分子生物学检验技术基本知识点
临床分子生物学检验技术
04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术， 检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估 胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果， 提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果， 制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技 术相结合，如人工智能、大 数据等，为分子生物学检验 技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展： 通过血液样本检测肿瘤 细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用： 用于基因表达分析、 基因分型等，提高了 检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展： 实现了对单个细胞的基 因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因 编辑技术的出现，为基 因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康 重视程度的提高，分子生物 学检验技术在医疗领域的应 用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学 技术的不断发展，检验技术 将更加精准、高效，为市场 带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域 的投入加大，为分子生物学 检验技术的发展提供了有利 的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子 生物学检验技术需要利用工程 学原理和方法，如微流控芯片、 纳米材料等，进行生物大分子 的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及 多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本 较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检 测准确性有待提高
《分子生物学检验技术》基本知识点
分子生物学基本知识点一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。
2、基因病分为单基因病和多基因病.3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。
4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区;③扩增反应区；④产物分析区.5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。
6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA—DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针.7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。
8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA.9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。
10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。
11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。
12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交)和延伸.DNA 双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中.13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产生的缺口错开突出，称为粘末端.若产生的缺口不错开，称为平末端。
14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数据库和DIP数据库。
15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。
16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA 杂交和RNA与RNA杂交。
17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。
18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法.19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数.20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等。
分子生物学实验基础知识
分子生物学实验基础知识分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。
其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也是分子水平研究疾病发生机制、基因诊断和基因治疗的方法。
转化（trans formation）、转染、转导、转位等是自然界基因重组存在的方式，也是人工基因重组常采用的手段。
基因重组的目的之一是基因克隆（gene clone），基因克隆可理解为以一分子基因为模板扩增得到的与模板分子结构完全相同的基因。
使需要分析研究的微量、混杂的目的基因易于纯化，得以增量，便于分析。
外来基因引起细胞生物性状改变的过程叫转化（transformation），以噬菌体把外源基因导入细菌的过程叫转染（transfection）。
利用载体（噬菌体或病毒）把遗传物质从一种宿主传给另一种宿主的过程叫转导（transduction）。
一个或一组基因从一处转移到基因组另一处的过程叫转位（transposition），这些游动的基因叫转位子。
一、基因工程的常用工具（一）载体载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。
载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。
载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。
质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。
质粒有严紧型和松弛型之分。
严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。
而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一个细胞可复制30-50个质粒，如果用氯霉素可阻止蛋白质合成，使质粒有效利用原料，复制更多的质粒。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术:是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。
（1）感染性微生物的检测。
如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
（2)基因突变的检测。
如：用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP）技术检测地中海贫血基因突变。
（3）法医学检测。
如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。
（4）基因异常表达的检测.如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。
（5）基因定位。
如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。
3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4、基因：是基因组中一个功能单位,是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位。
7、质粒:是指细菌细胞染色体外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。
8、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。
9、原核生物基因组的结构特征:(1）原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成，基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。
（2）具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA.编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组.在基因组中存在多功能的识别区域,如复制起始区、转录启动区和终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。
(3)结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一般不重叠。
（4）具有编码同工酶的基因.（5)含有可移动的DNA序列。
10、病毒基因组的结构特点：(1)与细菌和真核生物基因组相比，病毒基因组结构简单，基因数少,所含信息量也少。
分子生物学检验完整版
1病原生物基因组在医学上有何应用?详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因,原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些?原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。
特性:进化上高度保守,负责调控正常细胞生命活动,可以转化为癌基因。
功能分类:生长因子,生长因子受体,信号转导蛋白,核调节蛋白,细胞周期调节蛋白,抑制凋亡蛋白激活机制:插入激活,基因重排,基因点突变,基因扩增,基因转录改变3试述Down综合征(21三体综合征)的主要临床特征及核型。
临床特征:生长发育障碍,智力低。
呆滞面容,又称伸舌样痴呆。
40%患者有先天性心脏畸形。
肌张力低,50%患者有贯通手,男患者无生育能力,女患者少数有生育能力,遗传风险高。
核型:92.5%患者游离型:核型为47,XX(XY),+212.5%患者为嵌合型:46,XX(XY)/47,XX(XY),+215%患者为易位型:46,XX(XY),-14,+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点,对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检:敏感度和特异性差,不能用于确诊。
2分离培养法:诊断NG感染的金标准,但是其对标本和培养及营养要求高,培养周期长,出报告慢,难以满足临床要求。
3免疫学法:分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制,推广受限。
分子生物学的优点:敏感,特异,可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌,适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中,点突变检测常用方法有哪些?1异源双链分析法(HA)2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸(DNA RNA)的检测、基因分型和耐药基因分析等。
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术:就是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因得结构、表达得变化与由此而导致得基因功能得改变,为疾病得研究与诊断提供更准确、更科学得信息与依据得一门学科。
2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中得应用。
(1)感染性微生物得检测。
如:用PCR技术进行甲型肝炎病毒得检测、乙型肝炎病毒得检测与解脲脲原体得检测等。
(2)基因突变得检测。
如:用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。
(3)法医学检测。
如:用PCR微卫星检测技术进行亲子关系得鉴定与个体识别。
(4)基因异常表达得检测。
如:用cDNA表达得芯片技术进行基因异常表达得检测。
(5)基因定位。
如:用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达得定位。
3、基因组:就是一个细胞或一种生物体得整套遗传物质。
4、基因:就是基因组中一个功能单位,就是贮存有功能得蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需得全部核苷酸序列。
5、原核生物:就是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌与蓝绿藻等原始生物得总称,就是最简单得细胞生物体。
6、操纵子结构:就是原核生物基因组得功能单位。
7、质粒:就是指细菌细胞染色体外,能独立复制并稳定遗传得共价闭合环状分子。
8、转座因子:又称为转座元件,就是一类在细菌染色体、质粒与噬菌体之间自行移动并具有转位特性得独立得DNA序列。
9、原核生物基因组得结构特征:(1)原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成,基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。
(2)具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA。
编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能得识别区域,如复制起始区、转录启动区与终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。
(3)结构基因通常为单拷贝基因,编码顺序一般不重叠。
(4)具有编码同工酶得基因。
(5)含有可移动得DNA序列。
10、病毒基因组得结构特点:(1)与细菌与真核生物基因组相比,病毒基因组结构简单,基因数少,所含信息量也少。
(完整word)临床分子生物学检验 总
四个阶段：一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心二、以PCR技术为核心三、以生物芯片为核心四、以DNA测序技术为核心广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA)为主基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标病原生物基因1。
菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间2。
确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状4。
细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播基因变异1。
致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。
肿瘤相关基因单基因病1。
致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2。
致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。
疾病诊断和遗传咨询3。
多基因病的研究4。
器官移植配型和个体识别循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。
日本国立遗传研究所(DDBJ）一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPRO T等。
蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.蛋白质数据库常用的有SWISS—PROT、 PIR、 PDB数据库。
分子生物学 笔记 医学检验
1基因（gene）:编码有功能的蛋白质或RNA所必须的全部核酸序列。
2结构基因：编码蛋白质或RNA所含有的全部DNA。
3启动子：DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域，在许多情况下，还包括促进这一过程的调节蛋白的结合位点。
4顺式作用元件：DNA、RNA或者蛋白质中的一些特殊的核酸或氨基酸残基序列，只作用于与其连接在一起的靶，而不作用于不与其相连的靶。
5质粒：细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。
现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的，常含抗生素抗性基因，是重组DNA技术中重要的工具。
6基因表达：使基因所携带的遗传信息表现为表型的过程。
包括基因转录成互补的RNA序列。
对于结构基因，信使核糖核酸(mRNA)继而翻译成多肽链，并装配加工成最终的蛋白质产物。
7操纵子：转录的功能单位。
很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。
8增强子：增强基因启动子工作效率的顺式作用序列，能够在相对于启动子的任何方向和任何位置(上游或下游)上都发挥作用。
9反式作用因子：通过直接结合或间接作用于DNA、RNA等核酸分子，对基因表达发挥不同调节作用(激活或抑制)的各类蛋白质因子。
10基因组学：研究基因组的结构、功能及表达产物的学科。
基因组的产物不仅是蛋白质，还有许多复杂功能的RNA。
包括三个不同的亚领域，即结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学。
11功能基因组学：研究基因组中各基因的功能，包括基因的表达及其调控模式的学科。
12.HGP：人类基因组计划，于20世纪80年代提出的，由国际合作组织包括有美、英、日、中、德、法等国参加进行了人体基因作图，测定人体23对染色体由3×109核苷酸组成的全部DNA序列，于2000年完成了人类基因组“工作框架图”。
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一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。
2、基因病分为单基因病和多基因病。
3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。
4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区；③扩增反应区；④产物分析区。
5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。
6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA-DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针。
7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。
8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA。
9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。
10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。
11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。
12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交）和延伸。
DNA双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中。
13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产生的缺口错开突出，称为粘末端。
若产生的缺口不错开，称为平末端。
14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数据库和DIP数据库。
15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。
16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂交和RNA与RNA杂交。
17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。
18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法。
19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数。
20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等。
探针。
寡核苷酸探针、RNA探针和21、核酸探针的种类有DNA22、核酸探针标记方法主要有同位素标记和非同位素标记。
23、在真核生物结构基因中，编码序列与非编码序列呈间隔排列。
前者称为外显子，后者称为内含子。
24、PCR实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）、试剂污染和标本间的交叉污染。
25、基因表达包括转录和翻译两个过程。
26、DNA重组技术中常用的DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Taq DNA聚合酶、逆转录酶和T4末端转移酶。
27、以RNA为模板的PCR反应被称为逆转录PCR。
28、细胞调亡又称为细胞程序性死亡，具有特殊的生物学意义。
29、转位因子包括插入序列、转座子、可转座的噬菌体。
二、选择题1、没有功能的基因是（）。
（A）假基因（B）重复序列（C）多基因家族（D）重叠基因2、PCR反应中，变性温度一般定在（）。
（A）95-97℃（B）40-70℃（C）72℃（D）36℃3、凋亡小体出现在（）。
（A）细胞坏死中（B）程序性死亡中（C）细胞变性中（D）超敏反应中4、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳可应用在（）。
（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA基因分析（D）糖分析5、异硫氰酸钾—酚氯仿一步法是提取（）的方法。
（A）DNA （B）RNA（C）蛋白质（D）cDNA6、DNA重组中使用的质粒大多为（）。
（A）严紧型质粒（B）松驰型质粒（C）抗药性质粒（D）F质粒7、细胞调亡是一种（）现象。
（A）细胞坏死（B）细胞程序性死亡（C）炎性反应（D）超敏反应8、人的体细胞具有46条染色体，属于（）。
（A）单倍体（B）二倍体（C）三倍体（D）二价体9、PCR反应的引物需要（）。
（A）1条（B）2条（C）3条（D）4条10、原位杂交在（）进行。
（A）滤膜的DNA上（B）凝胶的DNA上（C）试管中的DNA上（D）细胞的核酸上11、研究蛋白质组学是属于（）。
（A）生命计划（B）人类基因组计划（C）后基因组计划（D）基因工程计划12、真核细胞基因组的结构基因是断裂基因，它含有（）。
（A）内含子（B）操纵子（C）复制子（D）重组子13、第一个建立的人工染色体是（）。
（A）细菌人工染色体（B）噬菌体人工染色体（C）酵母人工染色体（D）哺乳动物人工染色体14、核酸分子杂交依据杂交介质的不同，可以分为液相杂交，固相杂交和（）。
（A）原位杂交（B）菌落杂交（C）点与狭缝杂交（D）同位素杂交15、变性梯度凝胶电泳可应用在（）。
（A）蛋白质分析（B）DNA分析（C）RNA分析（D）糖类分析16、下列几种实验方法中，哪种方法不是DNA序列测定方法（）。
（A）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）杂交法（D）平端连接法）杂交方法。
分析应使用（RNA、17．（A）Southern印迹（B）Northern印迹（C）Western印迹（D）Eastern印迹18、以下哪种现象不是属于细胞程序性死亡（）。
（A）皮肤分为真皮与表皮（B）血细胞的死去与再生（C）指（趾）甲的形成（D）细胞坏死19、法医学中亲子鉴定应用（）。
（A）HLA单倍体分析（B）STR单倍型分析（C）单核苷酸多态性分析（D）免疫印迹分析20、以下哪种方法又称为免疫印迹（）。
（A）Southern 印迹（B）Northern 印迹（C）Western印迹（D）Eastern印迹21、以下哪种疾病和细胞凋亡无主要关系（）。
（A）血友病（B）肿瘤（C）系统性红斑狼疮（D）老年性痴呆22、理想的质粒载体应具有（）抗菌素抗性标志。
（A）1种（B）2种（C）3种（D）4种23、DNA测序中，酶法指的是（）。
（A）双脱氧链终止法（B）化学降解法（C）酶切法（D）酶解法24、基因工程中，将不同来源的DNA分子进行特异地切割使用的是（）。
（A）DNA聚合酶（B）逆转录酶（C）连接酶（D）限制性内切酶25、双脱氧核苷酸末端终止法指的是（）。
（A）酶法（B）酶切法（C）酶解法（D）化学降解法26、构建cDNA时使用的酶是（）。
（A）限制性内切酶（B）DNA聚合酶（C）逆转录酶（D）连接酶27、真核生物基因组与原核生物基因组的区别是前者基因中一般具有（）。
（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子28、原核生物基因组与真核生物基因组的区别是前者基因组中具有（）。
（A）操纵子（B）复制子（C）内含子（D）重组子30、PCR反应中，链的延伸温度一般定在（）。
（A）95-97℃（B）40-70℃（C）72℃（D）36℃31、隐性癌基因一般指的是（）。
（A）细胞癌基因（B）病毒癌基因（C）原癌基因（D）抑癌基因三、简答题1、以PCR为基础的相关技术有哪些逆转录PCR、定量PCR、多重PCR、免疫PCR、差异显示PCR、PCR诱导定点突变、原位PCR。
2、核酸分子杂交的类型有哪些根据杂交核酸分子分为DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA杂交；根据探针标记分为同位素与非同位素杂交；根据杂交介质分为液相杂交、固相杂交、原位杂交。
3、简述PCR实验系统中的主要污染。
、试剂污染和标本间的交叉污实验系统中的污染主要有扩增片段的污染（产物污染）PCR．染，其中污染的最主要来源是扩增产物的污染。
4、DNA重组的工具酶主要有哪些限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、T4多核苷酸海激酶、碱性磷酸酶。
5、核酸探针主要有哪些种类DNA探针、RNA探针、寡核苷酸探针。
6、基因组DNA分离纯化的方法有几类酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法、其它方法，如异丙醇沉淀法。
7、什么是蛋白质芯片技术通过机械点涂的方法，将多肽或蛋白质高密度点阵并固定在载体表面，与标记的配体进行杂交，根据杂交信号的有无、多少进行定性与定量分析方法称为蛋白质芯片技术。
8、PCR反应体系的主要成分包括哪些参与PCR反应的成份主要是模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和缓冲液等。
9、杂交反应的主要步骤有哪些包括预杂交、杂交、洗脱三个步骤10、限制性内切酶的主要用途是什么（1）改造和组建质粒；（2）组建基因组DNA物理图谱；（3）基因组DNA同源性研究；（4）DNA 重组克隆及亚克隆；（5）DNA杂交与序列分析。
11、蛋白质分离纯化的一般程序是什么蛋白质的种类、性质、所处体系以及蛋白质分离纯化的目的不同，因此不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质的分离工作。
蛋白质的分离纯化程序一般包括前处理、粗分离、细分离三个步骤。
12、理想的质粒载体一般具备的特点①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切位点，以便目的DNA片段插入；③具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志；④分子量相对较小但有较高的拷贝数。
13、简述DNA重组的主要内容目的DNA片段与载体被限制性内切酶切割并相互连接成DNA重组体，重组体转入宿主细胞复制及表达，重组子的筛选与鉴定。
14、目前常用的DNA重组载体主要有几类质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体、人工染色体15、简述防止RNase对RNA水解的原则。
一要避免细胞外RNase的污染并抑制其活性，二要尽快地抑制细胞内RNase的活性并极力地去除RNase。
16、PCR反应的引物设计必须遵循哪些原则（1）用于PCR反应的引物需要二条，分别设在被扩增目标片段的二端，并分别与模板正负链序列互补。
（2）引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜。
（3）二条引物之间（尤其在3ˊ端）的序列不可有互补，以免形成引物二聚体。
（4）引物的碱基组成应平衡，避免出值而决定的，二Tm 扩增中的退火温度是要根据引物的PCR）5（现嘌呤、嘧啶碱基堆积。
．条引物的Tm值不能差别太大。
（6）根据需要，合成引物时在其5ˊ端可以加修饰成分。
17、PCR产物的检测技术主要有哪些（1）PCR-限制性片段长度多态性（2）等位基因特异性寡核苷酸（3）单链构象多态性（4）变性梯度凝胶电泳（5）融点曲线分析（6）PCR产物的序列分析18、肿瘤发生学说主要内容是什么肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。
当正常细胞受到物理因素(如紫外线、电离辐射等)、化学因素(如黄曲霉毒素)以及生物因素(DNA或RNA致癌病毒)等致癌因子作用后，经多次打击多阶段变化便形成了肿瘤。
19、蛋白质分析中盐析法的主要原理是什么原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随着盐浓度升高而增加，此时称为盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。
四、概念题1、癌基因包括病毒癌基因(v-onc)和细胞癌基因(c-onc)两种，具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。
2、DNA重组不同来源的DNA分子，通过磷酸二酯键链接而重新组合的过程，称为DNA重组。