可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
抗性淀粉试剂盒说明书
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）前言抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理（AOAC法 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。
离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液（1M，），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（%W/V）。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4：GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶（>12,000U）加上过氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1910规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体37.5mL×1瓶，4℃保存；试剂四：1μmol/mL标准储备液10mL，4℃保存；产品说明：β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。
该酶在肝细胞中含量较高。
此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。
β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品测定的前处理按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）加样孔测定管标准管空白管试剂一100100100试剂二100100100样本501μmol/mL50蒸馏水50混匀后，37℃水浴30min试剂三750750750混匀，540nm下测定各管吸光值注意：标准管和空白管只需测一次。
三、β-GD活性计算（1）按样本鲜重计算：单位定义：每小时每g鲜重样品中催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/g鲜重）=(C标准管×V1)×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(W ×V1÷V2)÷T=2×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W（2）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性检测试剂盒说明书
BC0910 -- 第 1 页，共 3 页谷氨酰胺合成酶（GS ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0910 规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体30 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体12 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体12 mL×1瓶 -20℃保存 试剂三 粉剂×2瓶 -20℃保存 试剂四液体15 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：试剂三：临用前取一瓶加入5mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装可保存4周，避免反复冻融。
产品说明：GS （EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
GS 在ATP 和Mg 2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有最大吸收峰。
Glutamic Acid + NH 4+GlutamineGlutamine γ- Glutamyl Hydroxamic Acid Iron Hydroxamic注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
土壤尿酸酶活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4018
土壤尿酸酶活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4018规格：50T/24S紫外分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体2mL×1瓶（自备）2-8℃保存试剂二A液液体0.5mL×1支2-8℃保存试剂二B液液体17.5mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体60mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：自备甲苯；2、试剂二：临用前按照试剂二A液︰试剂二B液=1︰35的比例混合，根据样本量所需使用当天现配现用；3、标准品：5µmol/mL的尿酸溶液。
产品说明：土壤尿酸酶（Soil Uricase，S-UR）是一种与核酸代谢有关的氧化还原酶，主要是将土壤中的核酸腺嘌呤与尿酸等物质转化成尿囊素和尿囊酸，进而生成尿素供植物利用。
土壤尿酸酶能够催化尿酸生成尿囊素、CO2和H2O2，尿酸在284nm有特征吸收峰，通过测定反应前后尿酸的减少量，来表示土壤尿酸酶活性。
（284nm）Uric Acid UreaseAllantoin+H2O2+CO2注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、研钵、可调式移液器、1mL石英比色皿、冰、30~50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至284nm，蒸馏水调零。
2、将5µmol/mL标准溶液用蒸馏水倍比稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625µmol/mL标准溶液待用。
柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1060规格：10T/5S产品简介：CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在412nm处有特征吸光值。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体5mL×1瓶，-20℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体0.1mL×1支，-20℃保存；试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入1mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.5mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；操作步骤：一、样本前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL提取液和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2将匀浆液600g，4℃离心5min。
3将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS。
5在沉淀中加入200μL试剂一和2μL试剂二，反复吹打充分混匀，用于CS测定。
6柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（保证无沉淀）。
谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4490
谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4490规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体100mL×1瓶4℃保存试剂二液体3mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入5.0mL蒸馏水，混匀。
产品说明：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，GR催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。
GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。
GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、匀浆器/研钵、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称约0.1g组织，加入 1.0mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。
二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min以上。
3.空白管：取1mL石英比色皿，加入50μL试剂二，100μL试剂三，850μL试剂一，于340nm测定10s和190s 吸光度，记为A空1和A空2。
顺乌头酸酶(ACO)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4326
顺乌头酸酶（ACO）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4326规格：50T/48S紫外分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体35mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体0.6mL×2支-20℃保存试剂四液体50mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：易挥发试剂，使用后尽快拧紧盖子，密封后放入-20℃保存；产品说明：顺乌头酸酶（Aconitase,ACO）是细胞内一种重要的铁硫蛋白酶，主要存在于胞浆与线粒体中。
ACO催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸的可逆反应，对维持三羧酸循环及乙醛酸循环的顺利进行起着重要作用。
顺乌头酸酶催化异柠檬酸生成顺乌头酸，顺乌头酸在240nm有特征吸收峰，通过检测顺乌头酸的产生速率来计算该酶活性。
ACOIsocitric Acid CIS-Aconitate(240nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声波细胞破碎仪、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、顺乌头酸酶的提取（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）A、总顺乌头酸酶的提取称取约0.1g组织或收集500万个细胞（细菌），加入1mL试剂一与10μL试剂三，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
将匀浆置于冰上超声波破碎（功率300W，超声3秒，间隔9秒，重复15次），4℃，11000×g离心15min，取上清置于冰上待测（若以蛋白浓度计算，则需留出足够量来测定蛋白浓度Cpr1）。
用于测定总顺乌头酸酶活性（建议将样本用蒸馏水稀释4-10倍后检测）。
B、胞浆与线粒体顺乌头酸酶的提取(1)称取约0.3g组织或收集1500万个细胞，加入1.5mL试剂一与15μL试剂三，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
土壤过氧化物酶（S-POD）活性检测试剂盒说明书
土壤过氧化物酶（S-POD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0890规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存试剂二液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体10 mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体100 mL×1瓶（自备）2-8℃保存标准品液体10 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入10 mL蒸馏水，用不完的试剂2-8℃保存一周；2、试剂四：自备乙醚；3、标准品：相当于每1mL乙醚相中含有0.2mg/mL紫色没食子素。
产品说明：S-POD主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。
S-POD催化有机物质氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。
Quinone (430nm) Array注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、0.5mol/L HCl溶液、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、乙醚（不允许快递）、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。
二、测定步骤1、标准品处理：将标准品用0.5mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可参考下表。
序号稀释前浓度（µmol/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）稀释后浓度（µmol/mL）110100000.1218002000.08BC0890 -- 第1 页，共2 页316004000.06414006000.04512008000.02611009000.01备注：试验中每个标准管需1000µL标准溶液。
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可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1850
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2瓶，-20℃保存。
试剂四：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每支加入5mL试剂一。
试剂五：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每支加入8mL试剂一。
试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入416μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。
试剂七：液体250μL×3支，-20℃保存，可分装后-20℃保存，不可反复冻融。
试剂八：液体12.5μL×2瓶，4℃保存；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。
反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入7mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解。
这样可以分两批配制并且测定。
产品说明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
需自备的的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液制备
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。
10000g，4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL）测定管
样本200
反应液Ⅰ270
混匀，30℃保温20min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
试剂八150
混匀，30℃保温30min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g常温离心10min，取上清液。
37℃预热试剂五和上清液。
上清液450
试剂五300
试剂六15
试剂七15
混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A
1和2min后的吸光度A
2
，计算ΔA=A
2
-A
1。
注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
三、SSS活性计算
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清)÷T
=43.2×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/g鲜重）
=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清)÷T =43.2×ΔA÷W。
V测：测量体积，0.78mL；
V反总：反应体积，0.62mL；
V提取：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，20min；
cm)；
ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL/(nmol
˙
d：石英比色皿光径，1cm；
V样本：加入样本的量，0.2mL；
V上清：吸取上清液的量，0.45mL；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g。