培养基的灭菌及保存方法
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。
根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。
2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。
注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。
3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。
使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。
4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。
对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。
二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。
根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。
2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。
3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。
4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。
通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。
5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。
将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。
一般培养基的灭菌条件
一般培养基的灭菌条件在生物学和微生物学实验中，培养基是非常重要的试剂，它提供了微生物生长所需的营养和环境。
培养基的制备是一个非常关键的过程，一旦受到污染就会对实验结果产生影响。
因此，在制备培养基前，必须对培养基进行灭菌处理，以杀死任何可能存在的微生物。
以下是关于灭菌条件的详细介绍和指导意义。
1.高温高压灭菌法高温高压灭菌法通常用于大容量的液体培养基或密封器皿，可以有效地杀灭大部分微生物，并且不会损坏培养基的成分。
这种方法需要使用高压灭菌器，将培养基加入到无菌的容器中，紧密密封并置于灭菌器中。
然后将温度升高到121°C，保持压力大约为15 psi，持续压力下维持 20 - 30 分钟，以确保培养基中微生物的完全灭活。
2.化学灭菌法化学灭菌法的原理是通过添加强效的消毒剂来杀死微生物。
消毒剂可以破坏微生物的细胞壁或膜，使其不能生长和繁殖。
最常用的消毒剂是氯己定、过氧乙酸等。
但是，这种方法可能导致一些残留物对微生物的生长产生影响，所以在使用化学消毒剂时需要注意浓度的控制和多次冲刷。
3.滤过灭菌法滤过灭菌法是利用过滤器将培养基中的微生物进行过滤，以达到灭菌的目的。
过滤器的孔径通常为0.22微米，可以有效地过滤掉绝大部分的微生物。
这种方法对于无菌条件较严格的实验，如病毒培养等非常有用。
但是需要注意的是，需要使用无菌装置将培养基进行滤过，在保证过滤器无菌的情况下进行操作。
在灭菌过程中，需要注意不同材料的适合灭菌方式。
对于易挥发的溶液，可以使用过滤灭菌法或化学法；对于含有糖酵母等易抗菌的成分的物资，可以使用过滤灭菌法或高温高压气炉灭菌；对于固体培养基，可以使用高温高压气炉灭菌或化学灭菌法。
灭菌后应密封保存，在无菌条件下储存。
在制备培养基时一定要注意消毒工作，确保培养基的质量与纯度。
综上所述，不同的培养基灭菌方法适用的条件不同，人们可以选择不同的灭菌方式来确保培养基的质量。
在灭菌过程中一定要注意保证无菌操作，避免污染并保存存储条件，以便取样和使用。
植物生物技术实验一 植物培养基的配制灭菌和保存
实验一植物培养基的配制、灭菌与保存一、实验目的1、学习和了解相关仪器的操作步骤和注意事项；2、学习和了解培养基母液的配制方法；3、掌握培养基的配制方法；4、学习和了解培养基、器皿和相关设备的灭菌方法。
二、主要用具和仪器设备烧杯（1000mL 、500mL 、100mL 、50mL ）；量筒（2000mL 、1000mL 、500mL 、250mL 、100mL 、50mL 、25mL 、10mL ）；容量瓶（1000mL 、500mL 、250mL 、100mL 、50mL 、25mL ）；试剂瓶（1000mL 、500mL 、200mL 、100mL 、50mL ）；培养基瓶（三角瓶）（1000mL 、500mL 、200mL ）；玻璃棒等。
1、玻璃器皿二、主要用具和仪器设备油性标记笔、药勺、称量纸、棉塞、锡箔纸、移液枪（5mL 、1mL 、200µL 、100µL ）和对应的枪头、移液管（5mL 、2mL 、1mL 、0.5mL ）和洗耳球、电子天平（感量为0.1 mg 、10 mg ）、pH 计、灭菌锅、微波炉、磁力搅拌器、电磁炉、超净工作台、冰箱、冰柜等。
2、用具和仪器设备三、实验药品NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O、甘氨酸、盐酸硫氨素（V-B1）、·4H2O、盐酸吡哆素（V-B6）、烟酸、肌醇、MnSO4ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、NAA、6-BA、KT、2,4-D、琼脂、蔗糖、NaOH、HCl。
四、实验内容培养基配制方案MS1（500mL）：MS基本培养基+2,4-D 2 mg/L + KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L、琼脂8 g/L（烟草愈伤组织诱导）;MS2（800mL）：MS基本培养基+NAA 0.2 mg/L + 6-BA1 mg/L+蔗糖30 g/L、琼脂8 g/L（烟草苗的微繁殖）;MS3（500mL）：MS基本培养基+NAA 1 mg/L + KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L（烟草细胞悬浮培养）。
废弃培养基的处理方法
废弃培养基的处理方法废弃培养基是实验室中经常会遇到的问题，正确的处理方法能够有效地减少环境污染和资源浪费。
本文将介绍几种常见的废弃培养基处理方法，以期能够帮助读者更好地处理废弃培养基。
一、废弃培养基的处理方法1. 灭菌处理：将废弃培养基装入耐高温的容器中，进行高压蒸汽灭菌处理。
灭菌的目的是杀死培养基中的微生物，防止其进一步生长和传播。
灭菌处理后的废弃培养基可以安全地处理或倾倒到下水道中。
2. 厌氧处理：对于含有厌氧菌的废弃培养基，可以选择采用厌氧条件下的处理方法。
将废弃培养基转移到密闭容器中，添加适量的厌氧菌抑制剂，如大肠杆菌抑制剂，然后密封容器并放置在恒温箱中，保持适宜的温度和湿度，让厌氧菌逐渐降解分解废弃培养基。
3. 分离处理：对于含有有害菌株的废弃培养基，可以选择将其进行分离处理。
首先将废弃培养基进行离心，分离出上清液和沉淀物。
然后将上清液通过过滤器或离心机进行进一步处理，以去除其中的微生物和有害物质。
最后，对分离出的沉淀物进行高温烧毁或其他适当的处理方式，确保彻底杀死其中的微生物。
4. 培养基回收：对于未被污染或污染较轻的废弃培养基，可以选择进行回收利用。
将废弃培养基进行过滤或离心，去除其中的微生物和杂质。
然后，对过滤或离心后的培养基进行再消毒处理，确保其中的微生物被杀死。
最后，将处理后的培养基进行保存，以备后续实验使用。
5. 环保处理：对于大量的废弃培养基，可以选择将其交由专门的废物处理机构进行处理。
这些机构拥有先进的处理设备和技术，能够高效地处理大量的废弃培养基，并将其转化为无害的物质。
这种方式能够有效减少对环境的污染，并提高资源的利用效率。
二、废弃培养基处理的注意事项1. 废弃培养基的处理应符合相关法规和规定，遵守实验室安全操作规程。
2. 废弃培养基的处理应避免直接倾倒到自然环境中，以免造成水体污染和生态破坏。
3. 对于含有有害菌株的废弃培养基，应采取严密的处理措施，防止其扩散和传播。
对培养基灭菌的方法是
对培养基灭菌的方法是
培养基灭菌的方法有多种，以下是常用的几种方法：
1. 高温灭菌法：将培养基装入玻璃瓶或胶管中，使用高压蒸汽灭菌器在121条件下，持续加热15-30分钟。
2. 过滤灭菌法：通过滤器将培养基过滤，滤掉其中的微生物，常见的滤器有0.22μm孔径的滤膜。
这种方法适用于含有热敏感物质的培养基。
3. 紫外线灭菌法：将培养基暴露在紫外线照射下一段时间，紫外线的照射能够杀死细菌和其他微生物。
但需要注意的是，紫外线只能灭菌表面，对于埋在培养基深处的微生物无法有效灭菌。
4. 化学物质灭菌法：在培养基中加入消毒剂，如过氧化氢、乙醛等，使其达到一定浓度并长时间接触，以达到消灭微生物的目的。
这种方法对于含有大量有机物的培养基不适用。
以上所述的方法适用于不同类型的培养基和不同的实验要求，选择合适的灭菌方法需要根据具体情况进行判断和决定。
培养基灭菌的方法
培养基灭菌的方法培养基灭菌是避免实验中污染菌的一种重要措施，它可以减少和控制气体、液体、固体中微生物的数量，维持实验环境更加清洁。
培养基灭菌的方法有很多种，包括物理、化学和生物方法。
物理方法是通过改变实验室环境的温度、湿度、压力等条件来抑制细菌的生长传播。
比如，通过改变温度可以达到消毒和灭菌的目的，一般常用的温度是121℃，保持15min即可有效灭菌；也可以使用冷冻的方法，在-80℃条件下保持二十四小时也可达到消毒灭菌的效果。
化学方法是通过添加消毒剂、杀菌剂等活性物质来抑制细菌的生长传播。
一般常用消毒剂有次氯酸钠、碘酒、氯乙酸、高锰酸盐及表面活性剂等；杀菌剂有消毒酒精、消毒蜡、有机氯类消毒剂如溴氰菊酯等，用于实验室环境消毒灭菌时，一般要均匀滴于相应物体表面，不宜过量，以免影响实验结果。
生物方法是利用生物学方法抑制细菌的生长传播，比如施加抑菌素、靶性抗菌物质等。
施加抑菌素是指把抗生素等特定抑菌物质添加到实验培养基中，使抗生素或其他来源的特定物质与细菌进行竞争，有效地抑制细菌的生长。
同时，对抗菌物质的靶性也可以实现灭菌，比如抗细菌抗生素，它们可以有效地清除实验室环境中的有害细菌，从而有效地抑制细菌的传播。
总之，实验室环境的消毒灭菌有多种方法可供采用，选择最佳的方法要根据实际情况，选择性使用最合适的方法，以达到安全、有效的消毒灭菌目的。
正确的消毒灭菌措施，不仅可以避免实验中的污染，也可以使实验培养基获得更高的品质。
培养基灭菌的方法有许多，灭菌的原则也应相结合，以保证实验结果的准确性，为实验工作提供有力的技术支持。
然而，在灭菌过程中仍需注意安全，以避免灭菌后所产生的有毒副产物对人体健康造成伤害，尤其是使用化学方法灭菌时，应确保操作安全，并记录灭菌后培养基中有害成分的数量，以确保培养基质量。
此外，在选择灭菌方式时，应根据细菌的种类和感染程度，采用最有效的方法，以获得更好的灭菌效果。
综上所述，实验室环境灭菌是一项重要措施，可以有效地预防细菌的污染，但在实施灭菌的过程中也应注意安全，合理选择和使用最有效的方法，以达到最佳的灭菌效果。
培养基常用的灭菌方法
培养基常用的灭菌方法培养基是适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。
按营养成分和用途不同，分为基础、合成、营养、鉴别、选择和厌氧培养基。
按物理形态分为固体、半固体和液体三类。
根据细菌的种类和培养目的不同，可采用不同的培养基。
1、灭菌方法培养基的灭菌方法主要有两种，湿热灭菌及0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
与过滤相比，高压蒸汽灭菌的工作强度小，成本较低但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。
大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤除菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 湿热灭菌蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。
湿热灭菌的效果取决于致死温度和致死时间。
致死温度是杀灭微生物的极限温度。
致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
灭菌时一般是在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。
为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纤维素、硝酸纤维素等等。
一般采用正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有高流速、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜、一体式过滤器（囊式过滤器）或筒式滤芯除菌。
微孔滤膜需配套不锈钢夹具，中间可夹放0.22um滤膜。
使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。
筒式滤芯亦需配套不锈钢滤壳。
如果是少量过滤(<200ml)可选配针头过滤器。
常用培养基制备灭菌与消毒
分生孢子丝
气生菌丝 琼脂表 面 基内菌丝
The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝） and aerial mycelium （气 生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝 分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生 成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、 弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。 孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等 等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定 的重要依据。 放线菌的菌落早期绒状同细 菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈 粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验 日期。
2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
微生物培养技术
1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
冰箱中
查氏合成培养基
查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的 培养基,其配方如下：
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在5060℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至 糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤， 调pH为6.0。
有二层小梗
青霉
青霉的形态结构 A单轮型 B非对称型 C对称二轮型
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培养基的灭菌及保存方法
灭菌方法
1、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。
灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。
消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。
将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。
灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。
暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。
含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA
3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。
细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。
过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
保存方法
已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后，立即放在平整的台面上，若大批量生产可用果箱装好并标记好其用选后，送到接种室，让其自然冷却凝固。
灭好的培养基最好经过3d的预培养，以便观察培养基是否彻底灭菌，这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养基，在接种前被检出，可避免杂菌污染而造成不必要的损失，这点对少而重要的材料尤其值得注意。
但是在同等条件下经多次使用无污染后，就没必要再摆3d后才使用，而是冷却凝固后就可使用了。
(1)防尘
已经灭好菌的培养基要注意防尘。
如果培养基在卫生条件差的地方贮存，依附在尘埃中的细菌、真菌等会落在培养瓶表面，使用前若不进行表面灭菌处理，在接种时就容易随着气流进入容器，使其受到污染，影响组织培养工作的顺利进行，因此培养基必须放在干净、卫生的接种室内。
(2)避光
备用培养基应贮于光线较暗的房子里面，因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。
在光照下，一些培养基添加物的成分也会发生变化。
在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子上加盖厚的黑布，这样可以使培养基免受光线的影响。
(3)恒温
培养基冷却后，可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏3～5周；在大批量生产中可以放在装有空调的接种室内，摆放2周左右，温度控制在20℃以内；若摆放时间为2～5d，温度不超过28℃即可。
但是在培养基摆放过程中温度不应过高，同时还应避免温度有较大幅度的变化，随着贮藏室气温的升高或降低，装有培养基容器内的空气会跟着膨胀或缩小，带来菌类进入培养基，造成贮藏期间培养基的大量污染。
(4)定期更新
培养基不宜长期贮存，特别是固体培养基。
随着时间的推移，培养基里的水分以气态选出，培养基的含水量便逐渐降低，使培养基的浓度和理化性状发生改变，对以后的外植体培养或植株的继代转接及生根培养均不利；培养基贮存过长，空气中夹杂的细菌、真菌也可能降落到培养基表面引起污染；当贮藏含有吲哚乙酸、椰乳等物质的培养基时，环境中的光线会使吲哚乙酸发生光解，也会使椰乳所含的一些成分发生变化。
因此结合生产任务做好培养基的配制和使用计划十分必要，一般情况下培养基贮存时间不应超过1周。
转自：中国风景园林网。