液相色谱-质谱联用仪检定注意事项
液相色谱仪检定方法及注意事项
液相色谱仪检定方法及注意事项 摘要：本文对液相色谱仪检定方法及检定中出现的问题，结合自己的工作经验进行了探讨。
关键词：液相色谱仪 检定1、概述液相色谱仪因分离效率高；应用范围广；分析速度快；样品用量少；灵敏度高等特点，在送药、食品、环境、材料等领域有了广泛的应用，成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。
本文依据JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程，以紫外—可见光检测器为例，结合实际工作对主要检定项目泵流量、柱箱温度、基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、定性定量重复性的检定及检定中的注意事项说几点看法。
2、检定方法按规程要求设定流量、启动仪器，待压力稳定后在规定时间内收集流动相，同时用秒表计时，出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，在天平上称重，重复测量3次，则流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR ，公式如下： %100/)(⨯-=-S S S F F m F S%100/)(min ⨯-=--m S F F x Fma S 式中：F m -F m =（W 2-W 1）/（e t ·t ），流量实测值，ml/min ； W 2-容量瓶+流动相的质量，g ；W 1-容量瓶的质量，g ；e 1-实验温度下流动相的密度,g/cm 3；t-收集流动相的时间，min ；min /，ml F m 值同一组测量的算术平均--； Fs 流量设定值，ml/min ；Fmax-同一组测量中流量最大值，ml/min ；Fmin-同一组测量中流量最小值，ml/min ；2.2注意事项2.2.1收集流相和计时由一个人完成，减少计时误差；因甲醇容易挥发，收集时用封口胶密封容量瓶瓶口，收集完一瓶后立刻称量，收集的流动相在换算成体积后保留小数点后三位，最后结果保留小数点后一位。
2.2.2如果实际流速低于设定值，清洗或更换单向阀，过滤头；如果流速过高，检查流速补偿和压缩补偿调节是否失灵，如果流量不稳，检查泵头内是否聚集气泡，打开放空阀，让泵在高流速下运行，排除报泡；检查泵头是否松动，拧紧泵头固定螺丝，检查输液管路漏液或部分堵塞，需逐段管路进行排除。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
主要内容
• 液相色谱-质谱联用技术简介 • 我们的仪器 • 测试准备阶段的注意事项 • 结果的解读
• 质谱基本原理
第一章 液相色谱-质谱联用技术 简介
质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进 行分析的一种分析方法。
电离装置把样品电离为离子 质量分析器把不同质荷比的离子分开 检测器检测
清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制
不能使用
表面活性剂
缓冲盐
避免使用非挥发性盐，特别是碱金属磷酸盐、硼酸盐、 柠檬酸盐等。 推荐使用甲酸铵、乙酸铵
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相的流速
Column ID 4.6 mm 3.0 mm 2.1 mm 1.0 mm Capillary
Q 1 q 2 Q 2
MS 1
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
第一章 LC-MS技术简 介
离子源与液相色谱的流速
• ESI
• APCI
1 μ L/min - 1mL/min 最佳使用流速: 200 μ L/min 一般来说, 高流速需要高的 毛细管温度和鞘气、辅助气
200 μ L/min - 2mL/min 最佳使用流速: 500 μ L/min 一般来说，高流速需要更高 的鞘气和辅助气流量，但不
液相色谱-质谱联用仪校准规范
ICS备案号：JJF XXXX －XXXX液相色谱-质谱联用仪校准规范Calibration Specification for Liquid Chromatography — Mass SpectrometersXXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施福建省质量技术监督局 发布Calibration Specification for LiquidChromatography —Mass spectrometers本规程经福建省质量技术监督局于XXXX年XX月XX日批准，并自XXXX年XX月XX日起施行。
归口单位：起草单位：福建省计量科学技术研究所本规程技术条文由起草单位负责解释本规范主要起草人：参加起草人：目录1 范围 (1)2 引用文献 (1)3 术语和计量单位 (1)4 概述 (2)5 计量性能要求 (3)6 校准条件 (3)6.1实验室环境要求 (3)6.2 标准物质和试剂 (4)6.3 校准设备 (4)7. 校准项目和校准方法 (4)7.1外观及功能性检查 (4)7.2校准方法 (5)8 校准结果的处理 (8)9. 复校时间间隔 (8)附录A校准证书内页格式（供参考） (9)附录B校准记录格式 (10)附录C不确定度评定 (12)附录D碘化铯钠（NaI.CSI）离子质量 (13)液相色谱－质谱联用仪校准规范1 范围本规程适用于离子阱（QIT）、单级四极杆(Q)和三重四级杆(Q-Q-Q)液相色谱—大气压离子化质谱联用仪（Liquid Chromatography —Atmospheric Pressure Ionization Mass Spectrometers，简称LC-APIMS）的校准。
其他类型LC-MS的校准检测可参照此规范进行。
2 引用文献GB/T 6041-2002 《质谱分析方法通则》JJG（教委）003-1996《有机质谱仪检定规程》JJS K0136-2004 《高效液相色谱法-质谱分析法一般规则》使用本规范时，应注意使用上述引用文献的现行有效版本。
分析液相色谱仪检定方法和注意事项
分析液相色谱仪检定方法和注意事项摘要液相色谱仪是高精度的仪器之一，在物质分离分析中所起的作用日渐重要，针对该仪器的检定，国家颁布了统一的检定标准，检定过程需要严格按照该标准来执行。
本文主要介绍了液相色谱仪的工作原理及其组成，并简单介绍了几个常见项目的检定方法和在检定过程中需要注意的一些问题，为检定人员提供一定的参考。
关键词液相色谱仪；检定；液相色谱法液相色谱仪是广泛应用在研究所，实验室等场所、对所研究样品进行分离分析的常规仪器之一。
它的优点主要有：1）可以在短时间内把样品分析出来；2）对于所分析样品没有太多要求，只要能制成液体即可；3）不需要太多的样品就可以分析出来；4）对于各组分含量很少的样品也能分析出来。
以上优点决定了该仪器在生物、医药、食品、材料等各领域研究工作的广泛应用。
1 液相色谱仪的原理高压泵利用高压把流动相压进系统中，然后样品溶液从进入到流动相中，并跟随流动相运动，最终进入色谱柱中，由于样品溶液的各个组成物质具有不同的性质，在色谱柱中运动时会有一定的差异，经过一段时间的运动以后，运动速度差异会变得越来越大，这样就被分成多个部分分别从色谱柱中流出，这样在检测器中就记录下了这些样品组分的浓度，然后以图谱的形式呈现出来。
2 液相色谱仪的组成液相色谱仪主要由加入样品系统、输送样品系统、分离样品系统、检测结果系统和结果分析处理系统组成。
2.1样品加入系统一般是用安装有隔膜的注射器或者是利用高压来加进样品，为了提高所分析样品的重复性，要在加样时注意使每次加入的样品量保持相同。
2.2样品输送系统高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分组成了输送样品系统。
高压泵的一般压强为14.7MPa～44MPa，如此高的压强可以使待分析样品液体以相当大的速度通过层析柱，较大速度可降低样品在层析柱中向四周扩散。
贮存器和密度梯度仪的作用是使样品流动相随着所用固定相和样品的变化而变化，具体包括改变洗脱液的吸水性、阴阳离子浓度、PH值，这样就可使各种样品成分最终都可以实现有效的分离，增强分离的效果。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
ionization，APCI）
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
正离子模式：ESI(+)或APCI(+)
适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨 或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
负离子模式：ESI(-)或APCI(-)
适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较 多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模 式。
大气
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• 离子源的作用
去溶剂 离子化 液相色谱与质谱的接口
真空过渡
去除干扰
• 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API）
电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI） 大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel
推荐使用水、甲醇、乙腈、异丙醇 不能使用四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、氯仿
酸
不能使用无机酸(可能会导致腐蚀) 推荐使用醋酸和甲酸
三氟乙酸（TFA）会产生离子抑制作用
液相色谱仪检定中的方法及注意事项
液相色谱仪检定中的方法及注意事项摘要：将JJG705—2014《液相色谱仪检定规程》作为根本基础，将紫外线的可见光检测器作为研究的对象，通过结合实际工作经验，对一些选定项目的具体检验方法以及检定当中的注意事项进行全面探索，能够有效地促进液相色谱仪获得更多的价值，基于此，本文主要讨论了液相色谱仪检定过程当中的方法，还有相关注意事项。
关键词：液相色谱仪；检定经验；检定方法引言：物质色谱分析最为重要的设备就是液相色谱仪。
液相色谱仪在食品的安全监测以及化学品监测领域被广泛的使用。
计量检定人员在日常工作当中，如果需要使用液相色谱仪进行检测，经常会产生一些和仪器计量性能有关的很多问题，从而难以符合JJ G705—2014《液相色谱仪检定规程》其中所规定的一系列的计量指标。
本文主要以JJG 705—2014《液相色谱仪检定规程》作为基本条件来详细的讨论了液相色谱仪其中的检定经验，并且为紫外可见光的检测器。
根据实际项目来进行了一系列的监测，并且讨论了一些检测过程当中的注意事项和其中的一些问题。
一、液相色谱仪检定中的注意事项（一）泵流量检定经验分析首先是泵流量检定的步骤。
按照相关的规程来进行设定启动仪器，在压力达到平稳值之后，在限定的时间之内来收集流动相，并且通过秒表计算时间。
出口位置流动相需要使用清洗干净了的称重容量瓶来进行收集，同时也要使用天枰来进行称重要重复测量至少三次，这个时候可以通过JJ G705—2014《液相色谱仪检定规程》当中所给出的公式对流量的稳定性，以及泵流量的设定值之间的误差进行计算[1]。
其次就是泵流量检定当中的注意事项，要能够对有关实验材料进行精心的保管，然后再对其数据来进行收集。
由一个专业人员同时来进行计时以及收集流动相，这样可以尽量避免出现误差，而且因为甲醇是有一定挥发性的，所以一定要对实验的速度以及时间进行良好的把控，工作人员也按部就班的来按照相应的程序进行实验，从而让实验的失误还有经济损失性能够降低。
液相色谱注意事项及处理
液相色谱注意事项及处理液相色谱（HPLC）是现代化学分析中广泛应用的一种方法，它基于样品在流动相中的分离性质，通过分离和测定样品中的化合物。
以下是一些液相色谱操作中需要注意的事项以及常见的问题处理方法。
1.选择适当的柱子和固定相：-根据样品的性质、需要分离的化合物以及分离条件，选择适当的柱子和固定相。
柱子和固定相的选择对分离效果和分析结果至关重要。
2.准备好合适的流动相：-流动相的成分和性质直接影响分离效果。
需要注意流动相的溶剂纯度、特性以及配置方法。
合适的流动相可提高分离效果。
3.样品溶解及进样：-样品的溶解度及进样方法是分离的关键。
应根据样品特性选择适当的溶剂进行溶解，并确保进样量适中。
过高的样品浓度可能导致柱子堵塞或在检测器中引起峰形变。
4.良好的柱温控制：-柱温的控制对于提高分离效果和重现性至关重要。
柱子的工作温度应控制在恒定的范围内，以减小流动相的变化对结果的影响。
5.流速控制：-流速对分离时间、峰形和峰分离度有很大影响。
根据分析要求和实验条件选择合适的流速。
过高的流速可能导致峰形变差，而过低的流速可能导致分离不完全。
6.运行条件的优化：-运行条件的优化对提高方法的灵敏度和分离效果至关重要。
可以通过调整流动相的成分、柱温、流速等参数来优化方法。
试验不同条件，并选择最适合的条件。
7.检测器使用和校准：-液相色谱中常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
使用检测器时，注意校准和灵敏度调整。
8.数据分析和结果解释：-得到的色谱图需要进行数据分析和结果解释。
尽可能使用专业的数据分析软件进行峰面积的计算和样品的定量分析。
常见问题处理方法：1.噪声问题：-噪声问题可能由仪器本身的电子噪声或环境噪声引起。
可以尝试提高信号峰值，调整积分时间或使用峰值选定的方法来处理噪声。
2.色谱峰形变差：-色谱峰形变差可能是由于流动相成分变化、柱子老化或柱温不稳定引起的。
可以尝试更换柱子、重新配置流动相、调整柱温或优化运行条件来解决此问题。
液相色谱-质谱联用仪自检 核查规程 电子版
液相色谱—质谱联用仪自检/核查规程1 说明1.1工作原理液相色谱—质谱联用仪为配备质谱类型检测器的液相色谱仪，包括单四级杆、三重四级杆、离子阱和四级杆飞行时间质谱检测器。
1.2适用范围本规程仅适用于液相色谱—质谱联用仪中质谱检测器部分的自检定校准。
液相色谱—质谱联用仪中配备紫外或二极管阵列检测器液相色谱仪部分，其自检定参照“高效液相色谱仪检定规程”。
1.3制定依据本规程参照福建省质量技术监督局JJF（闽）1032—2010:“液相色谱—质谱联用仪校准规范”制定。
2 项目及技术要求2.1质量精度：2.1.1 单四极杆、三重四级杆、离子阱质谱检测器，±0.4amu。
2.1.2 四级杆飞行时间质谱检测器，≤5ppm（8小时内变化小于2ppm）。
2.2 质量范围：50～2000amu。
2.3 灵敏度：2.3.1单四极杆质谱100pg利血平，SN≥3；2.3.2 串联质谱50pg利血平，SN≥3。
2.4 分辨率：四级杆飞行时间质谱检测器，R≥10,000。
2.5 整机定性及定量重复性：2.5.1 质量色谱图保留时间相对标准偏差，RSD ≤2%。
2.5.2 质量色谱图峰面积相对标准偏差，RSD ≤5%（仅适用于SIM 模式的单四极杆质谱检测器和MRM 模式的三重四级杆质谱检测器）。
3 检测条件3.1 环境温度为18～25℃,8小时内温度波动不超过±2℃，相对湿度低于65%。
3.2 电源电压220±11V ，电源频率50±0.5Hz 。
3.3 检测设备 电子天平、容量瓶、微量注射器、移液器、C18色谱柱（柱长小于5cm ，2mm 内径，填料尺寸小于5μm ）3.4 标准物质和试剂3.4.1 标准物质 盐酸苯乙双胍、枸橼酸西地那非、利血平、胸腺五肽；3.4.2 试剂 甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、超纯水（18.2MΩ.cm ）、市售纯净水、甲酸铵（分析纯）。
4 检测方法4.1 质量精度（ESI+）：采用浓度为5μg/ml 、0.5μg/ml 、0.05μg/ml 的盐酸苯乙双胍+枸橼酸西地那非+胸腺五肽混合校正液，甲醇-水（50/50）为溶剂，进样方式为柱塞泵连续进样，质谱一级全扫描模式，记录50～2000质量范围，相关分子离子峰（M+1）为：206.1（苯乙双胍）、475.2（西地那非）、680.4（胸腺五肽）、1359.7（胸腺五肽二聚体）。
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液相色谱-质谱联用仪检定注意事项
1. 在进行液相色谱-质谱联用仪检定前，应确保设备的稳定性
和正确性，包括保证色谱流动系统的稳定性和质谱的解析能力。
2. 使用标准溶液进行校准和校验，确保色谱和质谱的准确性和灵敏度。
3. 在进行样品检测前，必须进行仪器的装载，包括正确选择色谱柱、质谱离子源、离子检测器等，并进行参数设置。
4. 清洗样品容器和仪器中的管道，以防止样品之间的污染和交叉污染。
5. 使用合适的流动相和离子源流动相，以保证色谱谱图和质谱谱图的准确性和分辨率。
6. 在检定过程中，要定期监测仪器的噪声背景和系统稳定性，以确保结果的可靠性。
7. 在检定前，应进行仪器的校准和线性范围测试，以确保仪器的准确性和灵敏度。
8. 注意保持样品处理的无菌条件，以避免样品受到细菌污染。
9. 定期维护和保养仪器，包括清洗色谱柱、质谱离子源、离子检测器等，以保证仪器的正常运行和长期稳定性。
10. 在检定过程中，要注意记录每个步骤的操作和结果，以备
后续分析和质量控制的参考。