《细胞与分子生物学》期末复习
分子生物学--期末考试复习题
一、判断题1、原核细胞和真核细胞的差别之一是前者无染色体结构，后者有染色体结构。
（√）2、基因组是指某一种生物所具有的全部基因的总称.（×）3、真核生物基因的大小通常是外显子的数目和长度决定的。
（×）4、在所有的真核生物中，内含子的长度和序列是高度保守的.（×）5、酵母的基因普遍要比人的基因小，因此,酵母基因组编码的蛋白质普遍要比人基因组编码的蛋白质要小。
（×）6、在自由的四种核苷酸混合溶液中，任何碱基之间都可以形成氢键而发生配对。
×7、PCR只能扩增双链DNA，不能扩增单链DNA。
（×）8、富含GC的DNA双螺旋比富含AT的DNA双螺旋稳定的主要原因是GC碱基对比AT碱基对多一个氢键。
( √）9、用氯化铯梯度超离心纯化质粒DNA时，蛋白质在离心管的最上部,RNA悬浮在中间,而DNA沉在底部。
（×）10、mRNA的剪接总是产生套索结构。
( ×）11、冈崎片段只由DNA组成.（×）12、端粒酶带有自己的DNA模板.（× )13、细胞内的DNA复制既需要DNA聚合酶，也需要RNA聚合酶。
( ×）14、同源重组和位点特异性重组都形成Holliday中间体结构。
（√）15、与tRNA相连的氨基酸本身在决定何种氨基酸参入到正在延伸的肽链上不起任何作用.（√）16、转座重组既可以导致基因的失活，也可以导致基因的激活。
（√）17、只有用相同的限制性酶获得的DNA片段末端才能用DNA连接酶连接起来。
×18、在一个基因的编码区内发生的核苷酸的插入或缺失总是导致移码突变。
×19、PCR和末端终止法测序都需要RNA引物。
( ×）20、只有用相同的限制性酶获得的DNA片段末端才能用DNA连接酶连接起来。
×21、管家基因在细胞里始终表达，因此没有也不需要对其表达进行调控.（×）22、内含子在剪接反应中被切除,所以一种蛋白质的基因如果在内含子内发生突变，一般不会影响到这种蛋白质的功能.（√ )23、限制性酶只能切开双链DNA。
分子生物学总复习期末考试总复习
分子生物学课程重点，以及一份真题。
1、绪论（1）分子生物学的概念分子生物学是研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构与功能，并从分子水平上阐明蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸之间的互作及其基因表达调控机理的学科。
（3）经典历史事迹1928年格里菲斯证明了某种转化因子是遗传物质1944年艾弗里做了肺炎双球杆菌转换实验1953年沃森和克里克提出双螺旋结构桑格尔两次诺贝尔学奖2、染色体与 DNA（1）真核生物染色体具体组成成分为：组蛋白、非组蛋白和DNA。
在真核细胞染色体中，DNA与蛋白质完全融合在一起，其蛋白质与相应DNA的质量之比约为2:1。
这些蛋白质在维持染色体结构中起着重要作用。
（2）组蛋白组蛋白是染色体的结构蛋白，其与DNA组成核小体。
根据其凝胶电泳性质可将其分为H1、H2A、H2B、H3及H4。
组蛋白含有大量的赖氨酸和精氨酸，其中H3、H4富含精氨酸，H1富含赖氨酸。
H2A、H2B 介于两者之间。
H1易分离，不保守；组蛋白的特性：①进化上的极端保守，②无组织特异性；③肽链上分布的不对称性；组蛋白的修饰作用⑤富含赖氨酸的组蛋白H5（3）C值反常现象C值：一种生物单倍体基因组DNA的总量。
一般情况，真核生物C值是随着生物进化而增加，高等生物的C值一般大于低等生物。
（4）DNA的结构•DNA的一级结构即是指四种核苷酸的连接及排列顺序，表示该DNA分子的化学构成。
•DNA二级结构是指两条多核苷酸链反相平行盘绕所生成的双螺旋盘绕结构。
DNA的二级结构分两大类：一类是右手螺旋，如A-DNA和B-DNA；另一类是左手螺旋，即Z-DNA。
DNA三级结构：是双螺旋进一步缠绕，形成核小体，染色质，染色体等超螺旋结构，5、每轮碱基数10•DNA的高级结构指DNA双螺旋进一步扭曲盘旋所形成的特定空间结构。
超螺旋结构是DNA高级结构的主要形式（非唯一形式），可分为正超螺旋和负超螺旋两类，它们在不同类型的拓扑异构酶（通过催化DNA链的断裂和结合，从而影响DNA的拓扑状态。
（完整版）分子生物学期末复习.doc
（完整版）分子生物学期末复习.doc第一讲染色体与DNA一染色体（遗传物质的主要载体）1DNA作为遗传物质的优点：储存遗传信息量大；碱基互补，双螺旋结构使遗传稳定；核糖2′ -OH脱氢使在水中稳定性大于RNA；可以突变以进化，方便修复以稳定遗传2真核细胞染色体特点：①分子结构相对稳定；②能够自我复制，使亲子代之间保持连续性；③能够指导蛋白质的合成，从而控制整个生命过程；④能够产生可遗传的变异。
3 染色体蛋白主要分为组蛋白和非组蛋白两类。
真核细胞的染色体中， DNA与组蛋白的质量比约为 1：14组蛋白是染色体的结构蛋白，分为H1、H2A、H2B、H3及H4五种，与DNA共同组成核小体。
组蛋白含有大量的赖氨酸和精氨酸，其中 H3、H4富含精氨酸， H1富含赖氨酸。
H2A、H2B介于两者之间。
5 组蛋白具有如下特性：①进化上的极端保守性（不同种生物组蛋白的氨基酸组成十分相似）②无组织特异性（只有鸟类、鱼类及两栖类红细胞染色体不含H1而带有 H5）③ 肽链上氨基酸分布的不对称性（碱性氨基酸集中分布在N端的半条链上，而大部分疏水基团都分布在C端。
碱性的半条链易与DNA的负电荷区结合，而另外半条链与其他组蛋白、非组蛋白结合）④存在较普遍的修饰作用（如甲基化、乙基化、磷酸化及ADP核糖基化等。
修饰作用只发生在细胞周期的特定时间和组蛋白的特定位点上）二DNA1 真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列2 C值反常现象：①所谓 C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量②同类生物不同种属之间DNA总量变化很大。
从编码每类生物所需的DNA量的最低值看，生物细胞中的C值具有从低等生物到高等生物逐渐增加的趋势。
3 真核细胞DNA序列可被分为3类：①不重复序列（它占DNA 总量的 10%～80%。
不重复序列长约750～ 2 000bp ，相当于一个结构基因的长度）②中度重复序列（各种rRNA、 tRNA以及某些结构基因如组蛋白基因等都属于这一类）③高度重复序列—卫星 DNA（只存在于真核生物中，占基因组的 10%~60%，由 6~100个碱基组成）三染色体与核小体1 染色质 DNA的 Tm值比自由 DNA高，说明在染色质中DNA极可能与蛋白质分子相互作用2 在染色质状态下，由DNA聚合酶和RNA聚合酶催化的DNA 复制和转录活性大大低于在自由DNA 中的反应3 DNA片段均为 200bp基本单位的倍数，核小体是染色质的基本结构单位，由~200 bpDNA和组蛋白八聚体（由 H2A、H2B、 H3、 H4各两个分子生成）组成四级压缩：第一级（DNA+组蛋白→核小体）第二级（核小体→螺线管）第三级（螺线体→超螺旋）第四级（超螺线体→染色体）4 原核生物基因组原核生物的基因组很小，大多只有一条染色体，且 DNA含量少主要是单拷贝基因整个染色体 DNA几乎全部由功能基因与调控序列所组成；几乎每个基因序列都与它所编码的蛋白质序列呈线性对应状态。
《分子生物学》期末试卷及答案(A)
《分子生物学》期末试卷（A）一、术语解释（20分，每题2分）1、cDNA2、操纵子3、启动子4、内含子5、信号肽6、单顺反子mRNA7、顺式作用元件8、复制叉9、密码子的简并性10、转录因子二、选择题（20分）1.指导合成蛋白质的结构基因大多数为: ( ) A.单考贝顺序 B.回文顺序C.高度重复顺序D.中度重复顺序2. 下列有关Shine-Dalgarno顺序(SD-顺序)的叙述中错误的是: ( )A.在mRNA分子的起始密码子上游7-12个核苷酸处的顺序B.在mRNA分子通过SD序列与核糖体大亚基的16s rRNA结合C.SD序列与16s rRNA 3'端的一段富含嘧啶的序列互补D. SD序列是mRNA分子结合核糖体的序列3.原核生物中起始氨基酰-tRNA是: ( )A.fMet-tRNAB.Met-tRNAC.Arg-tRNAD.leu-tRNA4.下列有关TATA盒(Hognessbox)的叙述,哪个是错误的: ( )A. 保守序列为TATAATB.它能和RNA聚合酶紧密结合C. 它参与形成开放转录起始复合体D.它和提供了RNA聚合酶全酶识别的信号5. 一个mRNA的部分顺序和密码的编号是140 141 142 143 144 145 146CAG CUC UAU CGG UAG AAC UGA以此mRNA为模板,经翻译生成多肽链含有的氨基酸为: ( )A.141B.142C.143D.1446. DNA双螺旋结构模型的描述中哪一条不正确：( )A.腺嘌呤的克分子数等于胸腺嘧啶的克分子数B.同种生物体不同组织中的DNA碱基组成极为相似C.DNA双螺旋中碱基对位于外侧D. 维持双螺旋稳定的主要因素是氢键和碱基堆集力。
7． DNA聚合酶III的描述中哪条不对：( )A.需要四种三磷酸脱氧核苷酸作底物B.具有5′→3′外切酶活性C. 具有5′→3′聚合活性D. 是DNA复制中链延长反应中的主导DNA聚合酶8.与mRNA的GCU密码子对应的tRNA的反密码子是: ( )A.CGAB.IGCC.CIGD.CGI9．组蛋白在生理pH条件下的净电荷是：（）A. 正 B . 负 C. 中性 D. 无法确定10．转录需要的原料是( )A. dNTPB. dNDPC. dNMPD. NTP11．DNA模板链为 5’-ATTCAG-3 ’ , 其转录产物是: ( )A. 5 ’ -GACTTA-3 ’B. 5 ’ -CTGAAT-3 ’C. 5 ’ -UAAGUC-3 ’D. 5 ’ -CUGAAU-3 ’12．DNA复制和转录过程有许多相同点,下列描述哪项是错误的? ( )A.转录以DNA一条链为模板,而以DNA两条链为模板进行复制B. 在这两个过程中合成均为5`-3`方向C. 复制的产物通常情况下大于转录的产物D. 两过程均需RNA引物13．下面那一项不属于原核生物mRNA的特征（）A：半衰期短 B：存在多顺反子的形式C：5’端有帽子结构 D：3’端没有或只有较短的多聚A.结构14．真核细胞中的mRNA帽子结构是（）A. 7-甲基鸟嘌呤核苷三磷酸B. 7-甲基尿嘧啶核苷三磷酸C. 7-甲基腺嘌呤核苷三磷酸D. 7-甲基胞嘧啶核苷三磷酸15．下面哪一项是对三元转录复合物的正确描述（）A.σ因子、核心酶和双链DNA在启动子形成的复合物B.全酶、模板DNA和新生RNA形成的复合物C.三个全酶在转录起始点形成的复合物D.σ因子、核心酶和促旋酶形成的复合物16．下列哪组氨基酸只有一个密码子？（）A．苏氨酸、甘氨酸B．脯氨酸、精氨酸C．丝氨酸、亮氨酸D．色氨酸、甲硫氨酸E．天冬氨酸和天冬酰胺17．tRNA分子上结合氨基酸的序列是（）A．CAA-3′B．CCA-3′C．AAC-3′D．ACA-3′E．AAC-3′18．下列关于遗传密码的知识中错误的是（）A．20种氨基酸共有64个密码子B．碱基缺失、插入可致框移突变C．AUG是起始密码D．一个氨基酸可有多达6个密码子19．下列不是蛋白质生物合成中的终止密码是( )。
分子生物学期末复习试题及答案
一、名词解释分子生物学：包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与功能,以及从分子水平研究生命活动RNA组学：RNA组学研究细胞中snmRNAs的种类、结构和功能。
同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下snmRNAs的表达具有时间和空间特异性。
增色效应: DNA变性时其溶液OD260增高的现象。
减色效应： DNA复性时其溶液OD260降低的现象。
Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm）.其大小与G+C含量成正比。
解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance,A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图,所得的曲线称为解链曲线。
DNA复性：在适当条件下,变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。
核酸分子杂交：在DNA变性后的复性过程中,如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温度及离子强度）下,就可以在不同的分子间形成杂化双链，这种现象称为核酸分子杂交。
基因：广义是指原核生物、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位。
狭义指能产生一个特定蛋白质的DNA序列。
断裂基因:不连续的基因称为断裂基因，指基因的编码序列在DNA上不连续排列而被不编码的序列所隔开。
重叠基因：核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因，或称嵌套基因。
致死基因:删除后可导致机体死亡的基因。
基因冗余：由于一基因在个体中有若干份拷贝,当删除其中一个时，个体的表型不发生明显变化.DNA重组:DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合，又称为遗传重组或基因重排.同源重组:发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。
细胞分子生物学复习
绪论1细胞学说的基本内容细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成；每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命,又对与其它细胞共同组成的整体的生命有所助益；新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。
2细胞与分子生物学和现代医药科学关系细胞生物学与分子生物学关系传统的细胞生物学:主要研究细胞和亚细胞器的形态、结构与功能。
分子生物学:从研究各个生物大分子的结构入手但各个分子不能孤立发挥作用，生命绝非组成成分的随意加和或混合，分子生物学还需要进一步研究各生物分子间的高层次组织和相互作用，尤其是细胞整体反应的分子机理，这在某种程度上是向细胞生物学的靠拢，分子细胞学或分子细胞生物学就因此而产生，成为人们认识生命的基础。
细胞与分子生物学和现代医药科学解决医药科学重大前沿课题：基因结构与功能关系疾病发生机制生育控制肿瘤防治脏器移植新药开发细胞的基本概念1概念：细胞有膜包围的能独立繁殖的原生质团。
原生质：构成细胞的基本物质，包括质膜、细胞质或细胞核（或类核）细胞质：质膜以内、细胞核以外的原生质。
包含细胞器、细胞质溶质和细胞骨架2细胞区别于无机界的主要特性：自我装配自我调节自我复制3原核细胞与真核细胞在结构上有何区别？质膜与细胞表面、物质运输概念：细胞膜也称为质膜（plasma membrane），包围在细胞外界的一层界膜，将细胞质与外环境分隔开，使细胞有一个相对独立而稳定的内环境，并通过它与外环境保持密切联系，进行物质和能量交换、信息传导。
细胞外被又称糖萼(glycocalyx) 指细胞质膜外表面覆盖的一层多糖物质，由构成细胞膜的糖蛋白、糖脂等的糖链向外伸展交织而成。
膜下溶胶层位于质膜内侧，富含微丝、微管等细胞骨架，这些细胞骨架直接或间接与细胞膜上的蛋白质相连。
细胞表面由细胞外被、细胞膜和胞质溶胶层三者构成，是保卫在细胞质外层的一个复合结构体系和多功能体系，是细胞与细胞、细胞与外环境相互作用并具有各种复杂功能的部位。
(完整版)分子生物学期末复习题目及答案
①基因：原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位及控制性状的功能单位。
它包括编码蛋白质和RNA的结构基因以及具有调节控制作用的调控基因。
②基因组：含有一个生物体生存、发育、活动和繁殖所需要的全部遗传信息的整套核酸。
即单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。
③C值：真核生物单倍体基因组所包含的全部DNA含量称为该生物的C 值。
用皮克表示（1pg=10-12g, 属于质量单位）④C值矛盾（C值悖理）：C值矛盾指真核生物中DNA含量的反常现象。
即DNA含量与进化复杂性不呈线性关系，表现为：●C值不随着生物的进化程度和复杂性而增加。
●关系密切的生物C值相差很大。
●真核生物DNA的量远大于编码蛋白等物质所需的量。
⑤启动子：是RNA聚合酶识别、结合和启动转录的一段DNA序列，它含有RNApol特异结合和转录起始所需的保守位点，但启动子本身不被转录。
原核启动子分两类：RNApol能直接识别并结合的核心启动子；启动子上游部位，即UP元件，是在RNApol作用时需要的辅因子及其结合的位点。
原核启动子结构有4个保守特征：即转录起始点、-10区、-35区以及-10区和-35区之间的间隔序列－10区（-10box），是DNA解旋酶的重要部位，突变导致解链速率降低。
－35区（Sextama box)，是σ因子识别的重要部位，突变降低了RNA聚合酶的结合速率。
⑥复制叉：在复制起点，已解链形成的单链模板与未解链的双链DNA之间形成的“Y字形”连接区域，称为复制叉。
它是和复制有关的酶和蛋白质组装成复合物和新链合成的部位。
⑦复制眼：原核生物的染色体和质粒都是环状双链分子，复制从Oric(复制起点)开始以顺时针和逆时针双向进行，DNA在复制叉处两条链解开，各自合成其互补链，中间产物形成θ形结构，在电镜下可看到形如眼的结构，即复制眼。
⑧半保留复制：DNA复制时，以亲代DNA的每一条链作为模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，产生的每个子代双链DNA中都含有一条亲代DNA链和一条新合成的互补链，这就是半保留复制。
分子生物学期末复习资料
分子生物学期末复习资料(总22页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--分子生物学期末复习资料检疫1111班考试题型：1、单项选择（1分/题，共50题）；2、多项选择（分/题，共10题）；3、名词解释（2分/题，共5题）；4、问答题（共15分，4题）；5、论述题（共10分，1题）第二章基因与基因组一、基因的概念（一）基因概念的发展1、孟德尔：一个因子决定一种性状。
2、摩尔根：性状单位，突变单位和交换单位。
3、顺反子：功能单位，决定一条多肽链的表达4、操纵子：基因表达调控单元（原核）•结构基因、调节基因（可表达）•控制基因（启动基因和操纵基因）（二）现代基因概念的发展1、重叠基因：一个基因包含或部分包含另一基因2、断裂基因：内部含间隔区，即由外显子和内含子互相间隔组成的嵌合体3、跳跃基因：转座元件，可移动遗传元件4、假基因：拟基因，没有功能，序列与功能基因相似。
（三）基因的分子生物学定义是编码多肽链或RNA的DNA片段，包括编码序列：外显子(exon)、插入序列：内含子(intron)、侧翼序列：含有调控序列（四）基因组基因组：一个细胞或病毒的全部遗传信息二、病毒基因组1、病毒基因组核酸的类型（7种）双链DNA（dsDNA）病毒；单链DNA（ssDNA）病毒；双链RNA（dsRNA）病毒；单链正链RNA病毒；单链正链RNA病毒；逆转录RNA病毒；逆转录DNA病毒2、病毒基因组的特点•一种核酸，DNA/RNA ，线性或环形•大小相差很大；•一般为单拷贝；•一条或几条核酸链；•连续或间隔；•编码序列大于90%；•相关基因往往丛集形成一个功能单位或转录单元；•有重叠基因。
三、原核生物基因组1、原核生物基因组特点（1）一般由一条环状双链DNA分子组成；（2）通常只有一个DNA复制起点；（3）结构基因大多组成操纵子；（4）编码序列不重叠（5）没有内含子（6）编码序列（结构基因）在基因组中所占比例较大，基因密度非常高（非编码—调控序列）（7）结构基因多为单拷贝，rRNA基因为多拷贝；（8）有编码同工酶的同基因（isogene）（9）转座现象：插入序列和转座子等（10）具有多种功能识别区域（往往具有特殊的序列，并且含有反向重复序列。
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1细胞全能性
一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力称之为细胞的全能性。
2细胞连接: 是指细胞间或细胞与细胞基质之间的联系结构
3胚状体离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。
4细胞微管组织中心：是微管进行组装的区域（主要成分γ-微管蛋白）；聚合成环状复合体，参与微管蛋白的核化，帮助α-和β-微管蛋白聚合为微管纤维。
5植物离体器官发生: 是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
6密度抑制: 培养细胞密度增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。
7细胞骨架: 真核细胞内部的蛋白纤维网络结构，参与细胞支撑、物质运输、信号转导等功能。
由微管、微丝和中间纤维所组成
8细胞区别于无机界的最主要的特性：在结构上具有自我装配的能力；在生理活动中具有自我调节的能力；在增殖上具有自我复制的能力。
9质膜的化学组成：脂质，蛋白质，糖类。
10细胞脱分化调控的本质是细胞周期G0期细胞回复到分裂周期的调控过程
11膜脂类型：包括磷脂，胆固醇和糖脂，但主要成分是磷脂
12 细胞与细胞之间的连接形式为粘着带和桥粒。
13膜蛋白与膜脂的结合方式以及在膜中的位置的不同，膜蛋白分为内在蛋白、外周蛋白和脂锚定蛋白。
14细胞连接的类型包括紧密连接、锚定连接、通讯连接。
15限制细胞体积大小的因素有体积同表面积的关系；细胞内关键分子的浓度；酶蛋白质种类的限制
16细胞外基质主要成分结构蛋白蛋白聚糖；黏连蛋白。
17“细胞学说”的基本内容
1.认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成；
2.每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命,又对与
其它细胞共同组成的整体的生命有所助益；3.新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。
18每代细胞的生长过程
潜伏期：对于帖壁型细胞包括游离和贴壁过程。
开始细胞已存活，具有代谢及运动功能，但增殖发生不明显。
以后细胞分裂逐渐增多而进入指数生长期。
指数生长期：又称对数期，此期细胞增殖旺盛，成倍增长，活力最佳。
停止期又称平台期，此期细胞已将其支持物表面占满，细胞活力减弱，已不再进行分裂增殖
19微管的功能
（1）细胞形态的维持（2）细胞内物质的运输(马达蛋白3个家族：驱动蛋白、动力蛋白，肌球蛋白）（3）参与纺锤体和染色体运动（4）构成鞭毛、纤毛，参与细胞运动
20细胞膜的功能
为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境；选择性的物质运输，包括代谢底物的输入与代谢；产物的排除，其中伴随着能量的传递；提供细胞识别位点，并完成细胞内外信息跨膜传递；为多种酶提供结合位点，使酶促反应高效而有序地进行；介导细胞与细胞、细胞与基质之间的连接；质膜参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构。
20体细胞核移植克隆动物的技术程序与意义？
(1) 细胞系的建立：从原代培养到传代培养建立细胞系。
在传代时，每隔几代取一些细胞集落进行染色体分析，检查染色体是否为正常的整倍数。
传代达到一定次数，纽胞形态稳定，正常增殖，说明已经建立稳定的细胞系。
(2) Go期的诱导：取建系的细胞系在含低浓度血清的培养液中培养1～5d。
细胞在低营养培养液中可以被诱离生长周期，进入G。
期。
(3) 卵母细胞去核：应用显微操作法，以去核的显微针管吸去第二次减数分裂中期卵母细胞的第一极体及其下的少许细胞质(其中包括处于中期的纺锤体)。
(4)细胞融合与激活
A: 将供体细胞作为核供体，以显微注射法移入去核的卵母细胞中。
B: 细胞融合：电融合法，具有激活卵母细胞（完成第二次减数分裂）与诱导膜融合的双重作用。
(5) 重组(构)胚的培养
一种方法是体外培养。
一般将重组胚培养在5％C02 95 ％空气气相及合适温度下培养一定时期，大多在胚胎附植前某个时期进行胚胎移植。
另一种方法是用中间受体培养。
在细胞核质融合时，以琼脂包裹胚胎，移入暂时的中间受体。
中间受体可选羊或兔，用其输卵管或子宫保存胚胎。
培养几天后，收集桑椹胚或囊胚，进行形态检查和胚胎移植。
(6) 胚胎移植：将培养后的重组胚移植给同期发情的受体，让胚胎继续发育至产出。
(7) 体细胞核移植后代的鉴定：对于体细胞核移植诞生的后代，既要从形态、性别上鉴定供体细胞与克隆后代的亲缘关系，又要在分子生物学水平鉴定，最后确定后代是否真的来源于供体细胞系细胞。