分子生物学检验技术
分子生物学检验技术

分子生物学检验技术分子生物学检验技术是一种用于研究和分析生物分子如DNA、RNA和蛋白质的技术手段,广泛应用于生命科学研究、医学诊断、药物研发等领域。
它的发展给生物学和医学研究带来了革命性的变化,为人类健康和疾病治疗提供了重要手段。
分子生物学检验技术有多种方法,其中最常见的包括:聚合酶链反应(PCR)、核酸杂交、DNA测序、蛋白质电泳等。
这些技术在生物学研究和医学诊断中发挥着重要作用。
聚合酶链反应(PCR)是一种通过体外扩增DNA片段的技术。
它利用DNA聚合酶酶和引物,通过多次循环反应,在较短的时间内扩增出大量目标DNA片段。
PCR技术广泛应用于基因检测、病原体检测、遗传疾病筛查等领域。
核酸杂交是一种通过互补配对原理来检测目标序列的技术。
它利用标记的探针与待测样品中的目标DNA或RNA序列互相结合,通过检测探针的标记物来确定目标序列的存在与否。
核酸杂交技术广泛应用于基因表达研究、病原体检测、基因定位等领域。
DNA测序是一种确定DNA序列的技术。
它通过化学或物理方法对DNA 分子进行断裂、扩增和测序,最终确定DNA的碱基序列。
DNA测序技术是基因组学研究的重要工具,也是研究基因突变、病因分析等领域的基础。
蛋白质电泳是一种通过电场作用使蛋白质在凝胶中分离的技术。
它根据蛋白质的大小、电荷和结构差异,将混合样品中的蛋白质分离成不同的条带,从而实现对蛋白质的分析和检测。
蛋白质电泳技术广泛应用于蛋白质组学研究、疾病标志物筛查等领域。
除了上述常见的技术,分子生物学检验技术还包括许多其他方法,如基因芯片技术、原位杂交技术、蛋白质质谱等。
这些技术在不同领域有着特定的应用,为科学研究和医学诊断提供了更多的手段和思路。
分子生物学检验技术的发展不仅推动了科学研究的进展,也在医学诊断和治疗中发挥着重要作用。
例如,在基因检测中,通过分子生物学检验技术可以检测人体携带的致病基因,帮助人们了解自己的遗传状况,预防或早期干预遗传性疾病。
分子生物学技术在检验检疫中的应用

分子生物学技术在检验检疫中的应用分子生物学技术是指利用分子生物学原理和技术手段对生物体或其成分进行检测、鉴定和分析的一种高效、快速、准确的方法。
在检验检疫中,分子生物学技术已经成为一种重要的检测方法,可以用于动植物病原检测、检测进口食品中的激素、抗生素、病菌等。
一、动植物病原检测1. PCR技术PCR技术是利用酶的催化作用,在体外选取一段目标DNA序列进行扩增,从而高度敏感、准确、快速地检测细菌、病毒、真菌等。
在动植物病原检测中,PCR技术已经广泛应用,如检测病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病等。
例如,动植物检疫部门可以利用PCR 技术对入境的活禽、活猪、动物产品进行病原检测,即便在动物体内病菌数量很少的情况下,也可以准确地检测出来。
2. ELISA技术ELISA技术是一种基于免疫学原理的检测方法。
通过特异性抗体和反应物构建酶免疫检测体系,在检测样本中特异性地识别目标物质,从而进行检测。
在动植物病原检测中,ELISA技术通常用于检测免疫抗原、病毒抗原、细菌抗原等。
二、食品中污染物检测PCR技术已经广泛用于检测进口食品中的激素、抗生素、病菌等。
例如,对于进口肉类及其制品,可利用PCR技术检测是否存在激素等非法添加物。
对于进口水果及其制品,可利用PCR技术检测是否存在转基因成分。
这些检测工作不仅可以帮助保证进口食品的安全性,也可以防止国内生产和销售单位过度添加和使用化学物质。
2. 酶免疫技术酶免疫技术也是食品中污染物检测的一种常用方法。
例如,可以利用酶免疫技术对食品中的残留农药、重金属等有害物质进行检测。
可以通过自动吸附荧光免疫法、免疫层析法等方法快速、准确地检测出有害物质的存在情况。
三、总结总之,分子生物学技术在检验检疫中的应用非常广泛,可以快速、准确、高效地检测动植物病原、进口食品中的污染物等,并为保证人民群众的健康和食品安全提供了有力保障。
随着技术的不断发展,分子生物学技术在检验检疫中的应用必定会越来越广泛,也将为保障人民群众的健康和生命做出更大的贡献。
分子生物学检验技术的临床应用

分子生物学检验技术的临床应用
分子生物学检验技术是一种基于分子水平的检验方法,它可以检测DNA、RNA、蛋白质等分子的存在和变化,具有高灵敏度、高特异性、高准确性等优点。
随着分子生物学技术的不断发展,它在临床应用中的作用越来越重要。
分子生物学检验技术在临床应用中的主要作用是诊断和治疗。
例如,PCR技术可以检测病原体的存在,如病毒、细菌等,从而帮助医生进行疾病的诊断和治疗。
PCR技术还可以用于检测基因突变、基因表达等,从而帮助医生进行遗传病的诊断和治疗。
分子生物学检验技术还可以用于肿瘤的诊断和治疗。
例如,PCR技术可以检测肿瘤细胞的存在和数量,从而帮助医生进行肿瘤的诊断和治疗。
分子生物学检验技术还可以用于肿瘤的分子诊断,如检测肿瘤基因突变、基因表达等,从而帮助医生进行肿瘤的治疗。
分子生物学检验技术还可以用于药物研发和临床试验。
例如,PCR 技术可以用于检测药物的代谢和药效,从而帮助药物研发人员进行药物的筛选和优化。
分子生物学检验技术还可以用于临床试验,如检测药物的安全性和有效性,从而帮助医生进行药物的临床应用。
分子生物学检验技术在临床应用中具有广泛的应用前景,它可以帮助医生进行疾病的诊断和治疗,促进药物的研发和临床应用。
随着分子生物学技术的不断发展,相信它在临床应用中的作用会越来越
重要。
临床分子生物学检验技术

概念临床分子生物学检验技术是一种通过检测核酸或蛋白质分子的特异性探针,结合PCR扩增等技术手段,对患者进行疾病诊断、评估和监测的生物学检测技术。
其主要原理是通过检测局部基因组的DNA序列变异或特定基因表达的差异,较快地、精准地检测出有关疾病的相关信息。
常见的临床分子生物学检验包括基因测序、实时荧光定量PCR、基因芯片、蛋白质组学等。
应用临床分子生物学检验技术在诊断和治疗疾病等方面有广泛的应用。
它包括以下方面:病毒感染检测病毒感染检测是临床分子生物学检验技术的最常见应用之一。
例如,病毒性肝炎、艾滋病等病毒可以通过PCR扩增等技术检测其DNA或RNA序列,快速、准确地诊断出相关病情。
遗传疾病检测临床分子生物学检验技术可以用来检测遗传疾病,例如囊性纤维化、血友病等。
通过测试特定基因的变异,可以帮助提供准确的诊断和治疗方案。
肿瘤检测临床分子生物学检验技术可以用于肿瘤的检测和治疗。
例如,可以通过检测特定基因的变异来确定病程、判断预后、评估生存率。
此外,分子靶向治疗可以根据肿瘤基因异质性搭配治疗,旨在找到更好的治疗方案。
发展趋势随着分子生物学技术的不断发展,临床分子生物学检验技术也有了新的发展方向,主要包括以下几个方面:个性化医疗个性化医疗是临床分子生物学检验技术的重要发展所趋,它利用分子层面的信息,识别和分析患者的基本和环境因素,以针对性和定制性地制定最佳治疗方案,提高临床疗效。
基于大数据的检测随着数据采集和处理技术的不断提高,数据已成为生物医学研究中最重要的资源之一。
临床分子生物学检验技术在未来还将集成可视化数据分析、机器学习等技术,打造更开放、高效、便捷的医学数据系统。
智能化诊断随着人工智能技术的崛起,临床分子生物学检验技术将融合人工智能技术,利用计算机进行大数据分析和诊断,打造智能化临床检测平台,大大改进诊断效率和准确性,从而进一步提升疾病的治疗效果和预测准确性。
总的来说,临床分子生物学检验技术在治疗、预防及生物医学研究方面持有巨大潜力。
临床分子生物学检验技术

04
优势:快速、准确、灵敏度高
05
局限性:成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测:通过基因测序技术, 检测遗传病相关基因突变
产前诊断:通过基因检测,评估 胎儿遗传病风险,指导优生优育
遗传咨询:根据基因检测结果, 提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗:根据基因检测结果, 制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作:与其他领域的技 术相结合,如人工智能、大 数据等,为分子生物学检验 技术带来更多的市场机遇。
汇报人:xxx
液体活检技术的发展: 通过血液样本检测肿瘤 细胞,提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用: 用于基因表达分析、 基因分型等,提高了 检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展: 实现了对单个细胞的基 因表达分析,提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展: CRISPR/Cas9等基因 编辑技术的出现,为基 因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求:随着人们对健康 重视程度的提高,分子生物 学检验技术在医疗领域的应 用将越来越广泛。
02 技术进步:随着分子生物学 技术的不断发展,检验技术 将更加精准、高效,为市场 带来更多机遇。
03 政策支持:政府对医疗领域 的投入加大,为分子生物学 检验技术的发展提供了有利 的政策环境。
生物学与工程学的融合:分子 生物学检验技术需要利用工程 学原理和方法,如微流控芯片、 纳米材料等,进行生物大分子 的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度:分子生物学检验技术涉及 多个学科,技术难度较大
成本问题:分子生物学检验技术成本 较高,难以普及
检测准确性:分子生物学检验技术检 测准确性有待提高
临床分子生物学检验技术名词解释

临床分子生物学检验技术名词解释临床分子生物学检验技术是一种应用分子生物学原理和技术的方法,用于检测和诊断临床样本中的遗传变异、基因表达和蛋白质水平等。
它可以为临床医生提供有关疾病发生、发展和治疗反应的重要信息。
以下是一些常见的临床分子生物学检验技术及其解释:1.聚合酶链反应(PCR):PCR是一种用于扩增DNA片段的技术。
它可以从极小的DNA样本中扩增特定的DNA片段,以检测和诊断遗传性疾病、感染和肿瘤等。
2.基因测序:基因测序是一种用于确定DNA或RNA序列的技术。
它可以揭示个体的遗传信息,检测基因突变和多态性,帮助诊断遗传性疾病、肿瘤和药物反应等。
3.核酸杂交:核酸杂交是一种用于检测目标DNA或RNA序列的技术。
它利用DNA或RNA探针与目标序列互补结合的原理,可以检测病毒感染、基因突变和融合基因等。
4.蛋白质电泳:蛋白质电泳是一种用于分离和检测蛋白质的技术。
它通过在凝胶中进行电泳,可以分离不同大小、电荷和亲和性的蛋白质,用于疾病标记和生物标志物的检测。
5.免疫组化:免疫组化是一种用于检测蛋白质在细胞或组织中的表达和定位的技术。
它利用特异性抗体与目标蛋白质结合,通过染色或荧光信号来检测和定量蛋白质的表达水平。
6.质谱分析:质谱分析是一种用于分析和鉴定化合物的技术。
它可以通过将样本中的分子离子化,利用质谱仪测量其质量和电荷比,从而确定样品的组成和结构,用于肿瘤标记物和药物代谢产物的检测。
这些临床分子生物学检验技术在临床实践中起着重要的作用,可以帮助医生进行准确的诊断和治疗决策,为患者提供更好的医疗服务。
随着技术的不断发展和突破,我们可以预期未来将出现更多更精确的分子生物学检验技术,为临床医学带来更大的进步和革新。
分子生物学检验技术在医学检验中的应用进展

分子生物学检验技术在医学检验中的应用进
展
分子生物学检验技术是一种基于分子遗传学原理的检验技术,通
过检测DNA、RNA等分子的变化来检测疾病或病原体的存在和特性。
随
着科技的发展和研究的深入,分子生物学检验技术已经成为临床医学、病理学、流行病学等领域不可或缺的分析方法之一。
在临床医学中,分子生物学检验技术可用于很多方面,如病原体
的检测、基因突变的检测、遗传性疾病的筛查等。
其中,最常见的应
用包括:
1.病原体的检测:可以对病人的样本进行PCR扩增,检测病原体
的DNA和RNA,从而确认感染病原体的种类和数量,常见的有乙肝病毒、艾滋病病毒和结核菌等。
2.遗传性疾病的筛查:对于一些常见的遗传性疾病,如脑瘫、红
斑狼疮等,可以进行基因检测,通过PCR扩增和序列分析来检测有无
相关基因的突变或拷贝数异常。
3.肿瘤基因突变检测:可以针对某些常见癌症,如结直肠癌、胃
癌等,通过检测相关突变基因,对恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供重
要的支持。
分子生物学检验技术的应用不断拓展,其优点包括检测灵敏度高、检测时间短、准确度高等,因此逐渐成为医学检验的重要手段。
未来,随着技术的不断优化和升级,分子生物学检验技术仍将持续发展并为
医学检验带来更多的创新和突破。
分子生物学检验技术的临床应用

分子生物学检验技术的临床应用分子生物学检验技术是一种应用于临床诊断和治疗的重要工具。
它基于分子生物学的原理和方法,通过对生物体内分子水平的研究,为医生提供了更准确、快速和个体化的诊断和治疗方案。
本文将从分子生物学检验技术的原理、临床应用及其优势等方面进行探讨。
一、分子生物学检验技术的原理分子生物学检验技术主要包括核酸提取、聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、基因测序等。
其中,核酸提取是从样本中提取出核酸分子,PCR是通过扩增特定DNA片段来检测目标基因的存在,实时荧光定量PCR则可以定量检测目标基因的数量,基因测序则是对DNA序列进行测定。
这些技术的基本原理是在体外模拟生物体内的核酸复制和扩增过程,从而实现对目标基因的检测和分析。
二、分子生物学检验技术在临床中的应用1. 基因突变检测:分子生物学检验技术可以对致病基因的突变进行检测,从而帮助医生确定遗传性疾病的诊断和治疗策略。
例如,通过PCR技术可以检测乳腺癌基因BRCA1/BRCA2的突变,帮助判断患者是否具有乳腺癌的遗传风险。
2. 微生物检测:分子生物学检验技术可以快速、准确地检测各类病原微生物,包括细菌、病毒、真菌等。
利用PCR技术可以检测结核分枝杆菌、艾滋病病毒等病原体的存在,帮助医生确定感染性疾病的诊断和治疗方案。
3. 肿瘤标志物检测:分子生物学检验技术可以检测肿瘤标志物的存在和表达水平,帮助医生判断肿瘤的类型、分级和预后。
例如,通过实时荧光定量PCR技术可以检测前列腺特异性抗原(PSA)的表达水平,辅助诊断和监测前列腺癌。
4. 基因型鉴定:利用分子生物学检验技术可以对个体基因型进行鉴定,帮助医生制定个体化的药物治疗方案。
例如,通过基因测序技术可以确定患者对某些药物的代谢能力,从而避免不良药物反应或提高药物疗效。
三、分子生物学检验技术的优势1. 高灵敏度:分子生物学检验技术可以在非常低浓度的样本中检测到目标基因的存在,具有非常高的灵敏度。
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1、分子生物学检验技术:是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变,为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。
(1)感染性微生物的检测。
如:用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
(2)基因突变的检测。
如:用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。
(3)法医学检测。
如:用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。
(4)基因异常表达的检测。
如:用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。
(5)基因定位。
如:用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。
3、基因组:是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4、基因:是基因组中一个功能单位,是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
5、原核生物:是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称,是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构:是原核生物基因组的功能单位。
7、质粒:是指细菌细胞染色体外,能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。
8、转座因子:又称为转座元件,是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。
9、原核生物基因组的结构特征:(1)原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成,基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。
(2)具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA。
编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能的识别区域,如复制起始区、转录启动区和终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。
(3)结构基因通常为单拷贝基因,编码顺序一般不重叠。
(4)具有编码同工酶的基因。
(5)含有可移动的DNA序列。
10、病毒基因组的结构特点:(1)与细菌和真核生物基因组相比,病毒基因组结构简单,基因数少,所含信息量也少。
(2)病毒基因组的核酸类型较多,有双链DNA、单链DNA、双链RNA和单链RNA;有环状分子,也有线性分子。
但无论是哪种核酸类型,一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种,或DNA,或RNA。
(3)基因组中有基因重叠现象,这种结构的意义在于使较小的基因组能携带较多的遗传信息。
(4)基因组中具有操纵子结构。
(5)病毒基因可连续也可间断。
(6)基因组中重复序列少。
(7)基因组中非编码区少。
(8)病毒基因组是单倍体。
(9)病毒基因组核酸序列中功能相关的蛋白质基因往往丛集在基因组的一个或几个特定部位,形成一个功能单位或转录单元。
(10)病毒基因组含有不规则的结构基因。
11、真核生物基因组的结构特点:(1)真核生物基本上不存在操纵子结构,一个结构基因转录生成一条mRNA,即mRNA是单顺反子,许多蛋白是由相同或不同的亚基构成,因此涉及多个基因的协调表达。
(2)基因组中非编码的区域多于编码区域,并且,编码蛋白质的基因一般是不连续的断裂基因,即有外显子和内含子,在转录后经剪切成成熟mRNA后,才能翻译成蛋白质。
(3)基因组DNA有重度、中度和低度三种重复序列。
(4)基因组DNA具有多基因家族与假基因。
(5)基因组DNA结构存在不同程度的差异,即基因多态性。
(6)基因组DNA也有基因重叠现象。
(7)真核细胞的染色体末端存在一种由DNA片段和蛋白质组成的独特结构,即端粒。
它能维持染色体的稳定性。
12、乙型肝炎病毒(HBV)基因组的结构:HBV基因组的长度为3.2kb,是带有部分单链区的环状双链DNA分子,是目前已知感染人类最小的DNA病毒。
HBV的两条链长度不等,长的链为负链,用“L(-)”表示,其长度是固定的,携带有病毒全部的编码信息;短的为正链,用“S(+)”表示,正链在不同的分子中长度不等,一般长约1.6-2.8kb,大约是负链的50%-100%,并且短链的5’端位置是固定的,而3’端的位置是可变的。
在负链的5’端有一低分子量的蛋白质,在正链的末端则有一段短RNA,它们是引导DNA合成的引物。
两条链的5’端有约250-300bp可互补结合,所以也称为黏性末端,这种互补结合是DNA保持双链环状的基础。
此外,这部分核苷酸序列也是HBV最常整合到肝细胞染色体DNA中得序列。
在黏性末端的两侧还各有11个核苷酸构成的顺向重复序列,分别称为DR1和DR2,DR1在负链5’端,DR2在正链5’端,中间相隔223个核苷酸。
DR区域是DNA成环及病毒复制的关键区域。
HBV基因组已经确定在负链DNA核苷酸序列为模板转录的RNA上含有4个公认的开放阅读框,分别成为S、C、P、X区。
13、丙型肝炎病毒基因组(HCV)的结构:呈球形颗粒,直径约50nm,有一脂质包膜。
基因组为单链正链RNA病毒,链长约9.5kb,整个基因组只有一个ORF,编码3011或3010个氨基酸。
5’端和3’端分别有短的非编码区(UTR) 。
5’端UTR 由324-341个核苷酸组成,可能在病毒的复制和翻译过程中起重要的调节作用。
5’端UTR的核苷酸序列保守性强,可用于基因检测诊断。
3’端UTR由27-55个核苷酸组成,其长度取决于病毒的来源,由病毒固有顺序与各种长度的“多U序列”组成,是HCV的独特结构。
HCV基因产物均来自一个大的多蛋白前体,经宿主与病毒编码的蛋白酶的联合作用,在翻译中或翻译后被加工成为结构蛋白及非结构蛋白。
结构蛋白包括两种:核心蛋白和包膜糖蛋白。
非结构蛋白包括四种:NS2、NS3、NS4、NS5。
14、人类免疫缺陷病毒基因组(HIV)的结构:(主要有两型:HIV-1和HIV-2。
两型病毒的核苷酸序列差异超过40%,世界范围的AIDS大多由HIV-1所致,HIV-2只在西非呈地区性流行。
)HIV基因组由2条相同的正链RNA在5’端通过氢键互相连接在一起形成二聚体,其单链RNA含有9749个核苷酸。
HIV基因组共有9个基因,其中3个是结构基因,6个是调控基因。
在病毒基因组的5’端和3’端各有相同的一段核苷酸序列,称为长末端重复序列(LTR)。
LTR中含有启动子、增强TATA序列等,它们对病毒基因组转录的调控起关键作用。
15、质粒的一般性质:质粒作为一个完整的复制子,在转化菌细胞后能自主复制,并对细菌的一些代谢活动和抗药性表现具有一定的作用。
在质粒只有在宿主细胞内才能完成自我复制,一旦离开宿主细胞就无法复制和扩增,相反,宿主细胞失去了质粒依旧能存活。
质粒也是一种游离基因,既可整合到细菌染色体中,又可在游离出来。
质粒具有不相容性。
16、基因结构异常:广义上是指染色体畸变和基因突变,狭义上一般是指基因突变。
17、基因结构异常的类型:通常分为单基因病和多基因病。
单基因病包括:三联体重复、血红蛋白病、苯丙酮尿症和遗传性原发痛风。
多基因病包括:原发性高血压、糖尿病和实体瘤。
18、端粒:真核细胞染色体末端存在着一种由DNA片段和蛋白质组成的独特结构,即为端粒。
它对维持染色体的稳定性具有重要作用。
19、端粒的主要作用:(1)维持染色体的稳定性,防止染色体重组及末端被降解。
(2)保证细胞在有丝分裂时染色体准确的分离,在减数分裂是保证染色体的成对及运动。
(3)端粒在细胞生长中有很大的作用,其与肿瘤和衰老有关。
20、人类基因组:包括细胞核内的核基因组和细胞质内的线粒体基因组。
核基因组由3.16×109bp组成,线粒体基因组由16569bp组成。
21、核酸:是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。
(天然存在的核酸有两类,即DNA和RNA。
)22、核酸分离纯化应遵循的原则:一是保证核酸一级结构的完整性,因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的基本要求;二是尽量排除其他分子的污染,保证核酸样品的纯度。
23、简述核酸分离纯化技术路线的设计:(1)核酸的释放:①细胞破碎方法中机械剪切法不能用于基因组DNA的提取;②非机械法常用化学试剂或酶细胞溶解法。
(2)核酸的分离与纯化:①除去蛋白质、多糖、脂类等大分子物质;②除去非目的核酸组分;③除去实验溶液和试剂。
(3)核酸的浓缩、沉淀于洗涤:①浓缩:提高样品浓度;②沉淀:常用的浓缩方法,如醋酸钠、醋酸铵等;③洗涤:除去共沉淀的盐,常用70%-75%的乙醇。
24、简述酚抽提法分离纯化基因组DNA的方法,并绘制出流程示意图:(1)将分散好的真核生物组织、细胞在含EDTA、SDS及无DNA 酶裂解缓冲溶液裂解细胞,破坏细胞膜、核膜,EDTA能抑制细胞中DNA酶的活性,使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中。
SDS主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质,并使它们沉淀,同时还有降解DNA酶的作用。
再经蛋白酶K处理后,用PH8.0的Tris饱和酚抽提DNA,重复抽提至一定纯度后,得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化,此法可获得100-200kb的DNA片段。
(2)书本82页25、简述低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法如何回收基因组DNA,有何优点:本方法是从低熔点琼脂糖凝胶中切出含待回收的DNA凝胶块,利用其纯度高、熔点低及凝固温度低的特点,对DNA片段回收的方法。
该法对高分子量的DNA特别有用,也能有效的分离小分子量的DNA片段。
26、质粒DNA纯化的主要方法与原理:(1)cscl-EB法:是一种沉降平衡离心法。
经超速离心,离心介质cscl形成一连续的密度梯度,在过量EB存在的条件下,各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开。
该法主要用于纯化容易出现切口的极大质粒DNA和具有某些特殊用途的闭环质粒DNA。
(2)聚乙二醇沉淀法:是一种分级沉淀法。
质粒DNA的粗制品首先用LiCl沉淀大分子RNA,并用RNase消化小分子RNA,然后在高盐条件下,用PEG选择性地沉淀大的质粒DNA,沉淀的质粒DNA进一步用酚/氯仿抽提和乙醇沉淀。
PEG沉淀法简单、经济、试用广泛,尤其对碱裂解法提取的质粒纯化效果好,适用于分子克隆中所有常规的酶学反应,也能用于高效的哺乳动物细胞学的转染。
但不能有效分离带切口的环状质粒DNA与闭环质粒DNA。
(3)柱层析法:柱层析法纯化质粒DNA的关键是用于填充层析柱的树脂。
树脂可分两类:一类是利用疏水的相互作用纯化质粒DNA样品;另一类是通过离子交换与吸附的相互作用进行纯化。
以硅基质作为填充材料的柱层析作用原理是:在多盐条件下,依靠DNA与硅基质的可逆性结合进行纯化。
多盐造成磷酸二酯骨架的脱水,通过暴露的磷酸盐残基,是DNA 吸附到硅基质上。
以50%的乙醇溶液洗去RNA和糖类等生物大分子后,加入TE缓冲液或水溶液使DNA分子重新水合,并通过离心洗脱出来。
DNA与硅基质的吸附作用与DNA的碱基组成和拓扑结构无关,因此可用于环形质粒DNA和线性DNA的纯化。