农药残留量测定法

1．主题内容：建立有农药残留量测定法操作方法。

2．适用范围：本规程适用于检查药物在生产过程中的农药残留量测定法的操作。

3．引用标准：《中国药典2010版一部》

4．责任：化验员、QC主管。

5. 用途：化验室

6．检查内容及方法

本法系用气相色谱法（附录ⅥE）测定药材、饮片及制剂中部分有机氯、有机磷和拟除虫菊酯类农药，除另有规定外，按下列方法测定。

6.1有机氯类农药残留量测定

6.1.1色谱条件与系统适用性试验

弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm）SE-54（或DB-1701），63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟，理论板数按α-BHC峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5.

6.1.2对照品储备液的制备

精密称取六六六（BHC）（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC）、滴滴涕（DDT）（PP´-DDE，PP´-DDD，OP´-DDT，PP´-DDT）及五氯硝基苯（PCNB）农药对照品适量，用石油醚（60~90℃）分别制成每1ml约含4~5μg的溶液，即得。

6.1.3混合对照品储备液的制备

精密量取上述各对照品储备液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。

6.1.4混合对照品溶液的制备

精密量取上述各对照品储备液，用石油醚（60~90℃）制成每1L分别含0μg、1μg、5μ

g、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。

6.1.5供试品溶液的制备

药材或饮片：取供试品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉，取约2g，精密称定，置100ml 具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮不足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声处理15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（69~90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，再用石油醚（69~90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（69~90℃）精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟，精密量取上清液2ml，至具刻度的浓缩瓶（见图）中，连接旋转蒸发器，40℃下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。

6.1.6制剂

取供试品，研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称取适量（相当于药材2g），以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。

6.1.7测定法

分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算公式品中9中有机氯农药残留量。

6.2有机磷类农药残留量测定

6.2.1色谱条件与系统适用性试验

弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）DB-17MS（或HP-5），磷酸检测器（NPD）。进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温：初始120℃，每分钟10℃升

至200℃，每分钟5℃升至240℃，保持2分钟，每分钟20℃省道270℃，保持0.5分钟。理论板数按敌敌畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5.

6.2.2对照品储备液的制备

精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每1ml约含100μg溶液，即得。

6.2.3混合对照品储备液的制备

精密量取上述各对照品储备液1ml，至20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。

6.2.4混合对照品溶液的制备

精密量取上述各对照品储备液，用乙酸乙酯制成1ml分别含0.1μg、0.5μg、1μg、2μ

g、5μg的溶液，即得。

6.2.5供试品溶液的制备

药材或饮片：取供试品粉末（过二号筛）约5g，精密称定，加无水硫酸钠5g，加入乙酸乙酯50~100ml，冰浴超声处理3分钟，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30~50ml，冰浴超声处理2分钟，放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酯洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液于40℃以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取1ml，置活性炭小柱{120~400目，0.25g，内径0.9cm（如Supelclean ENVI-Carb SPE Tubes，3ml活性炭小柱）用乙酸乙酯5ml预洗}上，置多功能真空样品处理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。

6.2.4测定法

分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。

6.3拟除虫菊酯类农药残留量测定

6.3.1色谱条件与系统适应性试验

弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm）SE-54（或DB-5），63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度270℃，检测器温度330℃。分流比20:1；5:1（或根据仪器设置选择最佳的分流比）。程序升温：初始160℃，保持1分钟，每分钟10℃升至278℃，保持0.5分钟，每分钟1℃

升至290℃，保持5分钟。理论板数按溴氰菊酯峰计算应不低于1×105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

6.3.2对照品储备液的制备

精密称取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯农药对照品适量，用石油醚（69~90℃）分别制成每1ml约含20~25μg的溶液，即得。

6.3.3混合对照品储备液的制备

精密量取上述各对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，用石油醚（69~90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。

6.3.4混合对照品溶液的制备

精密量取上述各对照品储备液，用石油醚（60~90℃）制成每1L分别含0μg、4μg、8μ

g、40μg、200μg的溶液，即得。

6.3.5供试品溶液的制备

药材或饮片：取供试品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉（过五号筛），取约1~2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加石油醚（60~90℃）-丙酮（4:1）混合溶液30ml，超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液。滤液加入适量无水硫酸钠脱水后，于40~45℃减压浓缩至近干，用少量石油醚（60~90℃）反复操作至丙酮除净，残渣加适量石油醚（60~90℃）溶解，至混合小柱{从下至上依次为无水硫酸钠2g、弗罗里硅土4g、微晶纤维素1g、氧化铝1g、无水硫酸钠2g，用石油醚（60~90℃）-乙醚（4：1）混合溶液20ml预洗}上，用石油醚（60~90℃）-乙醚（4：1）混合溶液90ml洗脱，手机洗脱液，于40~45℃减压浓缩至近干，再用石油醚（60~90℃）3~4ml重复操作至乙醚除净，用石油醚（60~90℃）溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，即得。

6.3.6测定法

分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1μl，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中3种拟除虫菊酯农药残留量。