炎和其它组织的炎症的发病机理中起重要作用。
TNF-α也参与了包括哮喘、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、神经性疼痛、肥胖症、 型糖尿病、自身免疫病和肿瘤等疾病的发生检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度。
TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TNF-α会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人TNF-α抗体后，抗人TNF-α抗体与TNF-α接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中TNF-α浓度。
实验过程需自备的材料：1.不同规格的加样枪及相应的枪头；2.酶标仪；3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒说明书
山羊肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒说明书Goat tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) ELISA test kitspecification本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆远慕生物专业供应：试验原理：TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。
TNF-αkit is an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), which is known to bethe standard sample of TNF-αconcentration and the unknown concentration ofthe sample. At the same time, the TNF-αand biotin labeled antibodies wereincubated at the same time. After washing, add the HRP labeled with affinity. After warming and washing, the removal of non binding enzyme binding, and then join the substrate A, B, and enzyme binding at the same time. Produce color. The depth ofcolor and the concentration of TNF-αin the sample is proportional to the relationship.试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48山羊份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TNF-α抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
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响。因为 TNF-β 细胞毒生物学作用等很多生物学效应均与 TNF-α 相似。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性 地杀伤某些肿瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。其检测方法主要包括生物学活性测定和免 疫学检测方法。其中细胞毒生物学检测方法敏感性较高，最为常用；免疫学检测方法包括酶 联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫测定法。
(一) 原理: TNF-α 受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞，根据 TNF-α 与相应靶细胞结合后引 起不同的生物学效应，建立了多种检测 TNF-α 生物学活性方法。某些肿瘤细胞膜表面的 TNF-α 受体与 TNF-α 结合后，可导致这些肿瘤细胞的死亡，可通过检测对肿瘤细胞的杀伤 能力，来反映 TNF-α 的生物学活性。若这种肿瘤细胞先用 3H-TdR 标记，则被杀伤后３H-TdR 释放至细胞外，牽 I 通过测定肿瘤细胞释放３H-TdR 的量来反映 TNF-α 的杀伤活性。 (二) 操作步骤:
用 DYQ-Ⅱ型多头细胞收集器收集样品于 "9999"型玻璃纤维滤纸上
↓ 烤干后，进行 β 计数
结果判定:
1. TNF-α 作用 24h 后，在倒置显微镜下判定 50％L929 细胞杀伤的稀释度即为１个
TNF-α 活性单位。
2. 根据测得的 cpm 值按下列公式计数活性单位:
TNF-α 活性单位(U／ml)
对照组 cpm 值。
3. 胰蛋白酶和 DNA 酶浓度和消化时间要严格控制，犆?批酶均要摸索最适浓度和时间。
否则，消化时间过长或过短者会影响实验结果。
4. 为了增强检测系统的敏感性，在测定系统中加入放线菌素 D，但浓度不宜过大，一
般最终浓度为 0.5～1μg／ml。
5. 在测定 PHA 等丝裂原诱导的 PBMC 培养上清时，要注意排除 TNF-β(淋巴毒素)的影
放线菌素 D 对照组 cpm-实验组 cpm
＝──────────────× 标准品活性单位× 待测样品稀释倍数
放线菌素 D 对照组 cpm-标准品 cpm
(三) 试剂和器材:
1. 鼠成纤维细胞(L929)
2. rTNF-α 和待测样品
3. 放线菌素、DNA 酶、胰蛋白酶
4. 10％FCS RPMI1640，RPMI1640
5. ３H-TdR，PPO，POPOP、二甲苯，玻璃加样器和加样器头
7.
培养箱、倒置显微镜、超净台等
(四) 注意事项:
1. 用于标记３H-TdR 的 L929 细胞要处于对数生长期，否则３H-TdR 掺入率低，影响
实验结果。
2. 标记后的 L929 细胞应充分洗涤，以洗掉游离的３H-TdR，牱 q 则会影响完全培基
0.25％胰蛋白酶消化处于对数生长期的 L929 细胞 ↓
用 RPMI1640 洗涤细胞后，调整细胞浓度至 2× 10６／ml ↓
加入３H-TdR，20μci／ml ↓
置 37℃，5％ 培养箱中 2～3h，摇动 1 次／30min ↓
用 RPMI1640 洗涤 2 次，800rpm× 5min／次 ↓
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物学活性测定
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性地杀伤某些肿 瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。其检测方法主要包括生物学活性测定和免疫学检测方法。其中细胞毒 生物学检测方法敏感性较高，最为常用；免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELI…
调整细胞浓度至 2～3× 10５／ml 后，加入 96 孔 培养板中，100μl／孔
↓ 加入不同稀释度的待测样本(设三个重复孔)
↓ 加入放线菌素 D，使放线菌素 D 最终浓度至 1μg／ml 用时设放线菌素、完全培基阴性对照和 rTNF-α 标准
品阳性对照 ↓37℃, 5％ 培养中 24h
加入 3％胰蛋白酶和 0.25％DNA 酶各 10μl／孔 ↓37℃，30min