结合态淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase,GBSS)试剂盒说明书
大米淀粉结合蛋白研究进展
大米淀粉结合蛋白研究进展陈兰煊;任思;易翠平【摘要】淀粉结合蛋白(starch granule-associated proteins,SGAPs)是指紧密结合于淀粉表面及内部具有显著特征的一类蛋白质,在大米中的质量分数为0.2％～0.5％,不同于普通蛋白,其更多以酶的形式存在于淀粉颗粒中决定淀粉颗粒的结构及形态,对淀粉颗粒的生理生化特性有着重要作用.本文综述了目前国内外关于大米淀粉结合粒蛋白(SGAPs)的研究进展,介绍了几种较为典型的淀粉结合蛋白的分布、分离与纯化方法及其对淀粉的理化特性产生的影响,旨在对大米淀粉深入研究及大米淀粉工业提供一定理论研究基础.%The Starch Granule-Associated Proteins (SGAPs,Containing 0.2％～ 0.5 ％ protein) is a kind of protein which is closely combined with the surface and interior of starch.Different from the common proteins,it is more in the form of enzymes in starch granules,determine the structure and morphology of starch particles,and plays an important role in the physiological and biochemical characteristics of starch granules.This paper reviewed the current domestic and foreign research progress on rice SGAPs,introduced the influence of several typical distribution,method of isolation and purification and physicochemical properties of starch which aims to provide a theoretical basis for further research on rice starch and rice starch industry.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2018(033)002【总页数】5页(P142-146)【关键词】大米;淀粉结合蛋白;淀粉合成酶【作者】陈兰煊;任思;易翠平【作者单位】长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114;长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114;长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114【正文语种】中文【中图分类】TS231淀粉结合蛋白(starch granule-associated proteins，SGAPs)是和植物淀粉粒表面或内部紧密结合的蛋白质，蛋白质量分数为0.2%～0.5%[1]。
杂交水稻骨干亲本Wx基因第一内含子+1位碱基多态性分析
杂交水稻骨干亲本Wx基因第一内含子+1位碱基多态性分析作者：连玲潘丽燕朱永生许惠滨郑燕梅何炜罗曦王颖妲蔡秋华谢华安张建福来源：《福建农业学报》2019年第12期摘要：[目的]直链淀粉含量是影响稻米品质的重要因素，而编码颗粒结合型淀粉合成酶（granule-boundstarchsynthetase，GBSS）的蜡质基因（Wx）是影响直链淀粉含量的主效基因。
本研究拟分析120份杂交水稻亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基的多态性，以期研究其对内含子的剪接效率及Wx的表达的影响，为亲本育种筛选提供理论参考。
[方法]选取120份水稻亲本材料，采用CTAB法提取基因组DNA，并以此为模版PCR扩增Wx基因片段;采用限制性内切酶AccI对PCR产物进行酶切分析，根据琼脂糖电泳结果分析Wx基因第一内含子+1位碱基类型;同时测定其中19份亲本的直链淀粉含量、胶稠度和碱消值。
[结果]PCR扩增结果显示所有材料中均可扩增出清晰且单一的目的条带;PCR产物的AccI酶切分析结果显示，其中81份亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基是T，即为T型，占总数的67.5%，38份亲本为G 型，占总数的31.67%，而仅有1份亲本为杂合型，即GT型，占总数的0.83%。
19份亲本的直链淀粉含量测定结果表明，7份G型亲本的直链淀粉含量比12份T型亲本的高，且其中6个G型亲本的直链淀粉含量平均值均超过20%。
另外，测定结果表明T型亲本和G型亲本的胶稠度和碱消值差别不明显。
[结论]120份杂交水稻骨干亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基类型测定结果表明，与T型亲本相比，G型亲本的直链淀粉含量明显较高，而胶稠度和碱消值没有明显差别。
关键词：Wx基因;第一内含子;碱基多态性;直链淀粉含量中图分类号：S511文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2019）12-1355-090 引言[研究意义]随着人们对稻米品质要求的提高，水稻育种在注重提高产量的同时也越来越重视稻米品质的改良。
马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析
引文格式：李晨晓, 艾菊, 杨梅宏, 等. 马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析[J]. 云南农业大学学报(自然科学), 2023, 38(3): 361−367. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).202207034马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析*李晨晓， 艾 菊， 杨梅宏， 高冬丽 **(云南师范大学，云南省生物质能与环境生物技术重点实验室，云南 昆明 650500)摘要: 【目的】在马铃薯块茎中确定能够促进淀粉合成基因表达的脱落酸(abscisic acid ，ABA)和蔗糖处理体系。
【方法】利用不同的溶液和条件，对马铃薯幼嫩块茎进行ABA 、蔗糖和ABA+蔗糖处理；采用实时荧光定量PCR 检测处理块茎中直链淀粉合成关键酶(granule-bound starch synthase Ⅰ，GBSS Ⅰ)基因、支链淀粉合成关键酶(starch branching enzyme Ⅲ，SBE3)基因和淀粉合成限速酶大亚基(ADP-glucose pyrophosphorylase large subunit 3，APL3)基因的表达，确定处理体系能否诱导基因表达；确定处理体系后，进一步检测其他9个淀粉合成基因的表达。
【结果】实时荧光定量PCR 检测表明：当处理溶液中包含氯化钙、琥珀酸钠和氯霉素等试剂，且马铃薯块茎置于处理溶液中28 ℃黑暗处理36 h 时，与对照相比，ABA 或蔗糖处理可明显升高GBSS Ⅰ和APL3的表达。
对其他9个淀粉合成相关基因表达的检测结果显示：大部分合成基因正向响应ABA 或蔗糖处理。
【结论】本研究利用马铃薯块茎确定了能够促进淀粉合成基因表达的ABA 和蔗糖处理体系，研究结果为进一步解析淀粉合成基因的转录调控机制奠定了基础。
关键词: 马铃薯；淀粉合成基因；脱落酸；蔗糖；表达中图分类号: S532.01 文献标志码: A 文章编号: 1004–390X (2023) 03−0361−07Expression Analysis of Starch Synthesis-related Genes Induced byAbscisic Acid and Sucrose in Potato TubersLI Chenxiao ，AI Ju ，YANG Meihong ，GAO Dongli(Key Laboratory of Yunnan Province for Biomass Energy and Environmental Biotechnology,Yunnan Normal University, Kunming 650500, China)Abstract: ［Purpose ］To define the effective abscisic acid (ABA) and sucrose treatments that could induce the expression of starch synthesis-related genes in potato tubers. ［Methods ］Young tubers were subjected to ABA, sucrose, and ABA+sucrose treatments using different solutions and condi-tions, and the expression levels of three genes including granule-bound starch synthase Ⅰ (GBSS Ⅰ),starch branching enzyme Ⅲ (SBE3) and ADP-glucose pyrophosphorylase large subunit 3 (APL3)were examined by quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR). After defining the effec-tive treatment, the expression levels of other nine starch synthesis-related genes were examined.［Results ］RT-qPCR result showed that when the treatment solutions contained CaCl 2, sodium suc-云南农业大学学报（自然科学），2023，38(3)：361−367Journal of Yunnan Agricultural University (Natural Science)E-mail: ********************收稿日期：2022-07-22 修回日期：2023-03-23 网络首发日期：2023-04-28*基金项目：国家自然科学基金地区基金项目(32060684)；云南省院士工作站(202105AF150028)。
山西育成小麦品种Wxay蛋白缺失体的筛选与鉴定
山西育成小麦品种Wxay蛋白缺失体的筛选与鉴定王曙光;孙黛珍;王慧慧;曹亚萍;贾寿山;史雨刚;彭锁堂【摘要】Wx蛋白即颗粒结合型淀粉合酶,由Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1三个亚基组成,其中任意一个亚基的缺失都影响着小麦籽粒中直链淀粉的含量,为了解山西育成小麦品种Wx蛋白缺失类型,用SDS-PAGE和分子标记技术分别在蛋白质和DNA水平上对175份山西育成的小麦品种资源进行了分析,共检测到1份Wx-A1亚基缺失材料临优2018,6份Wx-B1亚基缺失材料——临汾98-1017、晋麦54、晋农76、长6154、太麦703和太麦8003,没有发现缺失Wx-D1亚基、同时缺失两个亚基和三个亚基全缺失的材料.%Wx protein, granule - bound starch synthase, is composed of Wx - Al、 Wx - B1 and Wx -Dlsubunits,deficiency of which will make starch content of wheat grains decrease. In order to discover more Wxay protein deficiency mutants, 175 wheat varieties bredin Shanxi were identified at the nucleotide and protein levels u-sing SDS -PAGE and molecular markers. The result indicated that 1variety,Linyou2018 were the null of Wx - Al types,6,Linfen98 -1017,Jinmai54,Jinnong76,Chang6154,Taimai703,Taimai8003 were the nullof Wx-B1 types, the null of Wx - D1 and the null of any 2 or 3 submits were not detected.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2012(027)007【总页数】6页(P6-11)【关键词】小麦;Wxay蛋白;SDS-PAGE;分子标记【作者】王曙光;孙黛珍;王慧慧;曹亚萍;贾寿山;史雨刚;彭锁堂【作者单位】山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西省农业科学院小麦研究所,临汾041000;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S512.1;S336在普通小麦直链淀粉合成过程中起主要作用的颗粒结合淀粉合成酶(GBSSⅠ)也称Waxy蛋白［1］。
水稻淀粉合成相关基因研究
式
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
15
SSSⅢ 与SSSⅡ相比，更倾向于合成长的B1和B2 链 (DP=25～35)(Edwards等，1999)。只在一个分
支簇内出现的B链称B1链，连接2和3个分支簇的B 链分别称B2和B3链。
决定口感的好坏。
5/22/2012
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
2
外观品质鉴定相对简单； 蒸煮食味品质(eating and cooking qualities, ECQs)包括
直链淀粉含量(Amylose Content, AC)、胶稠度(gel consistency, GC)和糊化温度(gelatinization temperature, GT)，ECQs是稻米品质中最重要也是最复杂的指标， 传统鉴定方法相对繁杂。 优质稻米一般具有适中的表观直链淀粉含量 (Apparent Amylase Content，AAC)，高的GC和低的 GT。
The boxes represent exon regions: shaded regions are translated, and nonshaded regions are transcribed but not translated. Lines connecting boxes correspond to intron regions. The sizes of the gene and sequenced region are indicated above the boxes. The numbers 1, 2 and 3 indicate the locations of single nucleotide polymorphisms (SNPs) 1, 2 and 3 analyzed for phenotypic associations. Bold italic sequences indicate codons with nonsynonymous mutations.
植物组织特异性启动子的研究进展
植物组织特异性启动子的研究进展摘要：组织特异性启动子也称器官特异性启动子(organ specific promoter)，可调控基因只在某些特定的部位或器官中表达，并往往表现出发育调节的特性。
本文介绍了植物组织特异性启动子中的花、果实、种子及叶特异性启动子，并对植物组织特异性启动子研究中问题进行了讨论和展望。
关键词：植物组织特异性启动子，研究进展启动子(promoter)是RNA聚合酶能够识别并与之结合从而起始基因转录的DNA序列，是重要的顺式作用元件，位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能指导全酶与模版的正确结合，活化RNA聚合酶，并使之具有起始特异性转录的形式，决定转录的方向和效率以及所使用的RNA聚合酶类型，是转录调控的中心。
目前，植物基因工程中常用的启动子为组成型表达启动子(Constitutive promoter)。
组织特异性启动子也称器官特异性启动子(organ specific promoter)，可调控基因只在某些特定的部位或器官中表达，并往往表现出发育调节的特性。
外源基因在细胞中表达是基因工程研究的关键，而组织特异性启动子不仅能使目的基因的表达产物在一定器官或组织部位积累，增加区域表达量，同时也可以避免植物营养的不必要浪费。
因此，组织特异性启动子一直都是植物基因工程中研究的重点和难点，研究者在植物的分生组织、维管束组织、薄壁组织、花粉、种子和胚乳等几乎各种组织中都发现有组织特异性驱动基因表达的启动子[1]，尤其在根、维管束和韧皮部特异表达启动子研究中取得了很大进展。
1 植物生殖器官表达的组织特异性启动子1.1 花特异启动子高等植物发育过程中花器官的形成是一个十分复杂的过程，它包括一系列器官分化及严格控制的细胞及生化变化，同时伴随大量基因的协同表达。
植物花特异表达启动子只在植物开花的时期启动基因的表达，它的分离克隆为花卉的品质改良提供了重要的顺式调控元件。
人们克隆了许多花药特异表达的基因，如在花药绒毡层特异表达的TA29[2]和A9[3]以及在花粉壁特异表达的Bp4A[4]基因等，这些基因都是在花药营养细胞中表达，与生殖细胞的分化无关。
CRISPRCas9技术编辑Wx基因创制新型糯稻种质
植物遗传资源学报2021,22 ( 3 ): 789-799Journal of Plant Genetic Resources DOI： 10.13430/ki.jpgr.20210104003 CRISPR/Cas9技术编辑奶:基因创制新型襦稻种质黄李春1>2,顾正文'，谈红艳、赵微\肖颖1，储睿、范晓磊张昌泉U2,李钱峰“2,刘巧泉(1植物功能基因组学教育部重点实验室/江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室，扬州225009;2江苏省粮食作物现代产业技术协同创新中心/江苏省作物遗传生理重点实验室，扬州225009 >摘要：控制水稻胚乳直链淀粉合成的奶:基因是决定稻米蒸煮食味品质的主效基因.适当降低稻米的直链淀粉含量可显著提高稻米蒸煮食味品质:，编辑W x■基因编码的G B S S I蛋白C末端非关键位点有望微调其酶活性和胚乳直链淀粉含量，进 而改良稻米蒸煮食味品质3在未检测到关键结构域和位点的阶基因3'端设计靶位点T1和T2(分别位于阶基因第12和 第13外显子），利用CRISPR/Cas9技术进行编辑。
通过P C R和测序筛选获得纯合突变株系，用表观直链淀粉含量测定、凝股 渗透色谱、Western B lo t和qRT-P C R等技术分析其对水稻胚乳直链淀粉合成和阶基因表达的影响共获得8种保留GBSS1主要结构域的纯合突变系C1~C8。
其中，C2和C3中推测翻译的G B S S I蛋白仅有第518〜550/551位密码子发生移码；C1、C4~C8中推测翻译的G B S S I蛋白分别从第551位和第517/518位密码子开始移码..C1~C8米粉中表观直链淀粉含量显著降低，从野生型的16.79%下降到3.69%〜4.44%，但均稍高于含自然突变w x基因的糯稻近等基因系的2.92%。
G P C结果显 示，突变系中无直链淀粉合成，但其支链淀粉中长链（Ap2 )的链长均长于糯稻近等基因系wx。
面粉的热处理技术
本文采用湿热处理的方法探求改善硬质小麦加工适应性的效果，分析该处理过程中水分、温度、处理时间等物理参数对硬质小麦面粉加工适应性参 数的影响。本文研究了湿热处理条件与加工适应性各参数之间的关系，并初步得出湿热处理改善加工适应性的最佳条件，为建立湿热处理改善硬质小麦 加工适应性的工艺流程提供了理论基础与参考方法。
2.Mg2+浓度对GBSS的解离有影响。较高的Mg2+浓度能够抑制GBSS与淀粉的解离，当Mg2+浓度超过50mmol/L时，GBSS解离量仅为不加任何离子时的 47.4％，当Mg2+浓度降至2.5mmol/L时GBSS解离量升至不加任何离子时的94.4％，但当Mg2+浓度降为1.75mmol/L时GBSS解离量比不加任何离子时高 7.3％，说明在一定范围内随Mg2+浓度的降低GBSS解离量逐渐升高。GBSS从淀粉颗粒上的解离受Mg2+浓度的影响，这一结果初步证实GBSS与淀粉粒是通过 非共价键结合的。
１热处理技术
面粉的热处理工艺和技术是近几 年欧、美等国家开发并应用在面粉的 后处理Ｔ艺上的一项目新技术，主要 是以瑞士布勒公司为主，１９９８年研制 成功，进入市场。国内目前还没有这项 技术。该技术是面粉加工工艺的一个 发展，该技术是从１９９０年开始的独特 性设计。主要是生产一种高黏度和低 细菌的面粉。
粮油
万方数据
面粉的热处理技术
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号：MS3405 规格：100管/96样结合态淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase，GBSS）
试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理：
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH 的增加量，可以计算GBSS活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存；
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入14mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入8mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂五：液体×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
粗酶液制备:
称取0.1~0.2g组织（建议称取约0.1g组织），加入1mL提取液，冰浴中匀浆。
10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2
第1页，共2页
混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
10000g 25℃
A=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
GBSS活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =528×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T×稀释倍数=528×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.85×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.075 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.73；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =1056×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T×稀释倍数 =1056×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.85×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.075 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.73；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
第2页，共2页。