3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法
提高蛋白质的稳定性
提高蛋白质的稳定性葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍；最适反应温度提高10～12℃；酶比活相同。
据分析，Pro替代Gly138后，可能由于引入了一个吡咯环，该侧链刚好能够填充于Gly138附近的空洞，使蛋白质空间结构更具刚性，从而提高了酶的热稳定性。
融合蛋白质脑啡肽(Enk)N端5肽线形结构是与δ型受体结合的基本功能区域，干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒抗肿瘤的细胞因子。
黎孟枫等人化学合成了EnkN端5肽编码区，通过一连接3肽编码区与人α1型IFN基因连接，在大肠杆菌中表达了这一融合蛋白。
以体外人结肠腺癌细胞和多形胶质瘤细胞为模型，采用3H－胸腺嘧啶核苷掺入法证明该融合蛋白抑制肿瘤细胞生长的活性显著高于单纯的IFN，通过Naloxone竞争阻断实验证明，抑制活性的增高确由Enk导向区介导。
蛋白质活性的改变通常饭后30～60min，人血液中胰岛素的含量达到高峰，120～180min内恢复到基础水平。
而目前临床上使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰且持续180～240min，与人生理状况不符。
实验表明，胰岛素在高浓度（大于10－5mol/L）时以二聚体形式存在，低浓度时（小于10－9mol/L）时主要以单体形式存在。
设计速效胰岛素原则就是避免胰岛素形成聚合体。
类胰岛素生长因子－I(IGF－I)的结构和性质与胰岛素具有高度的同源性和三维结构的相似性，但IGF－I不形成二聚体。
IGF－I的B结构域（与胰岛素B链相对应）中B28－B29氨基酸序列与胰岛素B链的B28－B29相比，发生颠倒。
因此，将胰岛素B链改为B28Lys－B29Pro，获得单体速效胰岛素。
该速效胰岛素已通过临床实验。
医学免疫实验(T细胞增殖实验、核素法、MTT法)
3H胸腺嘧啶核 苷掺入检查法
3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法
原理：当淋巴细胞受分裂原(PHA等)或特异性抗原刺激发生转化时， 必然伴有DNA的大量合成，若将具有放射性的3H-TdR加到培养液内， 则可被作为合成DNA的原料而摄入转化中的细胞内，测定细胞内放 射性物质的相对数量(以脉冲数cpm表示)，就能客观地反映淋巴细 胞对刺激物的应答水平。
MTT法
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活 性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞 毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它 的特点是灵敏度高、经济。
淋巴细胞的功能测定技术
T细胞+PHA
培养，淋巴母细胞转化
染色 +3H-TdR
计数转化细胞百分率 测定cpm值
测定OD值
谢谢！
医学免疫实验
作业
市场上有一广告产品，据说有免疫 增强作用，请设计一个方案证实之 （从影响淋巴细胞功能、T淋巴细 胞增殖的角度考虑）。
T细胞增殖实验 3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法（核素法） MTT法
T细胞增殖实验
原理：又称T细胞转化试验。T细胞在体外经某种物质刺 激，细胞代谢和形态相继变化，在24~48h细胞内蛋白质 和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如细胞变 化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松 等，由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此，这种淋巴细 胞增殖又叫淋巴细胞转化。据此可判断出淋巴细胞对有 关刺激的反应性与功能状态。 (1) 非抗原性刺激物:如植物血凝素(PHA)、刀豆素 A(ConA)、美洲商陆(PWM)、脂多糖(LPS)，通称促有丝分 裂原。其中LPS刺激B细胞，PWM可刺激T和B细胞，PHA和 ConA刺激T细胞增殖。 (2) 抗原性刺激物:如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风 类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。
奥曲肽抑制胃癌生长的实验研究
图３裸鼠人胃癌移植瘤组织切片（ＨＥ染色，×１００）
Ｂ：１ ｘ１０。５ｍｏｌ／Ｌ奥曲肽
奥曲肽抑制胃癌生长的实验研究木
王春晖－唐承薇·汤丽平。
Ｉ已７弓 ＿ｑ
四川大学华西医院消化内科１（６１００４１）重庆医科大学第一医院消化内科２
目的：研究生长抑素类似物奥曲肽在体内和体外对胃癌生长的影响及初步作用环节。方法：采用３Ｈ．胸腺嘧啶 核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法及ＴｄＴ介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）法检测奥曲肽对体外培养的ｓＧｃ．７９０１胃癌细胞 生长的影响及凋亡的诱导作用。建立裸鼠人胃癌原位移植瘤模型，给予奥曲肽治疗８周．观察其对裸鼠体内胃癌生 长的影响。用免疫组化法检测奥曲肽对胃癌细胞及组织中增殖细咆核抗原（ＰＣＮＡ）表达的影响。用逆转录聚合酶链 反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测胃癌细胞及组织中生长抑素受体（ＳＳＴＲ）．２和ＳＳＴＲ．３基因的表达。结果：奥曲肽可明显降低 胃癌细胞的３Ｈ．ＴｄＲ掺入，其效应与药物剂量呈明显正相关。奥曲肽可诱导ｓＧｃ一７９０１胃癌细胞捅亡，其发生率为 １８ ３％士２ ７％。奥曲肽可抑制裸鼠人胃癌原位移植瘤的生Ｋ，其抑瘤率为６２ ３％。胃癌细胞及组织中ＰｃＮＡ的表达 因奥曲肽的干预而明显下调。无论是胃癌细胞还是胃癌组织，均有ｓｓＴＲ．２和ＳＳＴＲ．３基因表达。结论：在体内及体 外，奥曲肽通过ｓｓＴＲ．２和ＳＳＴＲ．３的介导可有效抑制胃癌生长。
’本课题由国家杰出青年科学基金（Ｎｏ．３９７２５０１２）和国家自 然科学基金（Ｎｏ ３０１７０４１８）资助
对胃癌是否有作用目前研究较少。因此，我们通过 体内及体外实验，研究了奥曲肽对胃癌的生长抑制 作用。
材料与方法
一、材料 １．细胞株及实验动物：ＳＧＣ．７９０１人胃腺癌细 胞株为中度分化胃腺癌细胞，上皮样，引种自重庆
3H-TdR掺入法检测淋巴细胞转化率
3H-TdR掺入法检测淋巴细胞转化率—液体闪烁滤膜测量法【目的】1.掌握示踪法的原理及其在机体免疫功能检测上的应用。
2.初步掌握液认计数滤膜测量的基本技术。
【原理】胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA合成的前身物。
人外周血T淋巴细胞在PHA 刺激下发生母细胞转化而增殖，处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。
与此同时，3H-TdR也不断地被摄入细胞内而被放射性标记。
通过液体闪烁计数测量方法，便可了解淋巴细胞增殖活动的情况，籍以了解机体的细胞免疫功能。
【材料和方法】1、主要材料：消毒肝素抗凝管（内含肝素10～20单位）、注射器、微量加样器、微量细胞培养板、49型玻璃纤维滤膜、离心机、细胞培养箱、干燥箱、多头细胞收集器，FJ-2107液体闪烁计数仪。
2、主要试剂完全RPMI-1640培养液（内含15% FCS，25 mM Hepes，5×10-2 mM=巯基乙醇），植物血凝素（PHA，用完全RPMI—1640配成浓度为30 ug/ml）；3H-TdR 工作液18.5KBq/20 ul（中国原子能研究院同位素所）。
闪烁液（二甲苯1000 ml,ppo 7 g,popop 0.5 g）。
3、主要步骤①静脉采血肝素抗凝，充分摇匀后加入细胞微量培养板内（20 ul/孔）。
每个样品设自发转化孔和分裂原刺激孔，均为三个复孔。
②自发转化孔每孔内加完全RPMI 1640液0.2 ml，分裂原刺激孔每孔内加PHA液0.1 ml, RPMI 1640液0.1 ml。
加样后，轻轻震荡混匀，置37℃CO2培养箱内培养。
③细胞培养至56 h，每孔内加入3H-TdR工作液各20 ul。
轻轻震荡混匀后置37℃,CO 2培养箱内继续培养至72 h 终止培养。
④终止培养时，用多头细胞收集器将细胞收集在49型玻璃纤维滤膜上，将滤膜置烤箱内烘干。
⑤滤膜冷却后移入存有5 ml 闪烁液的闪烁杯中，避光放置一段时间后，用FJ-2107液闪计数器测量放射性，结果用刺激指数（SI ）表示。
3H-TdR掺入法检测镉致鲫外周血单个核细胞的增殖抑制
3H-TdR掺入法检测镉致鲫外周血单个核细胞的增殖抑制王永玲;丁磊;吴康【期刊名称】《苏州大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2006(022)004【摘要】以Cd2+浓度1.25、2.50、3.75 mg·kg-1腹腔注射染鲫后,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法研究镉对鲫外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响.检测鲫PBMC的增殖.结果显示:1.25 mg·kg-1组与对照组在不同时间放射性活度(dpm)的差异均无显著性;0d和3d时各染镉组与对照组dpm的差异均无显著性;5d时2.50 mg·kg-1及3.75 mg·kg-1组与对照组及1.25 mg·kg-1组dpm的差异有显著性且呈剂量效应,7d和10d时dpm与5d时基本相同;14d时3.75 mg·kg-1组与其余组dpm的差异有显著性,但已出现缩小的趋势.因此低浓度Cd2+对鲫PBMC增殖的影响不大,高浓度Cd2+则能诱导鲫PBMC增殖抑制.【总页数】3页(P86-88)【作者】王永玲;丁磊;吴康【作者单位】苏州大学,生命科学学院,江苏,苏州,215123;苏州大学,生命科学学院,江苏,苏州,215123;苏州大学,生命科学学院,江苏,苏州,215123【正文语种】中文【中图分类】O504【相关文献】1.用于检测细胞粘附的3H-TdR掺入实验 [J], 孙凯;金伯泉;冯琦;朱勇;杨琨;刘雪松;董帮权2.流式细胞术法与3H-TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究 [J], 高山红;王怀良;王守英3.镉致鲫(Carassius auratus)外周血单个核细胞DNA损伤与增殖抑制 [J], 丁磊;黄鹤忠;吴康;张伟明;时夕金;周建华4.镉对鲫外周血单个核细胞凋亡的诱导 [J], 丁磊;吴康;张伟明;黄鹤忠5.胎肝细胞裂解产物对肿瘤患者外周血淋巴细胞~3H-TdR掺入率和α—醋酸萘酚酶活性的影响 [J], 周剑影;刘玉龙;王国权;段莹莹;戴宏;李元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法
3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法3H胸腺嘧啶核苷(3Hthymidine,3HTdR)掺入试验，是体外淋巴细胞转化试验较客观、重复性好、结果准确的方法之一。
(一) 原理当淋巴细胞受分裂原(PHA等)或特异性抗原刺激发生转化时，必然伴有DNA的大量合成，若将具有放射性的3HTdR加到培养液内，则可被作为合成DNA的原料而摄入转化中的细胞内，测定细胞内放射性物质的相对数量(以脉冲数表示)，就能客观地反映淋巴细胞对刺激物的应答水平。
3HTdR掺入法最初是利用分离纯的淋巴细胞进行试验，近年来逐渐推广采用微量全血法，该法具有采样少，操作简便，并能较正确地反映整个机体免疫状态等优点。
(二) 器材国产FJ353型或YSJ76型液体闪烁计数器，恒温箱，水浴箱，离心机，培养瓶(10ml 链霉素瓶)，其他常用器材。
(三) 试剂1 培养基RPMI1640或TC199培养液。
2 小牛血清50℃ 30min灭活后使用。
3 PHA同形态学方法。
4 3HTdR最好选用比活性为2～10mci/mg分子的制品，将1mci/ml溶液用生理盐水稀释为100μci/ml，于4℃冰箱保存，临用时，再用培养液稀释成10μci/ml 溶液。
5 3%冰醋酸。
6 浓甲酸。
7 30%H2O2。
8 闪烁液PPO(2,5二苯基口恶唑)5g，POPOP〔1,4双(5苯基口恶唑基2苯)〕03g，无水乙醇200ml，甲苯800ml。
(四) 方法及结果1 培养液按1%体积加青、链霉素溶液(含青霉素1万u/ml、链霉素001g/ml)及肝素液(含肝素125u/ml)。
用35%碳酸氢钠溶液调整pH值为72～74，然后加灭活小牛血清使浓度为20%。
再加所需要的PHA，无菌分装于培养瓶内，每瓶1ml。
2 无菌取静脉血05～15ml，按每毫升血加入肝素125u抗凝，进行白细胞计数及分类。
3 将肝素抗凝血液样品注入含1ml培养液的培养瓶内，每瓶01ml，每份样品2～3管，37℃培养72h。
CFSE
货号：C375 CAS NO：150347-59-4活细胞染色-Cellstain- CFSE化学名：5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3',6'-O,O'-diacetylfluorescein 别名：CFSE结构式：分子式：C29H19NO11分子量：557.46价格：性质：外观：白色或浅黄色粉末纯度：>95.0% (HPLC)产品描述CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内聚积并与胞内蛋白共价结合，水解后的CFSE释放出荧光物质，这些共价结合的荧光物分子很少从细胞内脱落。
CFSE标记后的细胞用于体内观察可以长达数周。
因此，CFSE 常被用来做活细胞检测试验和用荧光电镜观察细胞长期活动的试验。
CFSE标记的细胞的激发和发射波长分别为500 nm和520 nm。
染色过程：1. 用DMSO制备1mM 的CFSE溶液。
用PBS或适当的缓冲液将其稀释成10-50 μM的CFSE溶液。
2. 将1/10细胞培养基体积的CFSE溶液加入到细胞培养基中。
3. 在37℃培养细胞15-30分钟。
4. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。
5. 用490 nm激发波长，530 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
常见问题:储存条件：-20℃参考文献：细胞增殖检测：CFSE点击次数：1195 作者：佚名发表于：2008-07-28 12:43转载请注明来自丁香园来源：丁香园一、原理荧光染料CFSE，也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacet ate，succinimidyl ester）即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。
当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，免疫细胞功能检测技术正发挥着日益重要的作用。
免疫细胞如同人体的“卫士”，它们时刻监控并抵御着外界病原体的入侵，维持着身体的健康平衡。
而了解这些“卫士”的功能状态，对于疾病的诊断、治疗以及预防都具有关键意义。
免疫细胞主要包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞）、单核细胞、巨噬细胞等。
不同类型的免疫细胞在免疫反应中承担着不同的角色，因此检测它们的功能也就需要采用多样化的技术手段。
其中，流式细胞术是一种应用广泛的免疫细胞功能检测技术。
它通过让细胞单个地通过激光束，同时结合荧光标记的抗体，能够快速、准确地检测免疫细胞表面标志物的表达情况。
例如，通过特定的抗体标记，可以区分出不同亚型的 T 细胞，如辅助性 T 细胞（CD4+ T 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CD8+ T 细胞），进而了解它们的比例和功能状态。
此外，还能检测免疫细胞表面活化分子的表达，如 CD69、CD25 等，以此来反映免疫细胞的活化程度。
细胞增殖实验也是常见的检测方法之一。
免疫细胞在受到刺激后会发生增殖，通过检测细胞的增殖情况，可以间接评估免疫细胞的功能。
常用的方法有 3H胸腺嘧啶掺入法和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法。
3H胸腺嘧啶掺入法是将放射性标记的胸腺嘧啶掺入到正在分裂的细胞中，通过检测放射性强度来反映细胞的增殖情况。
CFSE 染色法则是利用一种可穿透细胞膜的荧光染料对细胞进行标记，随着细胞的分裂，荧光强度会逐渐减半，从而可以通过流式细胞术检测细胞的分裂代数来评估增殖能力。
细胞毒性检测对于评估免疫细胞的杀伤功能至关重要。
比如，自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CTL 细胞）能够直接杀伤肿瘤细胞或被病毒感染的细胞。
检测细胞毒性的方法包括铬释放法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法。
铬释放法是将靶细胞用放射性铬标记，当免疫细胞杀伤靶细胞后，铬会释放到上清液中，通过检测上清液中的放射性强度来判断细胞毒性。
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3H胸腺嘧啶核苷掺入检查法
3H胸腺嘧啶核苷(3Hthymidine,3HTdR)掺入试验，是体外淋巴细胞转化试验较客观、重复性好、结果准确的方法之一。
(一) 原理当淋巴细胞受分裂原(PHA等)或特异性抗原刺激发生转化时，必然伴有DNA的大量合成，若将具有放射性的3HTdR加到培养液内，则可被作为合成DNA的原料而摄入转化中的细胞内，测定细胞内放射性物质的相对数量(以脉冲数表示)，就能客观地反映淋巴细胞对刺激物的应答水平。
3HTdR掺入法最初是利用分离纯的淋巴细胞进行试验，近年来逐渐推广采用微量全血法，该法具有采样少，操作简便，并能较正确地反映整个机体免疫状态等优点。
(二) 器材
国产FJ353型或YSJ76型液体闪烁计数器，恒温箱，水浴箱，离心机，培养瓶(10ml 链霉素瓶)，其他常用器材。
(三) 试剂
1 培养基RPMI1640或TC199培养液。
2 小牛血清50℃ 30min灭活后使用。
3 PHA同形态学方法。
4 3HTdR最好选用比活性为2～10mci/mg分子的制品，将1mci/ml溶液用生理盐水稀释为100μci/ml，于4℃冰箱保存，临用时，再用培养液稀释成10μci/ml 溶液。
5 3%冰醋酸。
6 浓甲酸。
7 30%H
2O
2。
8 闪烁液PPO(2,5二苯基口恶唑)5g，P
OPOP〔1,4双(5苯基口恶唑基2苯)〕
03g，无水乙醇200ml，甲苯800ml。
(四) 方法及结果
1 培养液按1%体积加青、链霉素溶液(含青霉素1万u/ml、链霉素001g/ml)及肝素液(含肝素125u/ml)。
用35%碳酸氢钠溶液调整pH值为72～74，然后加灭活小牛血清使浓度为20%。
再加所需要的PHA，无菌分装于培养瓶内，每瓶1ml。
2 无菌取静脉血05～15ml，按每毫升血加入肝素125u抗凝，进行白细胞计数及分类。
3 将肝素抗凝血液样品注入含1ml培养液的培养瓶内，每瓶01ml，每份样品2～3管，37℃培养72h。
在培养结束前16～24h，每瓶加入3HTdR 1μci。
4 培养结束后，将培养物移到离心管内，用3%冰醋酸6ml分两次冲洗培养瓶，并将冲洗液也放入离心管内，2000 r/min离心10min，如此反复两次。
5 最后在沉淀中加30% H2O2 1滴，85℃水浴加温15min，待溶液呈无色，再加浓甲酸0.5ml后，继续加热30min，使沉淀物完全消化溶解。
6 将消化溶解的液体移于测样杯内，用红外线灯或80℃热空气烘烤至液体体积少于01ml，加闪烁液5ml，用液体闪烁计数器测定每分钟脉冲数(cpm)。
7 取各管测定读数的平均值，即为01ml全血检测的脉冲数。
再按血样淋巴细胞计数结果，校正成每百万淋巴细胞的脉冲数(cpm/106淋巴细胞)。
亦可用刺激指数(SI)表示试验结果。
为此，须在培养时设同样数量的不加PHA
的对照管，试验管脉冲数之比即为刺激指数。
SI=加PHA管cpm不加PHA管cpm (五) 注意事项
1 培养基TC199或RPMI1640培养基都能得到良好结果，Eagle MEM亦较常用，其他许多种组织培养基，包括05%水解乳蛋白、Hanks液也都可用于实验，但做实验动物淋转试验时，特别是检测小鼠淋巴细胞转化率时，则以RPMI1640培养基效果最好，Eagle MEM亦可，TC199则不成功。
2 其他培养条件血样与培养基比例在1∶10至1∶30之间。
培养容器国外多用螺纹口盖的培养管或微型培养板，置5%CO2气体环境中培养。
国内采用10ml容量的链霉素瓶，塞上胶塞放普通气体环境中培养，有时发现同一样品在不同管培养物上所得的结果差别较大，其原因可能是各管胶塞松紧不一，造成管内、外气体交流情况不同所致。
3 闪烁样品制备有关问题培养后制备闪烁测定样品的方法大体有均相法(或称溶解法)和滤膜法两类。
(1) 均相法：是使培养物经过红细胞溶解，洗脱未被摄入的放射性物，沉淀大分子物质，并使之消化溶解，便于均匀分布在闪烁液中。
上述方法即为均相法的一种。
不同实验室的具体操作法和应用的试剂常有不同，溶解红细胞多用1%～3%醋酸，但也有使用蒸馏水。
许多实验室多用5～10%三氯醋酸(TCA)沉淀大分子物质，使洗液不致流失，消化溶解，最后沉淀物多采用强酸和氢氧化钠。
(2) 滤膜法：均相法处理样品须反复多次离心沉淀，操作繁琐，耗费时间，因此有逐渐被滤膜法取代的趋势。
滤膜有玻璃纤维和微孔滤膜两种，直径2～25cm，孔径03～045μm。
处理方法是先使培养物的红细胞溶解(加3%醋酸或蒸馏水)，移于滤膜上减压抽滤，再依次使约10ml生理盐水、5～10ml的5%～10%三氯醋酸溶液、3～5ml无水乙醇通过滤膜，最后将滤膜移于测样杯内，加5ml闪烁液测定。
(3) 闪烁液：30%三联苯甲苯溶液或4%～5%PPO甲苯溶液均可使用。
如添加0.1%～0.4%FOPOP可提高测定效率。
闪烁溶剂中加入一定比例的醇类(如无水乙醇)，则可容纳处理后样品中可能残留的水分，但闪烁液的溶水量仍然很低，故须将样品
烘干或接近干燥后再加闪烁液，否则将发生混浊而无法测定。
若闪烁液内含1/3体积的异辛基苯氧聚乙氧乙醇( TritonX100)，其容水量可达15%，消化溶解后的样品不必烤干，即可添加闪烁液测定。
(4) 对照问题：由于绝大多数样品的对照(即不加PHA培养后的检测结果)，其cpm与本底比较接近，不同样品之间的少许差别也不易确定其意义，故依据刺激指数以表示转化水平(刺激指数一般在100左右)，不如直接用cpm的绝对值表示更明确可靠，因此，可以省略对照，而用样品单位体积(以上为01ml全血)cpm/106淋巴细胞表示结果。
实验动物，特别是小鼠的淋转试验结果，通常须用刺激指数表示，但因为在正常动物不同个体之间，不论是加PHA培养管或不加PHA培养的对照管，cpm差别较大，有时可达10倍左右，试验时必须设相同数量的对照培养管，测定后计算刺激指数，才能比较正确地反映机体的免疫应答水平。