《中国药典》2015年版微生物基本知识解析
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2015版中国药典四部微生物限度
2015版中国药典四部微生物限度中国药典是我国医药行业的重要规范，其中微生物限度是其中一个关键内容。
微生物限度是指药品中允许存在的微生物数量的上限。
它对药品的质量和安全性提出了严格要求。
2015版中国药典中明确了药品微生物限度的标准和方法，以保障药品的质量和使用的安全性。
一、微生物限度的定义和意义微生物限度是指在药品中存在的微生物数量的上限。
它是衡量药品质量和安全性的重要指标之一。
由于微生物对人体健康有潜在的危害，药品中过多的微生物污染可能导致药品的变质和降解，甚至引起严重的药品安全问题。
因此，微生物限度的控制是确保药品质量和安全性的关键步骤之一。
二、微生物的限度标准和分类微生物限度的标准和分类在2015版中国药典中得到了详细说明。
根据药品的特性和用途不同，微生物限度标准和分类也有所差异。
常见的微生物限度分类包括细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等。
各类微生物的限度标准和方法在药典中都有详细描述，以确保药品的质量和安全性。
三、微生物限度的检测方法为了准确检测微生物限度，2015版中国药典提供了一系列的微生物检测方法。
常见的方法包括菌落总数的测定、大肠菌群的测定、霉菌和酵母菌的测定等。
这些方法要求检测人员具备专业的技术和操作能力，确保检测结果的准确性和可靠性。
四、微生物限度的控制措施为了保证药品的质量和安全性，生产企业需要采取一系列的控制措施来控制微生物限度。
这些措施包括原料和辅料的检验、生产环境的控制、生产工艺的严格执行和产品的质量控制等。
通过全面有效的控制措施，企业可以确保药品的微生物限度在合理的范围内，从而保证药品的质量和安全性。
五、微生物限度的意义和前景微生物限度的控制是保障药品质量和安全性的重要手段，它直接影响着人们的生命健康。
随着人们对药品质量和安全性的要求越来越高，对微生物限度的控制也越来越严格。
中国药典不断完善微生物限度标准和方法，为药品生产和使用提供了规范和指导。
未来，微生物限度的研究和控制将成为药品质量控制的重要方向。
2015版中国药典微生物限度解析
10ml；膜剂为100cm²；贵重药品、微量包
（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用
性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查 、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌 落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用
性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查 、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌 落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
《2015版《中国药典》微生物检测与洁净室环境检测技术》-1
育
飞
天
教
育
微生物细胞结构示意图
• 细菌细胞结构图 •
教 真菌细胞结构图 天 飞
育
飞
天
教
育
微生物的五大共性
飞
天
教
育
1、体积小，面积大； 2、吸收多，转化快；
3、生产旺，繁殖快；
4、适应强，易变异； 5、分布广，种类多。
飞
天
教
育
细 菌 形 态 特 征
• 革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的细胞壁结构比较
天
教
育
试管
移液管
先用少许棉花塞于吸口端，然后用纸包好或装入金属吸 管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干。
飞
天
教
育
培 养 基 的 基 础 知 识
溶
液体培养 基用滤纸 过滤，固 体培养基 用纱布块 中夹薄层 脱脂棉过 滤
化
校正酸碱度
（1）先将卵磷脂加入少量蒸馏水低温加 热溶解溶、再加吐温80混匀，，加入琼 脂，静置15分钟。
细胞壁结构 G＋ G－
飞
天
教
育
脂多糖（LPS）,包括脂
厚度 强度 糖类含量 脂类含量 磷壁酸 脂多糖
20－80nm 坚韧 约45％ 约2％ 无
10－15nm 疏松 约15％ 约20％ 有 有
蛋白A，核心多糖和特异
性多糖三个部分。LPS对 动物具有毒性作用，它 牢固地结合在细胞表面，
只在菌体融解时才释放，
非细胞类：病毒、亚病毒(类病毒、朊病毒)
飞
天
教
育
细菌（bacteria）
• 细菌是单细胞的原核微生物
• 细菌是所有生物中数量最多的一类，据估计，其总数约有 5×10的三十次方个。 • 细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成 • 根据形状分为三类，即：球菌、杆菌和螺形菌（包括弧菌、 螺菌、螺杆菌）
2015版中国药典微生物限度解析
微生物限度检查法
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1.非无菌产品微生物限度检查： ----微生物计数法
1.1 总则：环境、要求 1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数法
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– 根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适 宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温 时,应均匀加热,且温度不应超过 45℃。供试 液从制备至加入检验用培养基,不得超过 1小 时。
– 常用的供试液制备方法如下。如果下列供试 液制备方法经确认均不适用，应建立其他适 宜的方法。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量不大于100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平 均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对 照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培 养基管比较，试验菌应生长良好。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
不适用于活菌制剂的检查
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】【 20版：不低于 D级背景下的生物安全柜或B级洁净区域内进行】 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1.非无菌产品微生物限度检查： ----微生物计数法
1.1 总则：环境、要求 1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数法
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– 根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适 宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温 时,应均匀加热,且温度不应超过 45℃。供试 液从制备至加入检验用培养基,不得超过 1小 时。
– 常用的供试液制备方法如下。如果下列供试 液制备方法经确认均不适用，应建立其他适 宜的方法。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量不大于100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平 均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对 照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培 养基管比较，试验菌应生长良好。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
不适用于活菌制剂的检查
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】【 20版：不低于 D级背景下的生物安全柜或B级洁净区域内进行】 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
2015版《中国药典》微生物检查法控制菌检查法修订解析
养18-24h。
• （4）结果判断：
• 若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，则对应培养管为 阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，查表判断1g或1ml 供试品中含耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。
五、供试品检查
• “未检出试验”与“定量试验”结论
• 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数
各供试品量的检查结果 每1g（或1ml）供试 品种可能的菌数（N）
• 4、结果判断方式：在各控制菌项下，生化 实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定试 验。”改为较少的生化实验或“采用其它适用要求
控制菌检查法适用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生 物。
当本法用于检查非无菌制剂及原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按下 列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
三、培养基适用性
1、对照培养基
（5）尽量临用现配，培养基灭菌后，尽快取出，切忌在 高压锅内过夜存留，固体培养基灭菌或融化后，融化状 态放置不得超过8h；一般预制培养基可置洁净环境
2～25℃保存，但不应超过21d；固体琼脂培养基熔化再
使用应不超过1次。 （6）干粉培养基或培养基原料变质再用；预制培养基储存
（铜绿+/大肠选-）1择8-72性h 増菌培养基培养，可以使受伤的细菌得到修复，提 高检出率。
三、培养基适用性
4、适用性检查
控制菌检查
耐胆盐革兰阴性菌
大肠埃希菌
沙门菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
培养基
肠道菌増菌肉汤
紫红胆盐葡萄糖琼脂 麦康凯肉汤
麦康凯琼脂 RVS増菌肉汤
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂
三、培养基适用性
4、适用性检查
（3）根据每个控制菌检查的培养基逐个说明，控制菌检查用培养 基适用性检查的过程。
15版《中国药典》微生物学检验技术实施指导与修订解读
〈２０１５年版〉基本与ＩＣＨ微生物检查法接轨，涵盖标准和方 法的整体变化。
一、15版药典结构—总述
药典由原来的三部改为四部，预计15年7月颁布执行： 其中一部、二部、三部分别为中药、化药、生物药， 四部：中国药典2015版总则，主要包括：
凡例：主要增加对检测方法适用性、制剂通则、辅料 标准适用性等的要求
杨凌化药质量部ＱＣ周国娟 电话：15991721352 2015.04.21
目录
一、15版药典结构； 二、非无菌产品微生物检查； 2.1微生物计数法 2.2控制菌检查法 2.3微生物限度标准 三、微生物实验室质量控制内容； 3.1实验菌株的质量控制 3.2培养基的质量控制实验 3.3微生物鉴定技术 四、制药用水的检验及修订内容； 五、药品微生物实验室规范指导原则增修订的内容
2.1微生物计数法
定义：系指对能在有氧条件下生长的嗜温细菌和 真菌的计数，不适用于活菌制剂的检查。本法 适用于检查非无菌制剂及其原料、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准。
2015版 1105非无菌产品微生物限度检查--微生物计数 法
2.1微生物计数法
1、试验环境
操
2、供试液制备
作
流
3、培养基配制
1、根据供试品的理化特性与生物学特性，来制备供 试液。常用的制备方法详见“通则1105非无菌产 品微生物限度检查--微生物计数法”中规定。其 中不同于10版药典就是缓冲液、某些样品量的规 定有所变化；
2、供试液的浓度，按照方法确认的结论进行确定；
3、供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不 应超过45℃；
程
4、试验方法选择
5、培养计数及结果报告
2.1微生物计数法—试验环境
项目
检测 环境
一、15版药典结构—总述
药典由原来的三部改为四部，预计15年7月颁布执行： 其中一部、二部、三部分别为中药、化药、生物药， 四部：中国药典2015版总则，主要包括：
凡例：主要增加对检测方法适用性、制剂通则、辅料 标准适用性等的要求
杨凌化药质量部ＱＣ周国娟 电话：15991721352 2015.04.21
目录
一、15版药典结构； 二、非无菌产品微生物检查； 2.1微生物计数法 2.2控制菌检查法 2.3微生物限度标准 三、微生物实验室质量控制内容； 3.1实验菌株的质量控制 3.2培养基的质量控制实验 3.3微生物鉴定技术 四、制药用水的检验及修订内容； 五、药品微生物实验室规范指导原则增修订的内容
2.1微生物计数法
定义：系指对能在有氧条件下生长的嗜温细菌和 真菌的计数，不适用于活菌制剂的检查。本法 适用于检查非无菌制剂及其原料、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准。
2015版 1105非无菌产品微生物限度检查--微生物计数 法
2.1微生物计数法
1、试验环境
操
2、供试液制备
作
流
3、培养基配制
1、根据供试品的理化特性与生物学特性，来制备供 试液。常用的制备方法详见“通则1105非无菌产 品微生物限度检查--微生物计数法”中规定。其 中不同于10版药典就是缓冲液、某些样品量的规 定有所变化；
2、供试液的浓度，按照方法确认的结论进行确定；
3、供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不 应超过45℃；
程
4、试验方法选择
5、培养计数及结果报告
2.1微生物计数法—试验环境
项目
检测 环境
《中国药典》2015年版微生物培训
4.按制备方法分类
（1）商品化即用型配培养基 以即用形式或融化后即用形式置于容器（例如平皿、试管或其他容器）
内供应的液体、固体或半固体培养基： ——完全可即用的培养基 ——需重新融化后的培养基（如用于平板倾注技术） ——使用前需重新融化并分装（如倾注到平皿）的培养基 ——使用前需重新融化，添加物质并分装的培养基
（3）液体培养基：固体培养基的对应词，是微生物或动植 物细胞的液状培养基。它具有通气培养、震荡培养的优点。 在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养 分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的 条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细 胞生长，提高生产量。
3.按用途分类
在特定条件下培养基对测试菌株的反应。
培养基的定义和分类
培养基的分类依据
1.按组成成分分类 2.按状态分类 3.按用途分类 4.按制备方法分类
1.按组成成分分类
（1）纯化学培养基：有已知分子结构的纯度的化学成分配 制而成的培养基。
（2）未定义和部分定义的化学培养基：全部或部分由天然 物质、加工过的物质或其他不纯的化学物质构成的培养基。
（1）运输培养基：在取样后和实验室处理前保护和维持微 生物活性且不允许明显增值的培养基。运输培养基中通常 不允许包含使微生物增值的的物质，但是培养基应能保护 保护菌株。（例如：缓冲甘油-氯化钠溶液）
（2）保藏培养基：由于在一定期限内保护和维持微生物活 力，防止长期保存对其的不利影响，或使其在长期保存后 容易复苏的培养基。（例如：营养琼脂斜面）
02Part One 药品微生物的检验与控制
药品微生物（Pharmaceutical Microbiology）
药品环境对微生物的影响 消毒与灭菌 无菌保障技术 微生物监控 微生物检验
中国药典2015版-微生物限度检查解析
菌种的传代、保藏与管理
控制程序
菌种来源
菌种的保 管
菌种的复 活
菌种确认
菌种的储 存和领用
菌种的销 毁及领用 记录
菌种传代、保存、使用及销售记录
菌种名称： 传 代 日 期 菌 种 来 源 菌种编号： 传 代 支 数 菌 种 生 长 培 养 基 培 养 温 度 时 间 保 存 温 度 保管人： 发 出 日 期 发 出 方 式 日期： 购 买 单 位
《中国药典》2015年版-微生物限度 标准修订解析
标准修订内容 修订思路1 《中国药典》2010年版一、二、三部限度标准的相关内容合 并。 修订思路2 参考EP7.0，USP35，JP X V标准，修订中国药典的微生物 限度标准。
标准修订内容
参考欧美日药典标准 <1>修订菌数标准表达方式： 指数形式10ncfu，最大可接受限度值遵守2倍规则： 101cfu： 可接受的最大菌数为 20； 102cfu： 可接受的最大菌数为 200； 103cfu： 可接受的最大菌数为 2000：依此类推。 <2>检查指标： 需氧菌总数：TAMC（替代细菌数）----胰酪大豆胨琼脂培养基 耐胆盐的格兰阴性菌（替代大肠菌群） <3>检查制剂分类： 齿龈、皮肤制剂 原辅料、中药提取物、中药饮片的控制 呼吸道制剂耐胆盐格兰阴性菌的控制
增加新概念
• • • • • 1.MPN法使用范围：含菌量较低的供试品细菌总数测定 2.“分散均匀”：并非一定要溶解 3.偏差调查概念引入 当检验结果出现超常或超标时需要进行偏差调查 调查范围：人、机、料、法、环
控制菌检查法修订解析
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法， 但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法---新增内 容
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试验菌
2010版
大肠埃希菌
2015版
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、黑曲霉 白色念珠菌、黑曲霉
(1)胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 菌、白色念珠菌、黑曲霉。 (2)胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌。 (3)沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉。
2010版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液 （用于结肠溶制剂）
2015版
(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 (2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液 (3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠 溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓 冲液（用于结肠溶制剂） (4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基 ●不局限上述稀释液
2010版
试 验 菌 株 1、营养琼脂：大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌 2、玫瑰红钠琼脂：白色念 珠菌 黑曲霉
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠 菌、黑曲霉 2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌 3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲 霉
培养基适用性检查
培养基名称 沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用） 无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，用于20~25℃培养5~7天，应无菌落生长。 抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 试验用菌种 促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉 1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用 常用抗生素 2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与 四环素。 接种方法 抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。 促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。
简便、严谨
评价
微生物检测环境变化
2010版
检测环境 应在洁净度10000级背景 下的局部100级单向流空 气区域内进行
2015版
应在受控洁净环境（不低于 D级洁净环境）下的局部洁 净度不低于B级单向流空气 区域内进行
·其他要求：
▷ 检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。 ▷ 活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。
培养基适用性检查
2010版
检查范围
加菌量
2015版
微生物计数用的成品培养基、由脱水培 养基或按处方配制的固体和液体培养基
固体培养基
50~100CFU
不大于100CFU
培养温度 营养琼脂：30~35℃ 胰酪大豆胨琼脂TSA：30~35℃培养 玫瑰红钠：23~28℃ 胰酪大豆胨肉汤TSB： 30~35℃培养
白色念珠菌、黑曲霉于20~25℃培养不大于5天。与对照培养基 适用性检查 比较，恢复率在50%~200%之间。 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。
计数方法适用性试验
1、常用的供试液制备方法 (1)水溶性供试品 (2)水不溶性非油脂类供试品 (3)油脂类供试品 (4)需要特殊方法制备供试液的供试品：①膜剂、②肠溶及结肠溶制剂、③ 气雾剂喷雾剂、④贴剂。
2、接种和稀释
2010版
试验组 供试液和菌液同时 加入平皿中
2015版
供试液，加入试验菌液，混匀，使 每张滤膜所滤过的供试液中含菌量 不大于100cfu。
供试品 对照组
菌液对 照组 中和剂 对照组
供试液直接加入平 皿中
直接加入菌液到平 皿中 稀释剂对照组
稀释也代替菌液同试验组操作。 （中国药典特殊规定的，协调案无 相关要求）
微生物计数用培养基
2010版
1、营养琼脂用于细菌计数 2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数 3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵 母菌计数 4、菌液制备用稀释液：0.9％氯化钠 溶液
2015版
1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用于需氧 菌总数测定 2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定 3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起 霉菌和酵母菌总数超标用 4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液
微生物检查体系的调整
2010版
分类依据 质控分类 检验体系 项目1 按微生物类别分 细菌、真菌 选择培养、或者人为区分 细菌数 营养琼脂
2015版
按营养条件分 需气、厌气菌 直接与培养条件对应 需氧菌总数 胰酪大豆胨琼脂 （TSA）
项目2
霉菌及酵母菌总数 玫瑰红钠琼脂
容易造成漏检
霉菌及酵母菌总数 沙氏葡萄糖琼脂 （SDA)
沙氏葡萄糖琼脂SDA：20~25℃培养
培养时间 可接受标 准
细菌：48h 真菌：72h
细菌不超过72h，真菌不超过5天
固体培养基（与对照培养基）： 50%~200%（0.5~2） 液体培养基（与对照培养基管比较）： 生长良好
建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的 分离平板上，培养后呈现典型菌落
70%
控制菌项目变化
培养基体系 2010版
大肠菌群大肠埃希菌 Nhomakorabea2015版
耐胆盐革兰阴性菌
大肠埃希菌 沙门菌
明显变化
沙门菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌 白色念珠菌
无明显变化
白色念珠菌
《非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法》
通用要求要点： (1) 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 本 检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法 等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指 导原则 (2) 环境洁净度应符合要求。定期检测：不低于B级的单向流空气区域、工作 台面、环境。参考USP〈1117〉实验室分区原则。 (3) 前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面 活性剂的无毒性及与相容性。 (4) 方法选择：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。（平皿 法、薄膜过滤法和MPN法） (5) 菌种管理：（9203）药品微生物实验室质量管理指导原则关于菌株管理 的要求。 (6) 阴性对照：微生物检查需进行阴性对照试验。如果对照有菌生长，应进 行偏差调查。