可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒说明书
可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯的遗传转化
可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯的遗传转化可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯的遗传转化引言：马铃薯（Solanum tuberosum）是世界上重要的食用作物之一，其主要利用部位为地下块茎。
地下块茎中主要储存的是淀粉，淀粉的品质和含量直接影响马铃薯的食用和加工价值。
可溶性淀粉合成酶SSIII基因在淀粉的合成和积累中发挥着重要作用。
为了改良马铃薯的淀粉性质，研究人员尝试将可溶性淀粉合成酶SSIII基因导入马铃薯，通过遗传转化的方式实现马铃薯的基因改造。
一、马铃薯的可溶性淀粉合成酶SSIII基因可溶性淀粉合成酶SSIII基因编码的酶参与了淀粉的聚合和支链的形成，对淀粉的颗粒结构和性质有直接影响。
在马铃薯中，淀粉是地下块茎的主要成分，通过导入可溶性淀粉合成酶SSIII基因，可以改变马铃薯淀粉的性质和含量，提高马铃薯的实用价值。
二、马铃薯的遗传转化技术马铃薯的遗传转化技术是将外源基因导入马铃薯细胞中，使其表达产生新的性状或增强原有性状的方法。
目前常用的遗传转化技术包括农杆菌介导的转染法、基因枪法和电穿孔法。
这些方法都能够有效地实现外源基因的导入，但具体的应用需要综合考虑基因的表达效率、稳定性以及转基因植株的安全性等因素。
三、基于可溶性淀粉合成酶SSIII基因的马铃薯遗传转化研究研究人员通过农杆菌介导的转染法将可溶性淀粉合成酶SSIII基因导入马铃薯，经过筛选和鉴定获得了转基因植株。
通过PCR、Southern blot等方法验证了外源基因的整合和稳定性，并通过RT-PCR分析了基因在转基因植株中的表达情况。
结果表明，可溶性淀粉合成酶SSIII基因成功地导入了马铃薯细胞，转基因植株表现出了不同程度的淀粉性状变化。
四、可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯淀粉性质的影响经过长期培养和观察，研究人员发现，可溶性淀粉合成酶SSIII基因的导入对马铃薯淀粉的性质产生了显著影响。
转基因马铃薯的淀粉颗粒更为均匀，颗粒大小更为一致。
山药块茎膨大期淀粉积累及淀粉合成相关基因表达分析
中国瓜菜2023，36（3）：69-76山药（Dioscorea opposita Thunb.）是薯蓣科（Dioscoreaceae）薯蓣属（Dioscorea L．）一年生或多年生缠绕性草质藤本，为单子叶植物[1]。
山药块茎中含有丰富的淀粉（70%）、蛋白质（9%）、还富含矿物质、尿囊素、皂苷等活性物质，并且与其他作物如马铃薯、木薯和甘薯相比，山药有着更好的感官特性，因此，近年来对山药的需求量逐年增多[2]。
淀粉是山药块茎中最丰富的碳水化合物，含量约占块茎干质量的80%左右。
淀粉积累不仅影响块茎膨大，对山药直接经济效益的产生和品质形成山药块茎膨大期淀粉积累及淀粉合成相关基因表达分析索宁宁，张艳芳，高圆丽，赵令敏，葛明然，刘杰才，霍秀文（内蒙古农业大学园艺与植物保护学院呼和浩特010019）摘要：为探讨山药块茎膨大期淀粉的积累机制，以大和长芋山药为试验材料，测定了块茎膨大期各类淀粉含量、淀粉合成关键酶活性以及淀粉合成相关基因的表达水平。
结果表明，山药块茎膨大期总淀粉、直链淀粉及支链淀粉的积累呈先增加后降低的趋势，种植后150d支链淀粉占总淀粉含量的88.35%，总淀粉含量的增加主要是支链淀粉的积累；ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）、淀粉分支酶（SBE）与支链淀粉的积累呈极显著正相关，是直接参与支链淀粉积累的重要功能酶。
AGPase、SSⅡ、SSⅢ、SBEⅡ基因的表达量与支链淀粉含量呈极显著正相关，是支链淀粉积累的关键因素。
SBE对淀粉积累表现为直接正效应，AGPase和束缚态淀粉合成酶（GBSS）在直链淀粉积累中体现为直接正效应。
这些研究对揭示山药块茎淀粉合成的分子机制具有重要意义。
关键词：山药块茎；淀粉积累；淀粉合成关键酶；基因表达中图分类号：S632.1文献标志码：A文章编号：1673-2871（2023）03-069-08Analysis of starch accumulation and starch synthesis-related gene expres-sion during tuber expansion stage of yamSUO Ningning,ZHANG Yanfang,GAO Yuanli,ZHAO Lingmin,GE Mingran,LIU Jiecai,HUO Xiuwen（College of Horticulture and Plant Protection,Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot010019,Inner Mongolia,China）Abstract:In order to explore the accumulation mechanism of starch during the expansion stage in yam tubers,we investi-gated the changes in starch content of various types,activity of key enzymes in starch synthesis and gene expression pat-terns of starch synthesis key enzymes in Dahechangyu yam tubers.The results showed that the accumulation of total starch,amylose and amylopectin showed a trend of increasing first and then decreasing during tuber expansion stage of yam,and amylopectin accounts for88.35%of the total starch content150days after planting.The increase of total starch content mainly results from amylopectin accumulation.Glucose-1-phosphate adenylyltransferase（AGPase）and starch-branching enzyme（SBE）have significant positive correlation with the accumulation of amylopectin,and are impor-tant functional enzymes directly involved in the accumulation of amylopectin.The gene expression level of AGPase,SSII, SSIII,SBEII was positively correlated with amylopectin content,which was the key factor of amylopectin accumulation inyam tubers.SBE showed a directly positive effect on starch accumulation,AGPase and granule bound starch synthase have directly positive effect on amylose accumulation.These studies are of great significance to reveal the molecular mechanism of starch synthesis in yam tubers.Key words:Yam tuber;Starch accumulation;Starch synthesis key enzyme;Gene expression收稿日期：2022-11-01；修回日期：2023-01-31基金项目：国家自然科学基金（31860558）；内蒙古自治区科技计划项目（2020GG0044）作者简介：索宁宁，男，在读硕士研究生，主要从事蔬菜种质资源与生物技术研究。
冠菌素对玉米籽粒灌浆特性与淀粉合成的调控效应
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2019.93007
/ mail: zwxb301@
冠菌素对玉米籽粒灌浆特性与淀粉合成的调控效应
鱼海跃 韩紫璇 张钰石 段留生 张明才* 李召虎
植物生长调节剂教育部工程研究中心 / 中国农业大学农学院, 北京 100193
摘 要: 玉米产量与籽粒灌浆特性紧密相关, 调控籽粒灌浆特性是实现玉米高产的重要途径之一。本研究采用不同 浓度冠菌素对灌浆期玉米(吐丝后 10 d)进行叶面喷施处理, 研究冠菌素(coronatine, COR)对玉米籽粒灌浆特性、淀粉 含量和淀粉合成关键酶活性及其基因表达的调控效应。2 年田间试验研究结果表明, COR 对玉米果穗性状、产量、籽 粒灌浆和淀粉合成的调控具有明显的浓度效应, 适宜浓度 COR (1.0 mg L–1)处理显著降低玉米果穗秃尖长度, 增加穗 粒数和千粒重, 提高籽粒灌浆速率, 延长灌浆持续期, 提高产量。此外, 适宜浓度 COR 处理显著提高玉米籽粒灌浆 过程中淀粉合成相关酶 AGPase、SSS、GBSS 和 SBE 的活性, 上调淀粉合成关键酶基因 ZmSH1、ZmSH2、ZmWX1 和 ZmAE1 的表达量, 促进籽粒支链淀粉、直链淀粉和总淀粉的积累, 提高了籽粒淀粉含量。研究结果明确了 COR 对玉米籽粒形态建成与物质积累的调控效应, 为玉米增产增效栽培提供了新的技术手段。 关键词: 冠菌素; 玉米; 灌浆特性; 淀粉合成; 产量
Engineering Research Center of Plant Growth Regulator, Ministry of Education / College of Agronomy and Biotechnology, China Agricultural University, Beijing 100193, China
莲藕可溶性淀粉合成酶基因LrSSS的克隆与表达特性分析
园艺学报，2015，42 (3)：496–504.Acta Horticulturae Sinica 496doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0906；http：//www. ahs. ac. cn 莲藕可溶性淀粉合成酶基因LrSSS的克隆与表达特性分析张 莉，印 荔，杨见秋，程立宝，李良俊*（扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州 225009）摘 要：以莲藕品种‘美人红’叶片为试材，利用RACE结合RT-PCR技术克隆得到全长4 080 bp的莲藕可溶性淀粉合成酶基因（LrSSS）cDNA序列（GenBank登录号：KP201636），其中开放阅读框3 696 bp，编码1 231个氨基酸；该序列与甜瓜、葡萄SSS基因编码氨基酸序列同源性较高，分别达79%、69%。
LrSSS 所编码的氨基酸序列包含3个典型的碳水化合物结合结构域（CBM_25）和1个淀粉合成酶催化域（Glyco_transf_5）。
LrSSS 表达分析表明，莲藕根状茎膨大具3节段时，在终止叶叶片中的表达量最高，其次为后把叶叶片，终止叶叶柄表达量最少；在根状茎膨大至4节段时，LrSSS在第1、2节段根状茎中表达量较高，在第3、4节段根状茎中表达量较低，表明在第1、2节段根状茎形态基本建成后LrSSS在调控产物转化为淀粉过程中可能起到重要作用。
关键词：莲藕；淀粉；LrSSS；克隆；表达中图分类号：S 645.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）03-0496-09Cloning and Expression Profiling Analysis of Soluble Starch Synthase Gene in Lotus RhizomeZHANG Li，YIN Li，YANG Jian-qiu，CHENG Li-bao，and LI Liang-jun*（School of Horticulture and Plant Protection，Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225009，China）Abstract：The soluble starch synthase gene（LrSSS）was cloned from‘Meirenhong’，a species of lotus rhizome based on reverse transcription polymerase chain RT-PCR and RACE methods with leaf as template in the present study. The full-length of LrSSS（GenBank accession number KP201636）was 4 080 bp in nucleotide containing an open reading frame of 3 696 bp which encoding 1 231 amino acid. Phylogenetic analysis showed that LrSSS had 79%，69% homolog with melon，grape respectively. LrSSS contained three typical carbohydrate domains（CBM_25）and one catalyzing domains（Glyco_transf_5）relevant to starch synthesis. The expression in different temporal and spatial of LrSSS was determined by RT-PCR method. The results was that LrSSS showed the highest expression in the last leaf，and then followed by the stalk of the penultimate leaf，the lowest expression was found in the the stalk of the last leaf. In addition，the expression of LrSSS was higher in the first and second internodes than in the third and fourth internodes of rhizome，suggesting that LrSSS might play an important role in starch synthase processes.收稿日期：2014–12–15；修回日期：2015–02–01基金项目：江苏省科技支撑计划项目（BE2013388）；江苏省普通高校研究生科研创新计划项目（CXLX13-918）* 通信作者Author for correspondence（E-mail：ljli@）张 莉，印 荔，杨见秋，程立宝，李良俊.莲藕可溶性淀粉合成酶基因LrSSS的克隆与表达特性分析.园艺学报，2015，42 (3)：496–504. 497 Key words：lotus rhizome；starch；LrSSS；clone；expression莲藕（Nelumbo nucifera Gaertn）是睡莲科莲属多年生宿根水生草本植物（赵有为等，1999），原产中国和印度（中国蔬菜栽培学，2009），是中国栽培面积最大的特色水生蔬菜。
可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯的遗传转化
可溶性淀粉合成酶SSIII基因对马铃薯的遗传转化马铃薯(Solanum tuberosum L.)是淀粉生产中重要的农作物之一。
淀粉是大多数植物当中主要的贮藏碳水化合物,它分为直链淀粉和支链淀粉两种。
支链淀粉占总淀粉含量的80%左右,是由α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键连接而成的具有分支结构的多聚糖,而直链淀粉是由α-1,4糖苷键连接而成的线性多聚糖。
目前在生产上推广的马铃薯栽培品种,其淀粉糊化温度、粘度、冻融稳定性都不太理想。
因此,选育出更适合于加工业领域的马铃薯新品系,对于马铃薯的淀粉加工产业有重要的意义。
本研究通过根癌农杆菌介导法将组成型表达启动子CaMV 35S 和块茎特异型表达启动子CIPP驱动的可溶性淀粉合成酶(SSⅢ)基因导入到马铃薯栽培品种克新1号和克新4号中,获得转基因马铃薯植株,为进一步明确SSⅢ基因在淀粉合成中的功能和获得淀粉改良的马铃薯新种质提供基础。
取得的主要研究结果如下:1.以马铃薯栽培品种克新1号和克新4号的试管薯为供体材料,分别用组成型表达启动子CaMV 35S和块茎特异型表达启动子CIPP驱动的可溶性淀粉合成酶(SSⅢ)基因干扰表达载体pBI-SSⅢ-RNAi和pBIC-SSⅢ-RNAi进行遗传转化,获得了65株转化植株。
通过PCR检测初步表明有31株中SSⅢ基因的干扰片段已整合到马铃薯基因组中。
2.将PCR结果呈阳性的马铃薯转基因植株移栽至温室蛭石中,4个月后收获微型薯。
通过半定量RT-PCR检测初步说明有19株中SSⅢ基因在转录水平上已受到了抑制。
3.对转SSⅢ基因马铃薯淀粉颗粒形态、支/直淀粉含量及淀粉中磷含量进行了观察和测定。
结果表明有9个转基因植株的淀粉颗粒形态发生了明显的变化,其淀粉颗粒中心出现裂痕;这9个转基因马铃薯植株中直链淀粉含量都不同程度的有所增加,其中直链淀粉含量最低为14.55 %,最高为17.59 %,比未转基因的对照植株增加了2.68 %～29.05 %;与未转基因的对照植株相比,转基因植株的支/直淀粉比都有不同程度的降低;与未转基因的对照植株相比,克新1号的6个转基因株系的淀粉磷含量降低了9.94 %～58.36 %,克新4号的3个转基因株系的淀粉磷含量降低了34.76 %～56.04 %。
水稻淀粉合成相关基因研究
式
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
15
SSSⅢ 与SSSⅡ相比，更倾向于合成长的B1和B2 链 (DP=25～35)(Edwards等，1999)。只在一个分
支簇内出现的B链称B1链，连接2和3个分支簇的B 链分别称B2和B3链。
决定口感的好坏。
5/22/2012
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
2
外观品质鉴定相对简单； 蒸煮食味品质(eating and cooking qualities, ECQs)包括
直链淀粉含量(Amylose Content, AC)、胶稠度(gel consistency, GC)和糊化温度(gelatinization temperature, GT)，ECQs是稻米品质中最重要也是最复杂的指标， 传统鉴定方法相对繁杂。 优质稻米一般具有适中的表观直链淀粉含量 (Apparent Amylase Content，AAC)，高的GC和低的 GT。
The boxes represent exon regions: shaded regions are translated, and nonshaded regions are transcribed but not translated. Lines connecting boxes correspond to intron regions. The sizes of the gene and sequenced region are indicated above the boxes. The numbers 1, 2 and 3 indicate the locations of single nucleotide polymorphisms (SNPs) 1, 2 and 3 analyzed for phenotypic associations. Bold italic sequences indicate codons with nonsynonymous mutations.
籽粒淀粉合成酶与淀粉合成关系的研究进展
籽粒淀粉合成酶与淀粉合成关系的研究进展王自布;黄燕芬;吴坤;任翠娟;姜金仲【摘要】Starch biosynthesis is a complex biochemical process that involves in a series of enzymes reaction. This paper reviews the function of starch synthase ( SSS ) , starch branching enzymes ( SBE ) , starch debranching enzymes ( DBE ) and their isoenzymes in the process of starch synthesis, and discusses the relationship between starch synthase and starch synthesis pathway in the grain, then prospects the research focus on the studies of complex biochemical reactions in starch synthesis pathway.%淀粉的生物合成是一个复杂的生化过程，涉及一系列酶参与其中。
本文综述了淀粉合成过程中淀粉合成酶（ SSS）、淀粉分支酶（ SBE）、淀粉去分支酶（ DBE）及其同工酶在淀粉合成过程的功能，及与淀粉合成关系的研究进展，并针对淀粉合成途径研究中复杂的生化反应和研究热点进行了展望。
【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2013(000)005【总页数】6页(P336-341)【关键词】小麦籽粒;淀粉;淀粉合成酶【作者】王自布;黄燕芬;吴坤;任翠娟;姜金仲【作者单位】贵州师范学院，贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018;贵州师范学院，贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018;贵州师范学院，贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018;贵州师范学院，贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018;贵州师范学院，贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018【正文语种】中文植物的籽粒是储藏器官，由于没有叶绿体存在，不能进行光合作用，因此其能量需要通过叶片进行光合作用来提供，叶片通过卡尔文循环固定CO2，在造粉体中合成淀粉，并通过一系列运输途径到达储藏器官，以淀粉形式储存能量。
words-Heat stress
Heat Stress Effects on Protein Accumulation of Maize Endosperm Ⅰ. Words, Phrases and Their Expressions1. heat stress 热胁迫,高温胁迫high-temperature stressheat shock2. maize 玉米corn3. endosperm 胚乳embryo 胚, 子房4. be detrimental to/for 对…有害,不利于…5. dry matter accumulation 干物质积累6. cell division 细胞分裂disruption of cell division 破坏细胞分裂cell wall 细胞壁, cell nucleus 细胞核cell membrane 细胞膜cell multiplication 细胞增殖7. metabolism 代谢sugar metabolism 糖代谢8. starch biosynthesis 淀粉生物合成9. mechanism 机制10. alter 改变11. maize ear 玉米穗12. pollination 受精,受粉5 d after pollination 受粉(精) 5天之后13. solubility 溶液, 溶解性14. zein 玉米醇溶蛋白,玉米蛋白Glutelin 谷蛋白Albumin 清蛋白Globulin 球蛋白Prolamin 醇溶蛋白15. methionine 蛋氨酸,甲硫氨酸16. degradation 降解synthesis 合成17. fluctuation 波动18. lag phase 滞留期,停滞期lag phase of growth 延迟生长期19. cytokinin 玉米素,细胞分裂素20. ADPG glucose pyrophosphorylase ADPG 葡萄糖焦磷酸化酶21. soluble starch synthase 可溶性淀粉合成酶22. at later developmental stage 发育后期at early developmental stage 发育早期23 enzyme 酶24. be susceptible to 易受影响的,易得病的be susceptible to damage 易受伤害She is susceptible to cold. 她易感冒.He is susceptible to suggestions. 他没有主见be sensitive to25. cereal 谷类include wheat, maize, rice, barley et al.26. desiccation 干燥27. category 种类, 类别28. molecular 分子molecular weight 分子量kDa 千道尔顿(Dalton)29. amino acid 氨基酸30. extract 提取31. aleurone layer 糊粉层32. scutellum 盾片,角质鳞片33. incorporation 结合Materials and methods34. silt loam soil 淤积肥土35. inbred 近交(自交)系hybrid 杂交种36. amenable 顺从的,服从的, 可接受的, 可处理的,可解决的37. in vitro culture/ in vitro: 体外的,人工的outside the living body and in an artificial environment(growth of cell in vitro, in vitro study)in vivo:体内的, 自然的In vitro (Latin: "within glass") means within a test tube, or, more generally, outside a living organism or cell. Alternatives of in vitro include in vivo and in silico: within an organism, and computational, respectively.As many experiments that deal with molecular biology are conducted outside of organisms or cells, and the conditions do not necessarily represent the conditions inside the cell, results are often annotated with in vivo, in vitro, or in silico, as applies.38. regime 体制temperature regime 温度模式irrigation regimes 灌溉模式/制度39. photoperiod 光周期40. ear shoot41. silk emergence 吐丝期42. self-pollination 自交sib-pollination 近亲杂交43. three- to four-leaf stage 3到4叶期44. pericarp 果皮45. pedicel 花梗, 茎46. pulverize 研磨成粉47. meal 粗粉48. defatted 脱脂的49. acetone 丙酮ethanol 乙醇50. solvent 溶剂51. microcentrifuge 微量（型）离心机centrifugation 离心过滤52. buffer 缓冲液53. radiolabeled 放射标记的，用…示踪的radioactivity 放射强度/活性54. equilibration 平衡Results55. analogous 类似的, 相似的, 可比拟的56. growth chamber-grown 生长箱(室)种植的57. maternal 似母亲的,母亲的58. fraction 片段,小部分59. protein composition 蛋白质组分60. encode 编码encoded by one or several genes 由一个或多个基因所编码61. assay 化验62. vitro assay63. radioactivity 放射能/活性64. phenotype 显型65. ovary 子房66. cavity 腔,穴67. transcript 转录68. localization 定位69. proteinase 蛋白酶proteinase inhibitor 蛋白酶抑制剂70. proteolytic 蛋白质水解的, 解蛋白71. messager RNAs 信息RNA72. cysteine 半胱氨酸73. predispose 预先安排,使倾向于74. concomitant 伴随的75. exacerbate 恶化,增剧。
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货号：QS3404-50 规格：50管/48样可溶性淀粉合成酶（Soluble starch synthase，SSS）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
测定原理：
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
液体一：7mL×2瓶，4℃保存；
液体二：4mL×2瓶，4℃保存；
液体三：8mL×2瓶，4℃保存；
粉剂一：2支，4℃保存；
粉剂二：2支，4℃保存；
粉剂三：2支，-20℃保存；
粉剂四：2支，4℃保存；
粉剂五：2支，4℃保存；
粉剂六：2支，-20℃保存；
粉剂七：2支，-20℃保存；
粉剂八：2支，4℃保存；
粉剂九：2支，4℃保存；
粉剂十：2支，-20℃保存；
试剂一：液体×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉
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剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液制备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2
，冰浴冷却
，
ΔA=A2-A1。
注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
SSS活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数
=522×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（V样÷V样总×W）÷T×稀释倍数=522×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，5.7×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
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