岛津液相维修培训
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注意点： 更换密封圈
拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （P－SET）
液相色谱容易出问题的部件
故障：堵塞
线路过滤器
现象：系统压力波动大或压 力偏高
流动相
线路过滤器 措施：5％稀硝酸，超声波清
压力传感器
洗
判断依据：关闭排液阀，断
排液阀
开出口管路，设定流速 1mL/min，如压力
>3kgf/cm2，则可能堵塞。
易受到细菌和霉菌的影响
不能直接用有机溶剂冲洗
液相色谱容易出问题的部件
维护流程图
线路过滤器
单向阀
检测器 柱塞密封圈 手动进样器
吸滤头
管线选择
➢ 材料
不锈钢 Teflon
PEEK (聚醚酮) ➢ 尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.
其他问题
分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图
甲醇
乙睛
正己烷
其他问题
溶剂的过滤 滤膜类型：
聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于
水基溶剂。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，
可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶
欢迎参加岛津液相 维修培训班
其他问题
鬼峰的出现
水 / MeOH梯度
ODS 柱
1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins.
鬼峰
其他问题
• 溶剂的等级 – HPLC级 – 优级纯 – 分析纯
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质
样品处理
1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠
近溶剂峰时由为重要 -- 保证样品在流动相中的溶解度，
避免样品在系统中尤其在柱中产生 沉淀
其他问题
缓冲液
选择缓冲液的步骤
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液
（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和
LC-10ADvp泵：并联式 往复泵
液相色谱容易出问题的部件
单向阀结构
宝石球 抛光面
透明塑料垫片 流动相
单向阀原理
吸液冲程
排液冲程
出口单向阀
泵头 进口单向阀
液相色谱容易出问题的部件
单向阀 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，
使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，
柠檬酸的缓冲液）
其他问题
一些代表性弱酸的pKa
醋酸 柠檬酸 磷酸
pK1 4.87 3.13 2.16
pK2
4.76 7.2 1
pK3
6.40 12.32
缓冲液的使用
使用前必须过滤
使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损
、阻塞: 用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇
冲洗30min
用超声波清洗
液相色谱容易出问题的部件
单向阀 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超
声波清洗
液相色谱容易出问题的部件
柱塞密封圈
密封圈
柱塞杆 泵头清洗管路 流动相
故障：密封圈磨损而导致 密封不良
现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封 圈
– 化学惰性大 – 能承受 5 kgf/cm2 压力
液相色谱容易出问题的部件
吸滤头 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断
液相色谱容易出问题的部件
LC-10ATvp泵：串联 式往复泵
混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色 谱柱中。 梯度洗脱：
优点： 可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测
量和提高分离精度
梯度洗脱法的注意点
溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检
测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使 用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折 光检测器） 查看空白实验的数据。 遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）
其他问题
脱气的方法
1. 超声波脱气法 2. He清除法 3. 使用氟树脂膜的减压脱气法
其他问题
He清除法
来自百度文库
调压阀 排气阀
往送液泵
流动相 过滤器
其他问题
使用氟树脂膜的减压脱气法
氟树脂膜 真空室 往送液泵
流动相
控制器
真空泵
梯度洗脱法
梯度洗脱装置： 高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）
管线材料
• 不锈钢 (可用于所有连接)
– 能承受几千 kg/cm2 压力 – 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
• PEEK (可用于所有连接)
– 能承受高达 250 kg/cm2压力 – 可在整个PH范围(pH 1-14)内使用 – 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
• Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管)
性样品和有机溶剂
其他问题
脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和 峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
其他问题
脱气的目的
1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量
的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用
交叉污染的原因
手动进样法
液相色谱容易出问题的部件
进样器
• 自动进样器 • 手动进样器 • 原理：（六通阀） • 注入方式： • 1）全量注入 • 2）部分注入
液相色谱容易出问题的部件
进样量和检测器响应的关系示意图
检
测 器 部分注入
响
应
定量环体积的一半
值
全量注入 3倍定量环体积
进样体积
手动进样器的原理图
装填状态
进样状态
拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （P－SET）
液相色谱容易出问题的部件
故障：堵塞
线路过滤器
现象：系统压力波动大或压 力偏高
流动相
线路过滤器 措施：5％稀硝酸，超声波清
压力传感器
洗
判断依据：关闭排液阀，断
排液阀
开出口管路，设定流速 1mL/min，如压力
>3kgf/cm2，则可能堵塞。
易受到细菌和霉菌的影响
不能直接用有机溶剂冲洗
液相色谱容易出问题的部件
维护流程图
线路过滤器
单向阀
检测器 柱塞密封圈 手动进样器
吸滤头
管线选择
➢ 材料
不锈钢 Teflon
PEEK (聚醚酮) ➢ 尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.
其他问题
分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图
甲醇
乙睛
正己烷
其他问题
溶剂的过滤 滤膜类型：
聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于
水基溶剂。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，
可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶
欢迎参加岛津液相 维修培训班
其他问题
鬼峰的出现
水 / MeOH梯度
ODS 柱
1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins.
鬼峰
其他问题
• 溶剂的等级 – HPLC级 – 优级纯 – 分析纯
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质
样品处理
1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠
近溶剂峰时由为重要 -- 保证样品在流动相中的溶解度，
避免样品在系统中尤其在柱中产生 沉淀
其他问题
缓冲液
选择缓冲液的步骤
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液
（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和
LC-10ADvp泵：并联式 往复泵
液相色谱容易出问题的部件
单向阀结构
宝石球 抛光面
透明塑料垫片 流动相
单向阀原理
吸液冲程
排液冲程
出口单向阀
泵头 进口单向阀
液相色谱容易出问题的部件
单向阀 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，
使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，
柠檬酸的缓冲液）
其他问题
一些代表性弱酸的pKa
醋酸 柠檬酸 磷酸
pK1 4.87 3.13 2.16
pK2
4.76 7.2 1
pK3
6.40 12.32
缓冲液的使用
使用前必须过滤
使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损
、阻塞: 用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇
冲洗30min
用超声波清洗
液相色谱容易出问题的部件
单向阀 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超
声波清洗
液相色谱容易出问题的部件
柱塞密封圈
密封圈
柱塞杆 泵头清洗管路 流动相
故障：密封圈磨损而导致 密封不良
现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封 圈
– 化学惰性大 – 能承受 5 kgf/cm2 压力
液相色谱容易出问题的部件
吸滤头 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断
液相色谱容易出问题的部件
LC-10ATvp泵：串联 式往复泵
混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色 谱柱中。 梯度洗脱：
优点： 可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测
量和提高分离精度
梯度洗脱法的注意点
溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检
测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使 用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折 光检测器） 查看空白实验的数据。 遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）
其他问题
脱气的方法
1. 超声波脱气法 2. He清除法 3. 使用氟树脂膜的减压脱气法
其他问题
He清除法
来自百度文库
调压阀 排气阀
往送液泵
流动相 过滤器
其他问题
使用氟树脂膜的减压脱气法
氟树脂膜 真空室 往送液泵
流动相
控制器
真空泵
梯度洗脱法
梯度洗脱装置： 高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）
管线材料
• 不锈钢 (可用于所有连接)
– 能承受几千 kg/cm2 压力 – 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
• PEEK (可用于所有连接)
– 能承受高达 250 kg/cm2压力 – 可在整个PH范围(pH 1-14)内使用 – 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
• Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管)
性样品和有机溶剂
其他问题
脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和 峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
其他问题
脱气的目的
1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量
的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用
交叉污染的原因
手动进样法
液相色谱容易出问题的部件
进样器
• 自动进样器 • 手动进样器 • 原理：（六通阀） • 注入方式： • 1）全量注入 • 2）部分注入
液相色谱容易出问题的部件
进样量和检测器响应的关系示意图
检
测 器 部分注入
响
应
定量环体积的一半
值
全量注入 3倍定量环体积
进样体积
手动进样器的原理图
装填状态
进样状态