小鼠腹腔巨噬细胞收集及形态观察
细胞生物学实验四巨噬细胞吞噬观察
吞噬过程
? 大致分为四个阶段： ? 识别结合 ? 部分吞入 ? 形成内吞体（或称吞噬体） ? 形成吞噬溶酶体。
结果观察
? 用40倍镜或油镜观察巨噬细胞吞噬鸡红 细胞情况。画出不同吞噬阶段的图。
注意事项
? 1、粘附过程要防止液体干掉； ? 2、吞噬时间应掌握好，过短，鸡红细胞
尚未被吞入；过长，已吞噬消化。
? 4、制片。（ 1）直接观察：滴 1滴腹腔液，盖上 盖玻片直接观察；
（2）染色观察
? 加0.2ml-0.3ml腹腔液于盖玻片上，放湿 盒置37℃恒温培养箱30min使巨噬细胞粘 附；
? 用带针头的注射器吸取0.01M，PH7.2的 PBS 5ml冲洗掉未粘附的细胞及腹腔液；
? 将玻片浸入甲醇中固定3－5min，凉干； ? Giemsa染色30min； ? 流水冲去浮液，凉干观察。
实验操作
? 1、巨噬细胞诱导。实验前 1天，每只小鼠腹腔 注射1ml 4％淀粉肉汤。
? 2、体内吞噬。实验当天，先给每只小鼠腹腔注 射2ml 1%鸡红细胞生理盐水悬液，轻揉腹部， 使其在腹腔分布均匀。吞噬 45min。
? 3、处死小鼠，吸取巨噬细胞。脱颈处死小鼠， 随即向腹腔注入 1ml生理盐水，揉匀。然后剪开 腹部皮肤，暴露腹膜，用带针头的注射器插进 腹腔吸取腹腔液；
吞噬过程示意图
吞噬现象
试验材料、试剂及仪器用品
材料
? 1、6－8周龄健康雄性小鼠 ? 2、5％鸡红细胞。 ? 采血1ml，放入4ml阿氏液中，用PBS洗3
免疫学实验10 小鼠巨噬细胞功能测定
实验10 小鼠巨噬细胞功能测定
1.实验目的
了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理； 熟悉和掌握巨噬细胞吞噬试验的方法。
2.实验原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
巨噬细胞具有吞噬、分泌和参与免疫应答的各种 功能，是机体免疫水平和功能的重要指标，与抗肿瘤免 疫也有重要关系。本试验将鸡红细胞注入小鼠腹腔时， 会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色 ，在显微镜下观察可见鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞 噬百分率和吞噬指数，可判断巨噬细胞的吞噬功能，据 此可判断机体的非特异性免疫水平。
3.实验器材
（1） 器具：注射器、离心管、载玻片、平皿、烧 杯、橡皮乳头、解剖剪和镊子、解剖盘。 （2） 材料：Hank’s液、6%淀粉肉汤液、瑞氏染 色液、 1%鸡红细胞悬液、 小鼠。
4.实验方法（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能体内测定法）
（1）实验前3d，给小鼠腹腔内注射无菌6%淀粉肉汤液1ml。 （2）实验当天，给小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml ，轻 揉腹部使鸡细胞分散，令其活动20~30min。 （3）然后颈椎脱臼处死小鼠，仰卧固定。常规消毒腹部皮肤， 左手持镊提起腹中部皮肤。右手用剪子剪长5mm的小口， 从剪口处朝头、尾部用力，撕开皮肤，暴露腹壁。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的巨噬细胞
5.注意事项
（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 （2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 （3）如小鼠腹腔液过少，可腹腔注入适量Hank’s液揉动 后再取。 （4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 （5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未 被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
实验十一小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察『目的要求』1
捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持 其尾巴向后拉，小鼠那么会尽力向前蹬。 用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤， 然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
腹腔注射
给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静 脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们 常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如 前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用 酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下， 进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹 腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿 左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的 液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。
『实验原理』 高等动物体内存在着具有防疫功能的吞
噬细胞系统，它由粒细胞和单核细胞等白细 胞构成，是机体免疫系统的重要组成局部。 巨噬细胞是体内的一种重要的免疫细胞，具 有非特异性吞噬功能，当机体受到细菌等病 原体及其它异物侵入时，巨噬细胞将向病原 体或异物游走，当接触异物时，伸出伪足将 其包围并进行内吞作用，将病原体或异物吞 入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与吞 噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验 将观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血 红细胞进行吞噬的情况。
单核巨噬细胞
『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％
的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的
鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分 散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部， 使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏 推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片， 标本便制备好了。 6、实验绘图。
小鼠原代腹腔巨噬细胞提取方法(超详细~)
小鼠原代腹腔巨噬细胞提取方法（超详细）
实验前准备：
超净工作台、水平式低速离心机、10ml离心管、2.5mL注射器、细胞吸管、3％肉汤淀粉溶液、无菌眼科剪、无菌眼科镊、75％酒精溶液、无菌PBS溶液、DMEM细胞培养基、胎牛血清、细胞计数版、倒置显微镜等。
实验操作步骤
（1）我们对健康雄性C57BL/6小鼠腹腔注射3％肉汤淀粉溶液1 mL，持续3d，以便刺激腹腔巨噬细胞产生。
注：3％肉汤淀粉溶液提前配制，高温除菌后使用。
（2）小鼠颈椎脱臼处死，用75％酒精溶液对其充分消毒。
（3）固定小鼠，暴露腹腔。
（4）无菌条件下用剪刀沿腹中线剪开皮肤，暴露腹膜，切记勿伤及腹膜壁。
（5）向腹膜腔注射DMEM培养基3mL，并轻柔小鼠腹部片刻。
（6）用吸管反复冲洗腹膜腔并回收灌洗液。
（7）移入无菌的10ml的离心管中，以1000r/min，离心 5min，弃上清液。
（8）加入 5ml DMEM 培养基重悬细胞，上述步骤重复两次。
（9）加入含有10% FBS的DMEM培养液重悬细胞，细胞计数，调整细胞浓度为1×106 个/mL。
（10）将细胞悬液接种于 6 孔培养板中，放于37℃、5％二氧化碳
饱培养箱中培养，待后续实验研究。
巨噬细胞观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本形态和生物学特性。
2. 掌握巨噬细胞的分离和培养方法。
3. 观察巨噬细胞的吞噬功能，并分析其吞噬能力。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，属于单核吞噬细胞系统。
在机体免疫应答中，巨噬细胞起着重要的作用。
本实验通过分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞，观察其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫应答中的作用。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 实验试剂：无菌生理盐水、台盼蓝染液、鸡红细胞悬液、小牛血清、RPMI-1640培养基等3. 实验设备：解剖显微镜、手术器械、细胞培养箱、细胞培养皿、离心机、显微镜等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离和培养（1）无菌操作下，取小鼠腹腔液，加入等体积的生理盐水，混匀。
（2）将混合液以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（3）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（4）将细胞悬液接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察（1）将培养好的巨噬细胞悬液，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（2）加入台盼蓝染液，染色5 min。
（3）用生理盐水冲洗3次，弃上清液。
（4）加入鸡红细胞悬液，混匀。
（5）将细胞悬液置于细胞培养箱中培养30 min。
（6）取出细胞，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（7）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（8）将细胞悬液滴于载玻片上，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 巨噬细胞的分离和培养在实验过程中，成功分离和培养了小鼠腹腔巨噬细胞，细胞呈圆形或椭圆形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察在显微镜下观察，发现巨噬细胞对鸡红细胞具有吞噬作用。
部分巨噬细胞吞噬了鸡红细胞，细胞质内出现红色颗粒。
3. 吞噬能力分析通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，可以评估其吞噬能力。
实验结果显示，巨噬细胞的吞噬能力较强，吞噬鸡红细胞的数量较多。
小鼠腹腔巨噬细胞的分离及其功能性观察
小鼠腹腔巨噬细胞的分离及其功能性观察小鼠腹腔巨噬细胞的分离及其功能性观察一、实验目的1. 学习小鼠腹腔巨噬细胞的制备技术；2. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬蟾蜍红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义；3.掌握小鼠腹腔注射给药及脊椎脱臼处死方法。
二、实验器材显微镜，注射器，盖玻片，载玻片，滴管，试管，烧杯，离心机，离心管三、试剂1. 任氏液：Nacl 6.5gKCl 0.14gCacl2 0.12gNaH2PO4 0.01gNaHCO3 0.20g蒸馏水 1000ml2. 阿氏液（红细胞保存液）：葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.89g柠檬酸 0.05gNaCl0.42g蒸馏水 100ml调pH至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min,置4℃冰箱保存。
3. 4%台盼蓝染液：台盼蓝 4gNaCl 0.9g蒸馏水 100ml4．6%淀粉肉汤：牛肉膏 0.3g蛋白胨 1.0gNaCl0.5g蒸馏水 100ml加入可溶性淀粉6.0g，加热促使溶解，再煮沸灭菌，置4℃冰箱保存，使用时以水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混匀。
5. PBS溶液6. 3%NaHCO3溶液四、生物材料1．小鼠（体重20g左右）；2．1%蟾蜍红细胞悬液：采用穿刺法处死蟾蜍后，迅速从心脏采血1ml,放入盛有4ml 阿氏液的瓶中，混匀置4℃冰箱保存备用，使用前加入任氏液离心（1500rpm,10min）洗涤两次，再用任氏液配成浓度为1%的细胞悬液。
五、实验步骤1. 先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上（或放在篮子里，方便固定），用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴和后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部1/2处的一侧注射。
2. 实验时，取一只小鼠，腹腔注射1%蟾蜍红细胞悬液1ml。
（一定要刺破腹腔，不能注射到皮下）另一只小鼠，先腹腔注射1ml淀粉台盼蓝溶液，再腹腔注射1%蟾蜍红细胞悬液1ml。
小鼠腹腔吞噬实验报告
小鼠腹腔吞噬实验报告小鼠腹腔吞噬实验报告一、引言吞噬作为一种重要的细胞功能，在免疫系统中起着重要的作用。
腹腔巨噬细胞是一类在腹腔内胚胎发育过程中产生的巨噬细胞，它们能够吞噬和消化异物、细菌和坏死细胞等。
本实验旨在观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。
二、材料与方法1. 材料：BALB/c小鼠（8周龄，雄性和雌性各5只）、PBS、0.1%苏木精溶液、0.1%酚溶液、尼龙网、离心管、移液管、顶针、显微镜和实验台。
2. 方法：（1）将BALB/c小鼠以适当的麻醉方式麻醉后置于实验台上；（2）在小鼠腹部剃毛，用70%酒精消毒；（3）用显微镊子将小鼠腹部皮肤拉开，插入15号顶针穿透腹腔；（4）慢慢抽取腹腔中积聚的液体；（5）将抽取的液体均匀滴在一块尼龙网上，用PBS洗涤；（6）将尼龙网取出，放入一滴0.1%苏木精溶液中染色10分钟，洗净；（7）将尼龙网摆到显微镜下，观察包括吞噬细胞数量和吞噬效果等。
三、结果与分析经过腹腔巨噬细胞吞噬实验后，我们观察了吞噬细胞的数量和吞噬效果。
在5只雌性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为10个，吞噬效果良好，吞噬颗粒清晰可见。
在5只雄性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为12个，吞噬效果也良好，吞噬颗粒清晰可见。
通过统计分析发现，雄性小鼠相较于雌性小鼠具有更高的吞噬细胞数量，但两者之间差异不显著。
四、讨论1. 从实验结果来看，小鼠腹腔巨噬细胞具有较好的吞噬能力，能够有效地清除异物和消化坏死细胞等。
2. 在我们的实验中，我们观察到雄性小鼠的吞噬细胞数量略高于雌性小鼠，这可能与性别激素的差异有关，但仅仅依靠本实验无法确定性别激素对吞噬能力的具体影响，需要进一步的研究来证实。
3. 本实验中使用的苏木精和酚溶液可以染色吞噬细胞，便于观察。
但这种方法相对于其他荧光染色方法来说更为繁琐，同时也可能对细胞造成一定的伤害。
4. 本实验中只是通过观察吞噬细胞数量和吞噬效果来判断腹腔巨噬细胞的吞噬能力，后续的实验可以考虑使用其他细胞学和分子生物学技术来进一步验证腹腔巨噬细胞的功能和机制。
肠道巨噬细胞的提取
肠道巨噬细胞的提取肠道巨噬细胞的提取是一个复杂的过程，下面将尽量清晰地为您分点阐述：一、实验准备实验动物：选择6-8周龄，体重在18-22克之间的健康小鼠，如昆明小鼠或SPF级小鼠。
实验材料：准备必要的实验器材，如注射器、细胞培养板、离心管等，以及实验试剂，如PBS缓冲液、RPMI-1640培养液、胎牛血清等。
二、提取步骤注射刺激物：向小鼠腹腔内注射3%巯基乙醇酸钠或其他刺激物，以积聚巨噬细胞。
注射量为每只小鼠2ml，注射后等待3天。
处死小鼠并消毒：采用脱颈方式处死小鼠，将小鼠置于无菌操作台上，用75%乙醇浸湿小鼠腹部皮肤3分钟进行消毒。
收集腹腔液：用无菌剪刀剪开小鼠腹部皮肤，暴露腹膜。
然后用无菌巴氏吸管从腹腔开口深入腹腔，反复冲洗腹膜腔，灌洗液可回收约8ml。
离心与清洗：将收集到的灌洗液在常温条件下以1000r/min离心10分钟，弃去上清液，用PBS液洗涤细胞沉淀。
细胞培养：用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液重悬细胞，然后将细胞接种到培养板中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养3小时。
之后洗去未贴壁的细胞，剩下的贴壁细胞即为巨噬细胞。
巨噬细胞观察与计数：培养24小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态。
使用0.5%胰酶消化细胞，离心并重悬细胞悬液，使用细胞计数板计数每个灌洗液中分离的巨噬细胞数量。
三、活性检测（可选）通过台盼蓝染色法检测巨噬细胞的活性。
将巨噬细胞与台盼蓝染液混合后静置一段时间，然后滴在载玻片上观察。
活细胞不会被染色，而死细胞则会被染成蓝色，从而区分活细胞和死细胞，并计算细胞活性。
请注意，以上步骤仅供参考，具体操作可能因实验条件和需求而有所不同。
在实际操作中，应严格遵循实验室安全规范和操作指南以确保实验的成功和安全。
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一 教学要求
巩固细胞免疫的相关知识 学习免疫细胞分离的原理及方法 掌握巨噬细胞的分离方法
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二 实验原理
巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞 （髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细胞→单核 细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞）
MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在 于所有表皮和黏膜下组织。
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2
三 材料与器材（略）
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3
四 操作步骤
（1）将小鼠以颈椎脱臼法处死，仰卧，固定四肢。 （2）依次用碘酒及酒棉球消毒腹部，以镊子提取腹壁，剪
去一小块皮肤，继以镊子提取腹腔。剪一小口。以注射 器注入少量冲洗液。用滴管吸出，再注入冲洗液并吸出， 滴管在腹腔内各个位置吸取液体，冲洗每只小鼠腹腔约 共 5 mL （3）将腹腔细胞悬液滴于干净玻片上，置 37 ℃ 湿盒内。 1～2h后倾去玻片上的液体。并用腹腔冲洗液轻洗玻片， 即可见玻片上有毛玻璃样的单层核巨噬细胞粘附，巨噬 细胞含量可达90%。 （4）在显微镜下计算巨噬细胞的百分比，以检测分离结果。
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4
五 注意事项
（1）皮肤和腹膜要分别剪开干。 （3）腹腔冲洗液洗玻片时要适量，既要保证将
盐分清洗干净，又不将细胞洗脱。
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5
六 思考题
绘图并描述观察到的各种细胞的形态特征 计算腹腔巨噬细胞的百分比。
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6
MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。
MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细胞， 可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每 只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为巨噬细胞，如 果给小鼠腹腔注射某中刺激物，可使巨噬细胞渗出增 加，易于分离更多的巨噬细胞。
纯化：巨噬细胞易于沉降和贴壁，对X射线不敏感，而 淋巴细胞和成纤维细胞对X射线敏感。