粗蛋白测定GB-1
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法—凯式定氮法粗蛋白crude protein；crude matter（DM）食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物（氮化物）。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16%（这已通过多次试验得出），再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50～55%、氢6～8%、氧20～23%、氮15～17%和硫～%。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15～17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。
为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290℃→400℃)，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法一凯式定氮法粗蛋白crude protein ；crude matter (DM)食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物(氮化物)。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16% (这已通过多次试验得出)，再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50〜55%、氢6〜8%、氧20〜23%、氮15〜17% 和硫〜％。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15〜17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”肖化”为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290C-400C )，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3) 在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
饲料中粗蛋白的测定度-不确定度评估
饲料中粗蛋白测定不确定度评定一、摘要按GB/T6432—94《饲料中粗蛋白测定方法》测定了玉米（粗蛋白10%以下）、玉米颗粒粕（粗蛋白10%~25%）、玉米蛋白粉（粗蛋白25%以上）中粗蛋白含量，按JJF1059—1999《测量不确定度评定与表示》对测定结果的不确定度进行了评定。
二、目的用国家标准方法测定饲料样品中粗蛋白。
三、测定程序按图1所示程序进行测定。
图1 粗蛋白测量程序四、被测量粗蛋白含量以占样品质量的百分比表示式中：V 1—滴定试样时所需酸标准溶液体积，mL ； V 2—滴定空白时所需酸标准溶液体积，mL ； C — 酸标准溶液浓度，mol/L ； m — 试样质量，g ；V — 试样分解液总体积，mL ； V 3—试样分解液蒸馏用体积，mL ； 0.0140— 每毫摩尔质量氮的克数；6.25— 氮换算成蛋白质的平均系数。
五、不确定度来源分析不确定度来源见图2— 因果关系图图2 因果关系图10025.60140.0)(321⨯⨯⨯⨯⨯-=Vm C V V P称样m滴定试样（空白）用标液体积V 1、V 2重复性(r)摩尔质量M(N)六、不确定度分量的量化1、 标准溶液浓度标准溶液浓度不确定度是测量不确定度的主要分量之一，同时，标准溶液浓度不确定度也是由多个分量合成所得，按GB601—88《化学试剂 标准溶液制备方法》，使用的盐酸标准溶液是采用标定法配制而成，下面详细描述配制过程。
1.1目的以无水碳酸钠（Na 2CO 3）基准标定0.1mol/L （或0.02mol/L ）盐酸溶液。
1.2标定程序见图3，按GB601—88标准有标定程序框图图3 标定程序框图 1.3被测量按下式计算盐酸标准溶液的浓度（GB601-88）05299.0)V V (m C 21⨯=-式中：m —无水碳酸钠质量，g;V 1—滴定用盐酸溶液体积，mL;量取9mL 盐酸注入1000mL 水中V 2—空白试验用盐酸溶液体积，mL;0.05299—每1/2毫摩尔质量碳酸钠的克数。
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法粗蛋白测定方法什么是粗蛋白，粗蛋白跟蛋白质又有什么区别，如何测量饲料中粗蛋白的含量，粗蛋白的含量高是不是一定代表着蛋白质的含量高。
我想，当你看到这个题目时，肯定会联想到这一连串的问题中的其中几个。
那么接下来，我就来详细介绍下粗蛋白的概念、粗蛋白测量和其他关于饲料中粗蛋白含量的问题。
粗蛋白概念：粗蛋白不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质。
包括真蛋白质和含氮物(氨化物)。
食物中粗蛋白含量以大豆最高,肉类次之。
粗蛋白英文为crude protein。
粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
由于一般蛋白质中含氮量约为16%，故在概略分析中，常用凯氏(Kjeldahl)法测出总氮量，再乘以系数6.25来求得。
实际上，它是食品、饲料中含氮化合物的总称，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等。
此外，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同，如小麦和多数谷物的换算系数为5.80，水稻5.95，大豆5.7，多数食用豆和坚果5.3，牛奶6.38等。
粗蛋白只是一个粗略的概念。
粗蛋白含量：下面我介绍几种常见物质的粗蛋白含量，仅供大家参考。
薏苡仁粗蛋白含量：13%-14%棉粕粗蛋白含量：可达40%以上农大白早糯玉米粗蛋白含量：3.41%蠡玉168 粗蛋白含量：9.63％台湾大青枣粗蛋白含量：0.86%上文介绍了几种农产品或水果的粗蛋白含量情况，如果需要更多的资料，大家可自己查阅。
粗蛋白测定：方法一：最简便也是最快键的方法，就是用蛋白质测定仪来测量。
本标准参照采用ISO 5983—1979 《动物饲料──氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。
1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
2 引用标准GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3 原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
2021年粗蛋白测定
凯氏定氮法欧阳光明（2021.03.07）仪器设备1 样品粉碎机或研钵2 分析筛孔径0.45nm（40目）3 分析天平感量 0.0001g4 消化炉或电炉5 滴定管酸氏 25 50ml6 凯氏烧瓶250ml7 凯氏蒸馏装置常量蒸馏氏或半微量蒸馏氏 8 锥形瓶 150 250ml9 容量瓶 100ml 10消化管 250ml 11定氮仪试剂及配制1 浓硫酸（GB 625）化学纯2 硫酸铜（GB 665）化学纯3 硫酸钾（HG 3-920）化学纯或硫酸钠（HG 3-905）化学纯4 400g/l NaOH溶液 40g NaOH（GB629）溶于100ml水中5 20g/l 硼酸溶液 2g硼酸（GB628）溶于100ml水中6 盐酸标准滴定溶液邻苯二甲酸氢钾法标定c(hcl)=0.1mol/l:盐酸标准滴定溶液。
8.3ml 盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中C(hcl)=0.2mol/l:盐酸标准滴定溶液，16.7ml盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中7 混合指示剂。
甲基红（HG3-958）1g/L乙醇溶液与溴甲酚绿（HG 3-1220）5g/l乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存3个月以内8 硫酸铵（GB 1396）分析纯，干燥9 蔗糖（HG 3-1001）分析纯10 硼酸吸收液。
10g/L硼酸溶液1000ml,加入甲基红1g/L乙醇溶液7ml，与溴甲酚绿1g/L乙醇溶液10ml，40g/L氢氧化钠溶液0.5ml,混合，至阴凉处保存期为1个月（全自动定氮分析仪用）测定步骤1 消化称取0.5-1g试样（含氮量5-80mg），准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶或消化管中，加入硫酸铜（CuSO4.5H2O）0.4g,无水硫酸钾（或无水硫酸钠）6g，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃珠。
把凯氏烧瓶或消化管放在通风柜里的电炉或消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，在加大火力（360-400度），直至溶液澄清后，再加热消化15min.。
实验粗蛋白测定仪对饲料中粗蛋白的测定
实验粗蛋白测定仪对饲料中粗蛋白的测定随着饲料工业的快速发展,饲料产量迅速增长,饲料中蛋白质含量的测定显得日益重要,虽然粗蛋白测定无法鉴别三聚氰胺和尿素等物质,但是在目前条件下,饲料中粗蛋白的测定仍然是评价饲料营养价值的重要指标。
饲料中蛋白质的含量是评价其质量高低的主要指标。
因此,蛋白质的测定一直是我们国家商品检验中十分重要的项目。
几年来,随着经济的发展,一些不法商贩常在食品和饲料中掺假作伪,谋取暴利。
所以,如何准确快速测定其中的成分,已成为各监督行业执法的重要依据。
饲料中粗蛋白的测定大致分为两种:凯氏定氮法和自动定氮仪法。
自动定氮仪法中要用到的粗蛋白测定仪是利用凯氏定氮原理,快速自动地进行蒸馏、滴定和计算。
托普云农粗蛋白测定仪也叫粗蛋白测定仪、氮磷钙测定仪（含消化炉）主要测定种子、粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤及其他农副产品中氮的含量。
粗蛋白测定仪微电脑控制，自动蒸馏控制、自动加水、自动水位控制、自动停水和水压过低报警。
实验用托普云农粗蛋白测定仪对饲料中粗蛋白的测定如下：1、实验原理：凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂：硫酸、混合催化剂、氢氧化钠、硼酸、混合指示剂、盐酸标准溶液、蔗糖、硫酸铵、硼酸吸收液。
3、仪器设备：粗蛋白测定仪、样品粉碎机或研钵、分样筛、分析天平、消煮炉或电炉、滴定管、凯氏烧瓶、凯氏蒸馏装置、锥形瓶、容量瓶、消煮管。
4、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
5、分析步骤（1）试样的消煮：称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
饲料中粗蛋白质的测定
饲料中粗蛋白质的测定一、目的掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并测定饲料中粗蛋白质的含量。
二、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在还原性催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都变为NH４＋，NH４＋立即被浓H2SO4吸收成为(NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合指示剂作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据不同饲料再乘以一定的换算系数(通常用6.25计算)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：2.(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO43.H3BO３+NH3→NH4H2BO34.NH4H2BO3+HCL→NH4CL+H3BO3三、仪器设备1.实验室用样品粉碎机：40目网筛。
2.分析天平：感量0.0001。
3.电子天平: 感量0.001。
4. 六联电炉: 6×1000W。
5.改良式半微量凯氏定氮仪(图1)。
6.酸式滴定管:25ml。
7.凯氏烧瓶:100ml。
8.烧杯:250ml。
9.三角瓶:150ml。
10.容量瓶:100ml。
11.移液管:10ml。
12.量筒: 10ml 。
13.量筒:25ml。
四、试剂1.浓H2SO4：化学纯,含量为98%，无氮。
2.混合催化剂：CuSO4:Na2SO4=1:10 化学纯。
3.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，阴凉处保存期不超过三个月。
此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。
在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。
4.2%硼酸吸收液：溶2g化学纯硼酸于100ml蒸馏水中，加甲基红—溴甲酚绿混合批示剂0.4ml。
饲料粗蛋白质GBT6432-94
饲料粗蛋白质的测定方法（GB/T6432-94）1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
2 引用范围GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3 原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
假如强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
4 试剂4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98%，无氮。
4.2 混合催化剂：0.4g 硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3-920）或硫酸钠（HG 3-908），均为化学纯，磨碎混匀。
4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40%水溶液（M/V）。
4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2%水溶液（M/V）。
4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3-958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3-1220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。
4.6.1 0.1mol/L盐酸（HCl）标准溶液：8.3mL盐酸（GB 622），分析纯，注入1000mL蒸馏水中。
4.6.2 0.02mol/L盐酸（HCl）标准溶液：1.67mL盐酸（GB 622），分析纯，注入1000mL 蒸馏水中。
4.7 蔗糖（HG 3-1001）：分析纯。
4.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
4.9 硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置于阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
5 仪器设备5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。
5.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。
5.3 分析天平：感量0.0001g。
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中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准
全氮和粗蛋白测定法
Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87
crude protein
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。
1 仪器
a. 分析天平:感量0.1mg;
b. 凯氏烧瓶;
c. 铁架、铁圈、石棉网;
d. 煤气灯(或电炉);
e. 干燥管、抽气管、橡皮管;
f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;
g. 粉碎机等。
2 试剂与溶液
2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。
2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂
硫酸铜: 硫酸钾= 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。
2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。
2.4 4%硼酸溶液
称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。
2.5 浓硫酸(分析纯)
2.6 40%氢氧化钠溶液
称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。
2.7 0.1N盐酸标准溶液
量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。
2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,
每份重约0.17g,称准至0.0002g。
分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动,使之溶解。
再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2 滴,然后用待标定的盐酸
溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。
计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算
G
N = ━━━━━━ (3)
V ×0.05299
式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;
G——无水碳酸钠之重量,g;
V——盐酸溶液之用量,mL;
0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。
2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。
记下耗用mL数。
计算:
N NaOH×V NaOH
盐酸当量= ━━━━━━━━ (2)
25
式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;
V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;
25——待标定盐酸吸取量,mL。
2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N,可根据初标定浓
度加水或盐酸,多次标定后最终达到。
为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。
3 操作方法
3.1 消化
准确吸取原样2mL(或称取固体样品0.5g,称准至0.0002g)。
置于干燥的500mL凯氏
烧瓶中,加入硫酸铜—硫酸钾混合试剂5g,浓硫酸8mL,然后放入通风橱内(烧瓶口上放
置小漏斗),加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,消化液呈浅绿色后,再继续加热10min
左右,一般消化时间不超过30min。
也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵,
借以将腐蚀性气体抽去。
3.2 蒸馏
冷却后,缓慢加入蒸馏水120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶
液35mL及混合指示剂2滴的250mL锥形瓶中的液面下,然后,沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧化钠溶液40mL,玻璃珠4～5粒或锌粒1～2粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。
连接
好后,检查是否漏气,缓缓摇匀,接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止
蒸馏。
3.3 滴定
将锥形瓶内接收液用0.1N盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。
记下耗用mL数。
平行试验允许误差为0.2mL。
同时做试剂空白试验。
4 计算
4.1 全氮TN含量计算如下:
(V -Vo)×N×0.014
TN = ━━━━━━━━━━×100 (3)
W
式中:V——样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;
Vo——试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;
N——盐酸标准溶液当量浓度;
0.014——氮的毫克当量;
W——样品mL数或g数;
TN——样品全氮含量,g/100mL或g。
4.2 原料粗蛋白P计算如下:
P =6.25TN (4)
式中:P——原料粗蛋白含量,g/100mL或g;
6.25——蛋白质中含氮系数;
TN——全氮含量,g/100mL或g。
━━━━━━━━━━
附加说明:
本标准由商业部副食品局提出。
本标准由上海市酿造科学研究所起草。
本标准主要起草人须凤高。
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中华人民共和国商业部1987-11-20批准1988-07-01实施。