岛津液相色谱仪维护教材
岛津液相色谱仪教材
基础知识讲解内容
1、色谱基础知识 2、硬件基础知识 3、定量基础知识 4、维护基础知识
第一部分 色谱基础知识
色谱起源
石油醚
色素混合物 碳酸钙颗粒
色谱 分离组分
色谱发展史
20世纪初，俄国植物学家M.S. Tswett提出经典液相色谱法； 20-30年代，柱分配色谱和纸色谱； 50年代，气相色谱，薄层色谱； 60年代，凝胶渗透色谱及高效液相色谱； 70年代，高效毛细管气相色谱法； 80年代，电色谱； 90年代，光色谱。
滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水 基溶剂。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶 液，可以用于强酸，不适用于 DMF，THF， CHCl3 等溶剂。
再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样 品和有机溶剂。
溶剂前处理-脱气
脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
毛细管电泳
Capillary Electrophoresis (CE)
HPLC vs GC
液相色谱：
以液体作为流动相的色谱分离方法
适用于高沸点、大分子、强极性 和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择 性分离的双重作用
气相色谱：
以气体作为流动相的色谱分离方法
适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子 化合物的分析 流动相只起运载样品分子的能力
在售产品
岛津HPLC的历史
1997
THECNLOGY BREAKTHROUGH
Flexible HPLC System with Micro-stroke Volume Solvent Delivery Unit
LC-VP
岛津LC-10AD型高效液相色谱仪操作与维护保养规程
岛津LC-10AD型高效液相色谱仪标准操作与维护保养规程目的：制定岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的标准操作与维护保养规程范围：适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的操作职责：QC检验员对本规程实施负责规程1 操作前的准备：1.1 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
对规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45μm的滤膜滤过，用前必须脱气。
应配制足量的流动相及时待用。
1.2 供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成试溶液。
定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm的滤膜滤过。
必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色变系统产生污染。
1.3 检查上次使用记录和仪器状态：检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否相应适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。
2 操作须知2.1 泵的操作：2.1.1 用流动相冲洗吸滤器，再把吸滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排液阀，用专用注射器从阀口抽出流动相，再用冲洗键A泵、B泵废液出口处流动相无气泡溢出并呈连续液流后，才停止冲洗，并关闭排放阀。
此过程可能需重复几次，视具体情况而定。
直至无气泡溢出。
2.1.2 将流速逐渐调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。
初始平衡时间一般约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化比例的流动相对色谱柱进行平衡。
2.2 紫外可见光检测器与色谱工作站的操作。
2.2.1 开启检测器电源开关，机器自检合格后。
选择光源(氘灯或钨灯)，选定检测波长，待稳定后，设置吸收度方式和检测响应时间(一般不大于1秒)，设置满刻度吸收值(适用于色谱工作站)。
岛津液相色谱仪操作维护清洁规程
1.目的依据厂家指导说明书及仪器资料建立仪器操作规程，详细规定了岛津液相色谱仪的使用方法，以及仪器设备的维护、保养和卫生清洁，确保仪器不受损坏，检测稳定性好，正常运行。
2.适用范围本规程适用于岛津液相色谱仪的操作、维护、保养和卫生清洁。
3.职责由质检部检测人员负责。
4.相应记录表格《仪器使用清洁记录》《仪器维护保养记录》5. 仪器：岛津液相色谱仪（岛津SPD-10A）6. 用途：检测物质组分及含量检测7.环境要求7..1 稳定无震动的安放位置。
7.2 避免阳光直射，强烈的温度变化，电磁干扰。
8.系统组成：本系统由输送系统（高压输液泵）、手动进样器、紫外检测器、色谱工作站/电脑等组成。
9.程序9.1 准备流动相9.1.1流动相配置：按产品需要配置9.1.2 抽滤将抽滤瓶连接好并放上滤膜，将娃哈哈水倒入最上层开口瓶中，启动泵的按钮即开始抽滤，抽滤一半时将电源关掉（防止抽滤时间过长将滤膜抽破，以免达不到过滤的效果），让水慢慢流入接收瓶内。
抽滤两遍，用蓝盖瓶装好，即过滤完，加入少许乙腈（占总体积10%）即可。
磷酸盐缓冲液同以上方法抽滤即可。
新倒出来的乙腈与甲醇不用过滤，按需要量直接倒入蓝盖瓶内即可。
若乙腈或甲醇是头一天剩下的第二天再用时需过滤，方法同上。
（水相与磷酸盐缓冲溶液时用0.22UM的水系滤膜（蓝色盒装），抽滤有机相时用0.22UM的有机滤膜（红色盒装））抽滤流动相的多少根据当天的检测量来定。
9.1.3 超声将已抽滤好的流动相（水相，磷酸盐缓冲液，乙腈，甲醇）置超声波清洗仪上超声20分钟，超声完后，将流动相至仪器顶端的流动相盒内，换下头一天的流动相，A管路放在水相瓶子内，B管路放在乙腈瓶子内，准备开机。
9.2.开机液相色谱仪由四个模块组成（即柱温箱、检测器、单元泵），分别按启每个模块电源使之在开机状态，打开电脑，使色谱仪与电脑连接。
在电脑桌面双击2000工作站图标，此时打开一个工作界面，点击文件下的调用已设定好方法，即打开在线工作界面。
岛津液相色谱仪维护教材1 PPT
0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.
管线材料
不锈钢 (可用于所有连接) 能承受几千 kgf/cm2 压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
岛津液相色谱仪维护教材1
第一部分
液相色谱故障排除经验 液相色谱常见问题
液相色谱简易流程图
溶剂
进样器 输液泵
色谱柱 柱温箱
检测器 废液
数据处理
1
储液瓶
2
脱气机
3
泵单元
4 手动进样器
5
色谱柱
6
检测器
7
废液瓶
1.等度系统
2.低压梯度系统
1
储液瓶
2
脱气机
3
低压梯度单元
4
泵单元
5
混合器
6
自动进样器
7
色谱柱
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可
日常保养
-做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率 -做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命
常做的保养 —保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘） —泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不要长期 保存在泵里） —进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路 —尽量进行样品前处理 —色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命 —系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所 有部分全部更换为70％以上的甲醇，避免细菌的滋生及 盐的析出。
PEEK (可用于所有连接) 能承受高达 250 kgf/cm2压力 可在整个pH范围(pH 1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
岛津液相色谱仪教材课件
分离条件优化
根据复杂样品的性质，调 整色谱条件，如流动相组 成、流速、进样量等，实 现样品的最佳分离。
多组分分析
采用多维色谱技术，对复 杂样品中的多个组分进行 分离和检测，提高分析效 率。
instrument性能验证与评价
准确度。
应用领域拓展
环境监测
利用岛津液相色谱仪对环境中的有机污染物进行 定性和定量分析，为环境保护提供有力支持。
食品安全
应用于食品中农药残留、添加剂、毒素等有害物 质的检测，保障食品安全。
生物医药
用于药物代谢、生物标志物分析以及蛋白质、核 酸等生物大分子的分离分析。
仪器发展趋势
便携化
开发小型化、便携式的岛津液相色谱仪，方便现场快速检测和应 急响应。
04
药物分析
用于药物的分离、纯化和含量 测定，为药物研发和质量控制
提供有力支持。
食品安全
用于食品中农药残留、添加剂 、有害物质的检测，保障食品
安全。
环境监测
用于水体、土壤、空气等环境 样品中有机污染物的检测，为
环境监测提供数据支持。
生命科学
应用于生物样品中蛋白质、核 酸等大分子的分离分析，推动
生命科学研究。
与质谱仪的比较
质谱仪和液相色谱仪在样品处理和检测原理上存在较大差异。质谱仪主要通过将 样品离子化后，根据离子的质量荷比进行分离和检测，适用于对样品进行定性和 结构分析。而岛津液相色谱仪则主要用于样品的分离和定量分析。
尽管质谱仪在定性分析方面具有优势，但在定量分析方面，岛津液相色谱仪具有 更高的灵敏度和准确性。此外，岛津液相色谱仪可以与质谱仪联用，实现样品的 分离、定量和定性分析，提高了分析的全面性和可靠性。
岛津液相色谱仪维护培训
感谢您对我们工作的一贯支持!1岛津广州分析中心詹松TEL:020-******** FAX:O2O-36315208客服热线: 800-810-0439400-650-0439 E-mail: skczs@htty://2岛津液相色谱仪-维护培训岛津国际贸易（上海）有限公司分析中心3¾做好仪器日常的维护---可以有效地降低故障的发生率¾做好仪器日常的保养---可以降低仪器的使用成本¾做好仪器日常的呵护---可以延长仪器的使用寿命45液相色谱系统维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器色谱柱管线选择¾材料不锈钢TeflonPEEK (聚醚醚酮)¾尺寸0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D.0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D.0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D.0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.6管线材料¾不锈钢(可用于所有连接)–能承受几千kgf/cm2压力–酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)¾PEEK (可用于所有连接)–能承受高达250 kgf/cm2压力–可在整个PH范围(pH 1-14)内使用–不适用于高溶解性溶剂如氯仿等¾Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管)–化学惰性大–能承受5 kgf/cm2压力78死体积•死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题.管线公螺母死体积好的连接差的连接吸滤头材料：不锈钢烧结(或陶瓷），孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成。
措施：用异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗。
或按以下的顺序清洗：水→异丙醇→水→5%～10%硝酸溶液→水9LC-20ATLC-20AT10LC-20AD11单向阀结构注意：请不要分解阀心A和阀心B重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定12故障：宝石球或球座受污染导致密封不好。
高效液相色谱仪操作规程-岛津
1技术参数LC-20AT低压梯度泵梯度方式：低压混合混合溶剂数：4液混合浓度准确度：1%以下SIL-20AC自动进样器：进样量：0.1 L~100^L进样量准确度：1%以下进样量精密度：RSD: 0.3%以下（10mL进样时指定条件下）2适用范围适用于药物的分离、定性、定量分析3操作步骤3.1仪器组成：由DGU-20A5脱气机、LC-20AT低压梯度泵、SIL-20AC自动进样器、CTO-20A 柱温箱、SPD-20A 紫外-可见检测器、RF-20A荧光检测器、CBM-20A系统控制器、LC Solution 工作站等组成。
3.2开机①在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标样及样品。
流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。
②接通电源，依次开启A泵、B泵、柱温箱、自动进样器、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。
③泵排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针90度以上），按Purge键，泵开始排空运行。
检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按Purge键停止排空。
自动进样器排气操作：按Purge键，自动进样器开始排气，系统默认排气时间为25min, 且自动进样器排气过程中可同时进行其他操作。
（除进样外）压力调零：按LC-20ATvp泵Func键选择CONTRO项，按FUN（键直至屏幕显示***ml ZEROADJ项，按Enter键，再按CE键，即完成调零。
然后关紧排空阀（顺时针旋紧）。
④再双击Operation € Analysis 1~4进入实时分析窗口：（根据不同的检测器选择）在开机画面中，User ID选中Admin,不需输入Password,点击OK（可听到峰鸣一声）衣在下面操作中A€ B表示在A菜单下选择B,以此类推。
选中□表示在□中打V号。
3.3参数设置①在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即可：（可以跳过执行）•System configuration 系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）•System Check编辑仪器检查参数：并且RUN运行检查。
29 岛津LC-2030C3DPlus型高效液相色谱仪使用、维护保养操作规程(01)
11 操作规程岛津LC-2030C3DPlus型高效液相色谱仪使用、维护保养操作规程一、目的建立岛津LC-2030C3DPlus型高效液相色谱的标准操作，规范仪器的使用，维护及清洁操作，确保仪器的正确使用及维护保养。
二、适用范围本规程适用于岛津LC-2030C3DPlus型高效液相色谱仪的使用及维护清洁。
三、内容1.责任人：QC主管、QC人员2.规程2.1.仪器组成及电源2.1.1. 仪器组成本仪器由LC-2030Plus主机、电脑、打印机组成。
其中主机配置包括：低压四元梯度输液泵、在线脱气机、自动进样器、UV检测器、柱温箱、LabSolutions色谱数据工作站。
2.2.原理储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱固定相内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
2.3.技术参数流量设定范围0.0001～10 mL/min 流速精度±1% 或±2µL/min 最大操作压力44MPa 进样数216个样品外形尺寸mm 410×500×605mm 波长重现性±0.1nm 温控精度±0.1℃波长范围190～700nm噪声±2.5×10-6AU 漂移100×10-6AU/h 2.4操作方法2.4.1 使用前的准备工作2.4.1.1色谱柱观察色谱柱的型号是否与待测产品标准要求柱子型号相符合，如不符合应更换成与待测产品标准规定的色谱柱（更换时注意方向）。
2.4.1.2.流动相的配制按照待检物料检验标准规定的流动相要求，配制流动相，配制时应注意以下事项：。
2.2.3. 用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行检查。
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精品课件
液相色谱常见问题
压力异常（偏高、波动） 漏液 保留时间漂移 基线问题（漂移、噪声） 峰形异常
精品课件
压力
压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注压力的变化。 保留时间的变化经常是由于压力问题引起的。 不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力也是不同的。 记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的 压力显示值。
硬件问题： —输液泵 —进样器 —检测器
精品课件
日常保养
-做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率 -做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命
常做的保养 —保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘） —泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不要长期 保存在泵里） —进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路 —尽量进行样品前处理 —色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命 —系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所 有部分全部更换为70％以上的甲醇，避免细菌的滋生及 盐的析出。
材料
不锈钢 Teflon PEEK (聚醚醚酮)
尺寸
0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.
精品课件
管线材料
不锈钢 (可用于所有连接) 能承受几千 kgf/cm2 压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
基线漂移
流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂) 温度波动 系统平衡时间不够 流通池被污染或有气泡 流通池窗口破裂
精品课件
死体积太大
峰形问题
柱子被污染或堵塞
色谱柱塌陷
色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应或重金属污染）
流动相缓冲不足或不合适
样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大
• 当不能确认故障原因时 —采用排除法逐一考察可能引起故障的因素
• 确定故障能否自行处理 —不要贸然拆卸不熟悉的部件
精品课件
常见故障因素
仪器环境： —实验室的温度、湿度、酸度等 —实验室震动、灰尘等问题 —电源及地线问题
使用条件： —流动相（pH值、均匀度、气泡等） —样品（样品分解、氧化、样品溶剂等） —色谱柱（污染、堵塞、塌陷等）
PEEK (可用于所有连接) 能承受高达 250 kgf/cm2压力 可在整个pH范围(pH 1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大 能承受 5 kgf/cm2 压力
精品课件
接头
不锈钢接头 / 垫圈 主要用于输液泵、进样器的连接 能承受 400 kgf/cm2压力 一旦固定，垫圈不可再动
1
储液瓶
2
脱气机
3
低压梯度单元
4
泵单元
5
混合器
6
自动进样器
7
色谱柱
8
检测器
9
废液瓶
精品课件
3.高压梯度系统
1
储液瓶
2
脱气机
3
泵单元
4
混合器
5
自动进样器
6
色谱柱
7
检测器
8
废液瓶
精品课件
液相色谱故障排除经验
• 故障的确定 —至少要重复出现两次以上
• 初步判断故障引起的原因 —方法或硬件
• 由经验或平时的积累确定故障原因 —平时做好观察和记录
岛津液相色谱仪维护教材
岛津企业管理（中国）有限公司 分析中心
第一部分 液相色谱故障排除经验 液相色谱常见问题
精品课件
液相色谱简易流程图
溶剂
进样器 输液泵
色谱柱 柱温箱
检测器 废液
数据处理
精品课件
1
储液瓶
2
脱气机
3
泵单元
4 手动进样器
5
色谱柱
6
检测器
7
废液瓶
1.等度系统
精品课件
2.低压梯度系统
手动进样器：转子密封圈磨损 检测器： 流通池窗口（垫片损坏、透镜破碎） 接头处漏液：（接头松动，接头脏，接头磨损，部件不匹配）
精品课件
保留时间不稳定
吸滤头脏 泵输液不正常（压力波动、气泡等） 流动相组分变化 流动相缓冲能力不够 色谱柱平衡时间不够 柱温的变化 柱子问题
精品课件
噪音大
流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 漏液 流动相、泵、检测器流通池内有气泡 流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 检测池能量不足 流通池被污染 温度影响（检测器和柱温差别太大） 其他电子设备的影响或电精源品、课件地线等
PEEK接头 主要用于色谱柱、检测器的连接 易于安装 能承受 250 kgf/cm2压力 容易产生死体积
精品课件
垫圈 不锈钢接头
PEEK接头
死体积
死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题. 公螺母 死体积
好的连接
管线
精品课件
差的连接
流动相
选择原则 1、采用 “HPLC” 级溶剂 2、避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 3、对试样有适宜的溶解度 4、溶剂粘度要小 5、与检测器相匹配
精品课件
压力高
首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞 色谱柱堵时，确认可能造成堵塞的样品的性质，相应选择 合适的清洗溶剂。 系统堵塞，首先应确认是哪一部份堵塞，依据情况由后向 前进行排除。
精品课件
容易发生堵塞的部件
➢ 保护柱及色谱柱 ➢ 线路过滤器 ➢ 混合器过滤组件 ➢ 管路连接处 ➢ 进样器 ➢ 检测器流通池
精品课件
溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯
流动相
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45 μm过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒） 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.22 μm过滤,且除去有紫外吸收的杂质
精品课件
流动相
鬼峰的出现
鬼峰
水 / 甲醇梯度 ODS 柱
样品过载（浓度或体积）柱温过低精品课件鬼峰流动相被污染 进样阀残余峰 样品中未知物 色谱柱中的污染物
精品课件
第二部分 日常使用注意点 硬件基础知识 容易出故障的部件及常见故障的排除
精品课件
液相系统维护流程图
线路过滤器
单向阀
柱塞密封圈
吸滤头
色谱柱
检测器
手动进样器
精品课件
一、输液部分
精品课件
管线选择
精品课件
压力低
如果压力为零： 泵头中没有液体，充满气泡 单向阀完全堵死 柱塞杆折断 压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)
如果有压力但是压力比正常时低： 漏液 单向阀堵塞
精品课件
压力波动
压力在短时间内剧烈波动。 泵头中有气泡 单向阀脏 柱塞密封圈漏液
精品课件
经常漏液的部件
泵： 柱塞密封圈 排液阀