赤霉素检测方法
反向电渗流非水毛细管电泳法快速测定微量赤霉素
反向电渗流非水毛细管电泳法快速测定微量赤霉素郭振朋;王晓瑜;陈义【摘要】A non⁃aqueous capillary electrophoresis ( NACE) method for the rapid determination of micro gibberellins (GAs) was established. Dynamically poly(ethylene oxide) coated capillary was used, and electroosmotic flow ( EOF ) was reversed by using positive ions and adjusted by regulation the types and concentrations of the positive ions, running buffer, and pH of the buffer. With a buffer of 95% ( v/v ) methanol containing 10 mmol/L ammonium acetate at an acidity of 0�08% ( v/v) acetic acid, the EOF was successfully reversed to separate the eight GAs in less than 10 min. Its applicability was validated by the determination of GAs in germinating wheat seeds, with relative standard deviations ( RSDs) ≤2�1% ( intra⁃day) or ≤4�3% ( inter⁃day) for migration times, and RSDs≤4�5% ( intra⁃day) or≤6�9% ( inter⁃day) for peak areas. The limits of detection ( S/N=3) were in the range of 1�10-2�20 mg/L, with correlation coeffi⁃cients ( r2 ) of 0�998 2-0�999 3. The recoveries of the spiked samples were between 87�2% and 93�5%. The established method is simple, rapid, stable, and compatible with mass spectrome⁃try, so it is valuable to be further studied.%赤霉素是一类重要的植物激素，是结构相似的弱酸性二萜类化合物。
赤霉素(GA)的生物测定技术
二、大麦胚乳试法
实验步骤： 实验步骤：
1.溶液配制 1.溶液配制 2.选籽粒饱满大小一致的大麦种子50粒 选籽粒饱满大小一致的大麦种子50 2.选籽粒饱满大小一致的大麦种子50粒 3.淀粉酶活力测定 3.淀粉酶活力测定
二、大麦胚乳试法 优点：
① α-淀粉酶的释放是和赤霉素原初作用位点 淀粉酶的释放是和赤霉素原初作用位点 关系较为密切的步骤之一 ②α-淀粉酶的释放不受溶剂中杂质的影响， 淀粉酶的释放不受溶剂中杂质的影响， 淀粉酶的释放不受溶剂中杂质的影响 而且对赤霉素是极其专一的 ③α-淀粉酶的释放不受植物天然提取物中其 淀粉酶的释放不受植物天然提取物中其 他非赤霉素类物质的影响
第二节 赤霉素（GA）的生物 测定计术
赤霉素促进结实
/AMuseum/agricul/2_2_14_zhiwyycms.html
赤霉素促进器官伸长
/AMuseum/agricul/2_2_14_zhiwyycms.html二、大麦胚乳试法源自大麦胚乳法测定赤霉素的标准曲线
三.矮生玉米叶鞘法
矮生玉米生长与GA3浓度的关系曲线
-13 3*10 mol/L -13
-12 3*10 mol/L
-12
-11 10 mol/L
-11
-12 3*10 mol/L
-12
-9 3*10 mol/L
-9
3*10-10mol/L
-10
第二节 赤霉素（GA）的生物测 定技术
水稻幼苗叶鞘伸长“点滴” 一、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法 二、大麦胚乳试法 三、矮生玉米叶鞘法
第二步
第
步
% 第一 •
芽
第
步
恒温光照培养3d, 恒温光照培养3d, 长
高效液相色谱法分离和测定小麦中的5种内源激素
高效液相色谱法分离和测定小麦中的5种内源激素张玉琼;仲延龙;高翠云;董召荣;陈娜;王梅方【摘要】A high performance liquid chromatographic (HPLC) method was developed to determine the five endogenous hormones including indole-3-acetic acid (IAA),abscisic acid (ABA),gibberellic acid (GA3),zeatin (ZT) and salicylic acid (SA) in wheat.The separation conditions were optimized,and methanol was chosen as the extraction solvent.Then the extract was extracted by petroleum ether and ethyl acetate,and purified with the Sep-Pak C18 column.The chromatographic conditions were as follows:Eclipse XDB-C18 reversed phase column (250 mm ×4.6 mm,5 μm),the flow rate of 1 mL/min,the injection volume of 10 μL,and the detection wavelength of 240 nm were used for the separation of SA from 14.5 min to 18 min,while the detection at 254 nm used for the separation of the others.Methanol (A) and acetic acid aqueous solution (pH 3.6) (B) were used as the mobile phases with the linear gradient set as follows:0-7 min 20％ A,7-10 min 20％A-28％ A,10-17 min 28％ A,17-19min 28％ A-40％ A,19-35 min 40％ A.The results showed that:the hormones were separated well with the recoveries of 96.9％-98％,and the RSDs were in the range of 1.54％ to 2.29％.It is a reliable method for rapid,accurate separation and determination of the endogenous hormones in wheat.%建立了高效液相色谱法(HPLC)用于分离和测定小麦中的吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)、玉米素(ZT)和水杨酸(SA)5种植物内源激素.经过条件优化,选用甲醇作为样品提取溶剂.然后,经石油醚和乙酸乙酯萃取,经Sep-Pak C18小柱纯化.液相色谱的分离采用Eclipse XDB-C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)反相色谱柱；流速为1 mL/min；进样量10μL.检测器波长设置为254 nm; 14.5 min时切换到240 nm; SA洗脱后即18min时切换回254 nm.流动相A为甲醇,B为乙酸溶液(pH 3.6).梯度条件为0～7 min,20％A；7～10 min,20％A～ 28％A；10～17 min,28％A；17 ～ 19 min,28％ A～40％ A; 19 ～35 min,40％A.结果表明,小麦中各激素的分离效果理想,加标回收率达96.9％～ 98％,相对标准偏差在1.54％～ 2.29％之间.因此,该方法的建立为快速、准确地分离和测定小麦内源激素提供了可靠的方法.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)008【总页数】4页(P800-803)【关键词】高效液相色谱法;内源激素;小麦【作者】张玉琼;仲延龙;高翠云;董召荣;陈娜;王梅方【作者单位】安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036;安徽农业大学农学院,安徽合肥230036;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥230036【正文语种】中文【中图分类】O658植物激素对植物的种子萌发、生长、开花、成熟、衰老、休眠等生命活动起直接或间接的调节、控制作用［1，2］。
植物赤霉素(GA)说明书
植物赤霉素(GA)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中赤霉素(GA)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物赤霉素(GA)水平。
用纯化的植物赤霉素(GA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物赤霉素(GA)，再与HRP 标记的赤霉素(GA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的赤霉素(GA)呈正相关。
用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物赤霉素(GA)浓度。
试剂盒组成：标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl 弃掉，再各取50µl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各1取50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl 弃掉。
植物激素的检测方法
比色谱法是最早应用于生长 素分析的光谱法，但由于该法选 择性差，现很少被应用。荧光分 析法是进行痕量、超痕量甚至分 子水平上分析的重要手段，它具 有选择性好、取样少、灵敏度高 以及简便快速等优点，近年来在 植物激素分析中得到广泛应用。
电化学分析法
电化学分析法相对于气相色谱(GC)、液相色 谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、免疫法等分析方法具 有简单、方便和仪器价廉等特点. 在早期的研究中, 植物激素的电化学分析方法主要是针对脱落酸、赤 霉素、玉米素和激动素等植物激素标准品的电化学 行为进行探讨. 通过研究发现, 植物激素存在的本底 溶液的性质和pH 对测定结果会产生很大影响。
色谱法和光谱法
色谱法
光谱法
色谱学是利用物质在不同介质中的 分配原理进行测定的, 包括纸上层析、薄 层层析( TLC)、气相色谱( GC)、高效相 色谱( HPLC) 以及气质联用( GC-M S) 等, 将分离和测定结合起来是色谱法的基本 特点。根据色谱学理论, 某种化合物在一 定色谱条件下的出峰时间(保留时间) 是 固定的, 这是色谱学定性的依据； 而色 谱峰面积(或峰高) 与物质的含量(或总量) 成正比, 这是色谱学定量的基础。
植物激素 的 检测方法
目录
CONTENTS
01
02
03
04
植物 激素 定义
植物 激素 分类
植物 激素 检测 方法
参考 文献
1
植物激素的定义
植物激素的定义
天然植物激素或内源性植物激素, 是植 物自身代谢产生的一类具有高度生物活 性的有机小分子化合物. 它们一般先在 植物的某一部位合成, 然后再转运到其 他部位去发挥作用。植物激素虽是小分 子, 却调控着几乎整个植物生命周期, 如 种子萌发、茎叶伸长、果实成熟以及脱 落等生理过程。植物激素还能感应植物 所处生存环境的外界刺激, 如水分、光 照、温度和损伤等, 并作出相应的反应。
豆芽中三种常见激素的高效液相色谱检测法
第 2期 彭 姝等 :豆芽中三种常见激素的高效液相色谱检测法
97
钠溶液 (0101 mol/L )作为提取剂 。将 2, 4 - D 转 化为钠盐 ,溶于水中 ,高速离心分离 ,上清液用磷 酸调 pH至 215,将钠盐还原成弱酸 2, 4 - D ,此时 2, 4 - D 从水相中析出 。有报道称可利用二氯甲 烷液 - 液萃取 ,但实际操作中发现该法乳化现象 比较严重 ,回收率不高 。故考虑先用蛋白沉淀剂 处理 ,后再通过液 - 液萃取提取 2, 4 - D ,提取度 比较高 ,但是多次萃取操作繁琐 、试剂消耗量大 。 而用 ODS - C18 SPE柱萃取 ,用水淋洗后再用流 动相洗脱 ,不仅具有较理想的净化效果和回收率 , 而且试剂消耗少 ,操作简单 、快捷 。2, 4 - D 为有 机弱酸 ,所以流动相体系应为酸性 ,以 pH 310为 佳 ,试用了冰乙酸和磷酸 ,结果冰乙酸对基线影响 较大 ,噪声较多 ,而磷酸较理想 。
酸化甲醇溶液 :每 100 m l甲醇 +水 ( 60 + 40, V /V )中加入乙酸 50μl,混匀 。
固相萃取小柱 : ODS - C18 SPE柱 ,用时先经 10 m l甲醇洗脱活化 ,再用 10 m l水洗去残留甲 醇 ,保持萃取柱湿润状态待用 。 21212 色谱条件 检测器 :紫外检测器 ;色谱柱 : kromasil C18 ( 25010 mm ×416 mm ×5 μm ) ; 柱 温 : 35℃;检测波长 : 267 nm;流动相 :甲醇 + 115% 磷酸溶液 (40 + 60) ;流速 : 110 m l/m in;进样量 : 10 μl。 21213 样品前处理方法 称取捣碎混匀的豆芽
植物激素检测方法
植物激素检测⽅法植物激素是植物体内合成的⽤于调控植物⽣成发育的⼩分⼦化合物。
⽬前，被公认的植物激素有6⼤类：细胞分裂素类（CK）、⾚霉素类（GAs）、⽣长素类（Auxins）、脱落酸类（ABA）、⼄烯和油菜素甾醇类（BRs）。
以下介绍⼏种常⽤的植物激素检测⽅法。
1. ⽣物检测法利⽤植物激素作⽤于植物组织或离体器官后产⽣的特异性反应，从⽽间接对植物激素的含量进⾏检测。
然⽽，不同结构的⾚霉素、⽣长素或激动素对不同⽣物检测法的响应有差异，因此有时可能⽆法测出。
由于⽣物检测法可以检测植物激素的活性，常⽤于植物激素的定性分析，也常与其他检测⽅法结合使⽤。
2. ⽓相⾊谱法通过与标准样品共⾊层分离来鉴定样品中植物激素的含量，但由于⽆法排除杂质与标准品的共⾊层分离，所以不能准确检测植物激素含量。
待测样品必须形成易挥发的甲基化和三甲基硅烷化衍⽣物才可以运⽤⽓相⾊谱法检测，所以在⼄烯的测定种，⽓相⾊谱法⽐较常⽤。
3. 酶联免疫法（ELISA法）将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化⽣成有⾊产物，通过颜⾊反应的深浅来进⾏定性或定量分析。
酶联免疫吸附法的主要缺点在于抗体的制备复杂，且检测中难以排除交叉反应，⽆法保证植物激素检测的准确性。
4. ⾼效液相⾊谱法⾼效液相⾊谱法与不同检测器结合，能直接分析多种植物激素，是⽬前应⽤较⼴泛的植物激素检测⽅法之⼀。
除⼄烯外的其它植物激素均可以采⽤⾼效液相⾊谱法进⾏检测。
5. 质谱法液质联⽤（LC-MS）和⽓质联⽤（GC-MS）克服了⾼效液相⾊谱和⽓相⾊谱的在植物激素定性和定量⽅⾯的局限性，成为普遍接受和认可的植物激素检测⽅法。
GC-MS具有选择性好、专⼀性强、灵敏度⾼等特点，不⾜之处在于对样品的纯化要求很⾼，且样品需要衍⽣化处理。
不同于GC-MS，LC-MS不需要衍⽣化处理，简化了操作步骤，缩短了检测时间。
因此LC-MS更适⽤于植物激素的检测（除⼄烯外）。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类在植物生长和发育过程中起调节作用的化合物。
它们能够通过调节细胞分裂、扩展和分化以及调控植物对环境的适应能力，从而影响植物的形态和功能。
为了研究和了解植物激素的作用机制，科学家们发展了多种测定植物激素的方法。
这些方法可以帮助我们准确地测定植物激素的浓度，并进一步揭示植物激素在植物生长和发育中的作用。
一种常用的测定植物激素的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC 是一种基于植物激素在液相中的分离和检测原理的分析方法。
首先，样品中的植物激素会被提取出来，然后通过在柱子中的固定相上进行分离，最后利用紫外光谱仪或质谱仪等设备进行检测和定量。
这种方法具有高分离效果、高灵敏度和高准确性的优点，常用于测定植物激素如生长素、赤霉素、脱落酸等的浓度。
除了HPLC，放射免疫测定法（RIA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
RIA利用植物激素与标记同位素结合的原理，通过测量放射性同位素的放射线强度来定量植物激素的浓度。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以测定植物激素如赤霉素、激动素、玉米素等的浓度。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
ELISA利用植物激素与特异性抗体的结合反应，通过测量抗体与酶标记物质之间的酶活性来定量植物激素的浓度。
这种方法具有简单、快速和高灵敏度的优点，常用于测定植物激素如赤霉素、生长素、激动素等的浓度。
除了上述几种常用的测定方法，还有一些新兴的测定植物激素的方法也在不断发展中。
例如，质谱法（MS）是一种基于植物激素分子的质量和质荷比的分析方法，可以精确测定植物激素的结构和浓度。
另外，生物传感器和光谱法等新技术也被应用于植物激素的测定领域，为研究人员提供了更多的选择。
测定植物激素的方法多种多样，各有优劣。
科学家们根据研究目的和需求选择合适的方法来测定植物激素的浓度。
这些测定方法的发展和应用，不仅有助于我们深入了解植物激素的作用机制，还为植物生长和发育的调控提供了重要的理论和实践基础。
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赤霉素检测方法
1、原理
试样经甲醇提取、浓缩并净化后，用高效液相色谱法检测，外标法定量。
2、试剂
以下试剂，除特殊说明外，均为分析纯。
1）甲醇：色谱纯。
2）冰乙酸。
3）赤霉素标准品。
4）0.6%冰乙酸溶液：准确称取0.6mL冰乙酸，加水并定容至100 mL。
5）0.1mg/mL赤霉素标准液：准确称取0.010g赤霉素标准品于100 mL容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度。
3、仪器
高效液相色谱仪：配紫外检测器。
分析天平：感量0.0001g一台。
超声波清洗器。
容量瓶：25mL、100mL。
微孔滤膜：0.45μm。
4、测定
4.1 样品制备
准确称取样品0.10g，置于25mL容量瓶中，加约20mL甲醇，在超声水浴中超声20min，用甲醇定容至刻度，放置4 h后经0.45μm滤膜过滤，备用。
4.2 标品处理
将配制的标准液经0.45μm滤膜过滤，过滤后所得滤液作为对照溶液。
4.3 测定
4.3.1色谱条件
色谱柱：C18色谱柱，150 mm×4.6 mm，5 μm，或性能相当者。
流动相：甲醇：0.6%冰乙酸溶液= 35：65。
紫外检测器：波长为211 nm。
柱温：30℃。
流速：1.0 mL/min。
进样体积：20 μL。
4.3.2 色谱分析
分别注入20 μL赤霉素标准液及试样溶液，按上述列出的条件进行液相色谱分析测定，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。
根据标准品的保留时间定性，外标法定量。
4.4结果计算
样品中赤霉素含量（X）以毫克每克（mg/g）表示，按下式计算：
式中：
X：样品中赤霉素含量，单位为毫克每克（mg/g）。
A2：样品峰面积。
c: 赤霉素标准液浓度数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）。
V：试样体积，单位为毫升（mL）。
A1：标品峰面积。
M：样品质量，单位为克（g）。
5、方法定量检出限
本方法定量检出限为：2mg/g。