大鼠水合氯醛麻醉的方法
mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立3
mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立一、引言血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是一种由脑血管疾病引起的认知功能障碍，严重影响了患者的生活质量。
目前，VD的病理机制尚不完全清楚，因此建立可靠的动物模型对于深入研究VD的发病机制、早期诊断和治疗具有重要意义。
本研究旨在通过改进线栓法制备大脑中动脉阻塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）大鼠模型，以模拟VD的病理过程，为VD的研究提供一个新的工具。
二、材料与方法1. 实验动物选取健康雄性SD大鼠，体重在250300g之间，饲养于清洁级动物房，自由摄食和饮水。
动物实验符合动物伦理学要求。
2. MCAO模型的制备（1）手术准备：大鼠术前禁食12小时，不禁水。
术前10分钟腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）麻醉。
麻醉后，将大鼠仰卧位固定于手术台上，剪去颈部毛发，消毒皮肤。
（3）模型评估：术后24小时进行神经功能缺损评分（Neurological Severity Score，NSS）和脑梗死体积测量。
NSS评分包括运动、感觉和平衡功能，总分018分，分数越高表示神经功能缺损越严重。
脑梗死体积通过TTC染色法测量，梗死体积百分比（%）=（梗死体积/半球体积）×100%。
3. 数据处理采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。
计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。
P<0.05为差异有统计学意义。
三、结果1. MCAO模型的制备成功率本实验共制备MCAO大鼠模型40只，成功率为95%（38/40）。
失败原因包括术中出血、术后死亡等。
2. 神经功能缺损评分术后24小时，MCAO组大鼠的NSS评分为（14.5±1.8）分，显著高于假手术组（1.8±0.5）分（P<0.01）。
3. 脑梗死体积术后24小时，MCAO组大鼠的脑梗死体积百分比为（38.5±5.2）%，显著高于假手术组（0.0±0.0）%（P<0.01）。
大鼠水合氯醛麻醉的方法
注意体重与麻醉剂量的关系
注意麻醉过量和致死剂量的关系 注意补加麻醉剂的方法 注意保温
1.
2. 3.
4.
麻醉剂要现用现配以保持新鲜度 严格按照动物体重来计算麻醉剂量 10%水合氯醛LD50为480mg/kg，麻醉剂量 与致死剂量较近，一麻醉过量容易致死 麻醉过程中会伴有体温下降，可采取保温 措施
如脉搏及血氧饱和度，心电图，血压，体温
水合氯醛对机体的影响
水合氯醛对离体十二指肠平滑肌收缩性的 抑制作用最大，抑制率为99.5% 相对其他麻醉剂，发现水合氯醛降低脑温 的时间最长 大剂量水合氯醛引起心律失常，小剂量没 有明显毒性作用
麻醉注意事项
注意动物个体差异 注意麻醉剂的新鲜度
大鼠之间的个体差异，使每只对其耐受程度 不同，壮年及雄性大鼠对其耐受性强，体弱 或雌性大鼠相反，导致致死量相对减少
10%水合氯醛，一般200g左右0.25差不多， 300g以上要0.3-0.35，当个别大鼠一次麻不 倒，一般按25%首剂量追加
麻醉效果观察
呼吸 由不规则变为规则且平稳 反射活动 角膜反射迟钝 肌张力 全身肌肉松弛 皮肤夹捏反应 反应消失 常规检测指标
水合氯醛麻醉药在动物 实验手术中的心得
姓名：王宁丁 专业：中西医结合基础
动物手术常用麻醉药
戊巴比妥钠 水合氯醛 乌拉坦 氯胺酮 乙醚 α-氯醛糖
水合氯醛常用浓度及剂量
1.常用浓度有5%、7%、10% 2.剂量可分别为0.7ml/100g、0.5ml/100g、 0.3ml/100g 3.麻醉有效时间约3-5min，维持时间2-3h
注意
水合氯醛麻醉后大鼠很容易腹胀而死，是 由于水合氯醛浓度太高了，可选用5-7%的水 合氯醛，给药原则是一次给齐，忌讳反复追 加注射，否则很容易肠道胀气。
大鼠水合氯醛麻醉心得[参考内容]
![大鼠水合氯醛麻醉心得[参考内容]](https://img.taocdn.com/s3/m/f86865f571fe910ef12df87d.png)
大鼠水合氯醛麻醉心得本人所做的模型需要使用水合氯醛麻醉，所使用的是医院里配制的用于儿科灌肠的10%水合氯醛。
在先前的实验中，剂量为0.3mL/100g（这个剂量来自于师姐使用的经验），麻醉完全清醒时间约4h（当初没有记录开始清醒的时间）现在由于实验方案有所改动，希望麻醉的时间尽量缩短（1~1.5h），而麻醉深度保持不变，这样在侧脑室注射操作后，大鼠能够尽快的恢复清醒状态，便于后续的实验操作。
因此，对水合氯醛麻醉的剂量与药效进行了摸索，我把它贴出来，跟大家分享一下。
动物：雄性SD大鼠4只，平均体重356g（这里就不算标准差了），水合氯醛浓度分为4%、7%、10%三个水平。
结果：如下表格所示：水合氯醛浓度 4% 7% 7% 10% 10%水合氯醛剂量 0.5mL/100g 0.3mL/100g 0.2mL/100g 0.2 mL/100g 0.3 mL/100g诱导时间约7min 约4min 约7min 约4min 约4min麻醉深度浅麻醉水平中度麻醉浅麻醉深度麻醉深度麻醉麻醉开始清醒时间约90min 约100min 未观察约68min 114min 结论：1、麻醉的诱导，似乎从4%到（7%、10%），随着浓度的增加，麻醉诱导的时间缩短。
但在7%及10%这两个浓度，麻醉时间基本一致。
2、麻醉时间的长度与水合氯醛的总剂量可能成正相关。
3、麻醉的深度跟与水合氯醛的浓度可能成正相关在之前甲醛《做动物实验前必须给予阿托品吗？》的这篇中，有战友提出“把水合氯醛配成4%的，而不是10%的，这样就拉开了麻醉剂量和致死剂量之间的差距，可安全了”，我的经验是这样：（1）确实，4%的水合氯醛在实验中比较安全，我们一般用于追加麻醉的时候，4%水合氯醛每次1mL，追加一到两次，安全度颇高。
（2）而水合氯醛的致死剂量，我不是很了解，希望知道的战友能够告知一声。
对于10%的水合氯醛，我们用到0.3mL/100g也很安全，应该距离致死剂量还有一段距离，麻醉深度与维持时间也很确切。
大鼠的麻醉
用量：0.25ml/100g
6、2%戊巴比妥钠50mg/kg，书上推荐的剂量是40～50mg/kg（ip）；或者苯巴比妥钠+乙醚麻醉，效果也可以.。
7、在建立肠道缺血再灌注损伤模型中使用戊巴比妥钠，是沿用了很多同事的方案。使用中麻醉很平稳。效果很不错。估计肾脏移植模型和肠道相差不大，不知对否。
二、异氟醚大鼠麻醉
安全且具有麻醉科特色。
我们是用异氟醚（应该是国产的吧）麻醉的，用那种市面上常见的可以提的比较大的带盖塑料水杯自制一个封闭的小麻醉空间，水杯是那种直桶透明，盖子类似特百惠按盖，上有一个约2cm饮水孔的那种，用一个合适的注射器前端堵住饮水孔。使用时打开盖子，将杯子对着大鼠，大鼠顺势会自己进去，然后竖起杯子盖上盖，连抓大鼠都省了，超级安全！然后接麻醉机（临床淘汰的机型，不过作试验足够了），注意要事先准备好连接管道（临床上各种管子都是可以互相接口的），打开挥发器就行了。我们一般先开最大，大鼠一会儿不动了就麻好了（杯子要求至少半透明）。
4、3%的戊巴比妥钠，1ml～1.5ml/kg，但要体重称准。
5、戊巴比妥钠，40mg/kg，但不安全，用水合氯醛腹腔注射最安全，300mg/kg。或是用乌拉坦。用复合麻醉，2小时左右很有效。
配方：
戊巴比妥钠：0.886g
水合氯醛：4.25g
硫酸镁：2.12g
无水酒精：14.25ml
丙二醇：33.8ml
3、水合氯醛和戊巴比妥钠均可以的，前者的麻醉持续时间短些，看你的手术需要了，前者的一般剂量为350～400mg/kg，后者的剂量一般可为30mg/kg，均是ip注射，安全性是很好的。戊巴比妥钠最好用进口分装的，上海试剂公司有售。??
注：我们一般同时接着氧气，所以安全过程中的维持麻醉一般也采用吸入麻醉，与诱导时基本类似。取出诱导好的大鼠，快速固定四肢在操作板上，给大鼠口鼻处罩上剪下的合适注射器（好像是20或30ml注射器）前端，注射器头接诱导时的麻醉管道，连接到麻醉机上，一般维持时开到2，同时供氧，没有给它们插过气管插管，也没有出现窒息的（至少我没见过）。可作除开胸外的手术，一般切皮处给予少量局麻。作过颈部血管手术和股动静脉穿刺置管效果都很好。
提取大鼠平滑肌细胞——小总结
1．大鼠PASMCs的提取和原代培养(1)提取：对雄性SD大鼠用5％的水合氯醛经腹腔麻醉后，浸泡在75％的乙醇中5 rain。
将麻醉后的大鼠在超净工作台中固定好，无菌操作下迅速分离出心肺组织，置于盛有含有1％青链霉素的PBS培养皿中。
转移至无菌操作台中，漂洗心肺组织数次，眼科镊仔细剥离出肺动脉(包括肺动脉主干和左右肺动脉干)。
将已分离出的肺动脉用含1％青链霉素的HBSS冲洗数次，直至液体清亮为止，以尽量减少血细胞等的混入。
眼科剪纵向剪开肺动脉，内膜面朝上，用刀片来回轻刮2～3遍，去除内膜。
再将外膜面翻转过来，同样方法刮去外膜。
将中膜转移至盛有含20％胎牛血清的DMEM／F12的培养基中，用眼科剪反复剪成1 am×l mm×1 mm 的小组织块。
用滴管将小组织块转移至25T的培养瓶中，均匀的摆放与于瓶底，间距约0．5 cm。
加入3 mL含20％胎牛血清的DMEM／F12培养液，瓶底朝上，静置于37 oC、5％CO，的细胞培养箱巾孵育4～5 h。
待小组织块干涸后，轻翻转培养瓶，让培养液慢慢浸润瓶底上的小组织块，继续静置于培养箱中培养。
(2)原代培养：3—5 d后，有少量细胞从组织块周围游离出来；8—10 d后细胞融合成片，成峰．谷状分布，用胰酶消化传代。
一般2—3 d更换培养液，提取PASMCs 时用含20％胎牛血清的DMEM／F12，培养时用含15％胎牛血清的DMEM／F12。
采用生长状态良好的3～5代细胞进行后续实验。
取材、细胞原代及传代培养SD 大鼠肌注氯胺酮（22 mg / kg）麻醉后，作下腹部横切口，切取双侧输精管。
剥去外膜组织，小圆刀片刮除内膜，4 C PBS缓冲液（含青霉素100 U/ mI、链霉素100#g / mI）反复漂洗4 ~ 6遍，然后剪碎成1 mm3 大小的组织块。
先用0.1%的"型胶原酶消化作用10 min，倒去上清液，再加0.2% 的胰蛋白酶和0.1%的"型胶原酶消化20 min，使游离成单个细胞，600 > ! 离心5 min，收集消化的细胞，接种至25 cm2 培养瓶，加含20%胎牛血清的DMEM 培养液，置37 C含5%CO2孵箱中培养。
大鼠灌注固定的方法
大、小鼠灌注固定的方法准备物品：1、灌注针（灌注用的针可以是临床上的静脉套管针，便于穿刺）2、医用输液器3、500ml输液用玻璃瓶4、血管钳5、剪刀6、生理盐水7、4%多聚甲醛（4℃）,0.1M的PB配制大鼠深度麻醉，迅速打开胸腔，暴露心脏，此时注意用血管钳钝性分离心包及周围软组织以便充分暴露心脏。
左手持镊子捏住心脏，右手持套管针从心尖部位插入，向上进针到升主动脉。
取出套管针内芯，连接生理盐水，打开输液开关，快速灌注，同时用剪刀在右心耳处剪一小口，待流出的液体无色后（约60ml即可）更换为多聚甲醛。
多聚甲醛灌注速度为先快后慢，快速灌注50ml后放慢速度，缓慢滴注维持即可，每只大鼠约需100ml。
如果多聚甲醛灌注充分，则动物四肢和全身肌肉会不停抽动。
如此灌注约需1小时时间。
充分暴露升主动脉套管针从心尖部位插入，向上进针到升主动脉1、暴露心脏时要小心，速度要快，但不可损伤心脏及大血管，如果出现血液凝固或大血管损伤，灌流将失败。
2、最好是剖开右心室，但是因为暴露的问题，有误剪到左心室的可能。
相对来说，剪开右心耳更为方便。
我们就是这样做的。
3、灌流的效果：PBS或NS灌流时，血流丰富的脏器如肝脾肾等的颜色会迅速转为灰白，此为灌流正常。
另外，大鼠耳尖，口唇，四肢掌部也会变苍白。
4、PBS或NS灌流需缓慢而持续，防止血液血管内凝固。
有条件的话可加点肝素。
5、先主动脉插管，再右心耳放血，这样插管容易些。
先剪右心耳的话，心脏会瘪下去的。
小鼠灌注固定方法：采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔，动作要快，经左心室插入头皮针连接的20 mL注射器（头皮针磨钝，从与身体纵轴成45°角的方向进针，针尖插入升主动脉内，可以看见，动作要轻柔），同时剪开右心耳，推入20 mL 生理盐水。
推完以后迅速换4 ℃多聚甲醛20 mL，灌完以后取材基本就可以了。
动物麻醉技术
--硫酸镁为导泄、利胆、降压、抗惊厥药。口服不易吸收， 并使肠内容物渗透压升高，水分吸收减少，肠容积增大，刺激肠蠕动而泄下。注射给药可使血中Mg2+增加，它能阻止神经末梢释放乙酰胆碱，使骨骼肌松弛。本实验通过不同给药途径对硫酸镁作用的影响。
速眠新麻醉剂
---肾损伤模型
做药理学时，按照“章蕴毅主编.药理学实验指导.人民卫生出版社2007.8北京”实验3，做的。
An animal model of lung transplantation: damage, protection and immune response
---乳腺癌模型
有两条需要大家注意：1、术后肺不张不好处理。2、用大鼠的话，相关抗体偏少可能会给术后的研究带来不利，建议改用小鼠做模型。个人认为，从大鼠向小鼠过度约需一到两周时间。
---30例大鼠肺移植手术成功率为90%，移植后存活率100%，左供肺摘取需时(3±1) min，供肺完成体外套管时间分别为：肺动脉(2.0±0.5) min、肺静脉(3±1) min、支气管(2.0±0.5) min，供受体动静脉和支气管套管吻合时间分别为：肺动脉(4±1) min、肺静脉(8±3) min、支气管(2.0±0.5) min，总手术时间(55±10) min。提示改良的三袖套技术建立大鼠肺移植模型操作供稳定可靠的动物模型。
---煮沸消毒后的水合氯醛溶液可分解为酸性液，注入后可使动物发生酸中毒。因此不能高压灭菌，主要按照以下配置方法我想不会感染的。
其方法如下：
1、溶媒：通常用生理盐水，最好是5～l0％葡萄糖注射液或5%葡萄糖硫酸镁注射液(5%葡萄糖液l00ml加硫酸镁5g)。
2、浓度：高浓度刺激性大，易引起溶血；低浓度则增加注入药液量而加重心肺负担。临床常用浓度为5～10％。
几种常见疾病的造模方法
几种常见疾病的造模方法1.血管性痴呆大鼠模型动物选取选用健康Ⅱ级SD雄性大鼠，体重280- 320 g，动物于安静环境下分笼饲养，室温控制在(22士1)℃的范围内，相对湿度60%，光线自动控制，明(07: 00- 19: 00)暗（19: 00-07）交替，给予充足清洁饮水、摄食。
处理大鼠10%水合氯醛腹腔注射(1 g/ kg)麻醉后，将其仰卧固定。
分离右颈总动脉（CCA）,颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA）并挂线备用，结扎ECA与CCA,用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分义处作一切切口，从切口处插入一端加热成光滑球形尼龙线(直径为0. 25 mm,距球端2cm处作标记)。
线插入ICA后，于入日处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段，然后松开夹闭ICA的动脉夹，继续插入尼龙线至稍有阻力后略回撤，至线插入深度为(18. 5士0. 5)mm左右，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。
再次结扎入口处，尼龙线外留约1缝合皮肤。
2h后轻轻提拉所留线头至有阻力，实现大脑中动脉再灌，则造模完成。
纳入动物入选的标准(按照Zea Longa 5级评分法取评分为2,3,4分的动物,动物于缺血2h后出现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧倒体征则纳入，动物无此体征或于缺血2h后仍不清醒者弃去。
2.大鼠酒精性肝病模型取材体重125- 155g雄性SD大鼠，环境温度18℃一20 0C,湿度70%左右，自由采食全价营养颗粒饲料，垫料为紫外线消毒后的卫生纸。
将酒精体积分数为0. 52的红星二锅头自酒(北京酿酒总厂生产)，按体积比分别稀释成400Io .450Io .500Io ( v/ v)备用。
处理按每周所测得的体重给子每日早晚白酒灌胃各1次。
第1周将稀释成40%的白酒按剂量4g/(kg.d)、每次0. 5m1/ 100g灌胃，第2周按剂量8g/(kg.d)、每次1. 0ml/ 100g,灌胃，第5周开始将稀释成45%的自酒按9g/(kg.d),每次1. 0m1/ 100g灌胃，第9周将稀释成50%的白酒按10g/（kg.d）、每次1. 0m1/ 100g灌胃，第11周起改用自由饮酒至第12周，以浓度50%白酒作为主要饮料，日供给量40ml，同时限制饮水。
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1. 麻醉剂要现用现配以保持新鲜度
2. 严格按照动物体重来计算麻醉剂量
3. 10%水合氯醛LD50为480mg/kg，麻醉剂量 与致死剂量较近，一麻醉过量容易致死
4. 麻醉过程中会伴有体温下降，可采取保温 措施
2021/3/7
CHENቤተ መጻሕፍቲ ባይዱI
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注意
水合氯醛麻醉后大鼠很容易腹胀而死，是 由于水合氯醛浓度太高了，可选用5-7%的水 合氯醛，给药原则是一次给齐，忌讳反复追 加注射，否则很容易肠道胀气。
2021/3/7
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麻醉效果观察
➢ 呼吸
由不规则变为规则且平稳
➢ 反射活动
角膜反射迟钝
➢ 肌张力
全身肌肉松弛
➢ 皮肤夹捏反应 反应消失
➢ 常规检测指标
如脉搏及血氧饱和度，心电图，血压，体温
2021/3/7
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水合氯醛对机体的影响
水合氯醛对离体十二指肠平滑肌收缩性的 抑制作用最大，抑制率为99.5%
相对其他麻醉剂，发现水合氯醛降低脑温 的时间最长
大剂量水合氯醛引起心律失常，小剂量没 有明显毒性作用
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麻醉注意事项
注意动物个体差异 注意麻醉剂的新鲜度 注意体重与麻醉剂量的关系 注意麻醉过量和致死剂量的关系 注意补加麻醉剂的方法 注意保温
2021/3/7
水合氯醛麻醉药在动物 实验手术中的心得
2021/3/7
姓名：王宁丁 专业：中西医结合基础
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动物手术常用麻醉药
✓ 戊巴比妥钠 ✓ 水合氯醛 ✓ 乌拉坦 ✓ 氯胺酮 ✓ 乙醚 ✓ α-氯醛糖
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水合氯醛常用浓度及剂量
1.常用浓度有5%、7%、10% 2.剂量可分别为0.7ml/100g、0.5ml/100g、
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CHENLI
10
0.3ml/100g 3.麻醉有效时间约3-5min，维持时间2-3h
2021/3/7
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大鼠之间的个体差异，使每只对其耐受程度 不同，壮年及雄性大鼠对其耐受性强，体弱 或雌性大鼠相反，导致致死量相对减少
10%水合氯醛，一般200g左右0.25差不多， 300g以上要0.3-0.35，当个别大鼠一次麻不 倒，一般按25%首剂量追加