丙型肝炎病毒抗体IgG (抗-HCV·IgG)标准操作程序SOP文件
20HCV临床检验标准操作规程
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）临床检验标准操作规程项目名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）操作规程文件号：KM-SOP-CLIA-020第1版第 1 页共 4 页2008年1月1日起实施，2010年9月1日修订起草人：起草日期：2007-12-14复核人：复核日期：批准人：批准日期：分发部门或个人：1.实验原理：本品采用合成多肽的HCV core、NS3、NS4、NS5区特异性抗原包被化学发光微孔板，待测血清中HCV抗体与包被抗原结合，再与抗人IgG-HRP反应，充分洗涤后，加入化学发光底物液，于5 -30分钟内测定其发光强度（RLU），根据临界值判断样本中是否含有HCV抗体。
本品应用间接法原理检测人血清或血浆中的抗-HCV IgG抗体。
2.临床应用：丙型肝炎（Hepatitis C，HC），是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）引起的一种世界性的肝脏疾病。
HCV基因组为一线状单股正链RNA病毒，直径50-60nm，其基因组为10kb单链RNA分子，编码区包括两部分，即结构区与非结构区，属于黄病毒属。
HCV主要通过血液传播、性传播、母婴传播等等，我国的HCV感染途径主要以输血或血制品为主，尤其反复输入多个献血员的血或血制品更易发生。
3.标本采集及处理：3.1检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本；溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。
3.2受检者准备：受检者无需做特殊准备；3.3标本采集及处理：宜空腹采集静脉血，无需抗凝，采用离心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；使用抗凝剂（浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/mL肝素，10mmol/L草酸钠）不影响检测结果。
样本中含有0.15mg/mL的胆红素，10.0mg/mL的血红蛋白或1.0mg/mL的甘油三酯的阴性样本均无交叉反应，3.4标本保存：留取的标本最好在当天检测，不能立即检测的应放置于2-8℃不应超过3天，血清置于-20℃以下可长期保存，但应避免反复冰融3.5标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管；3.6标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
丙型肝炎病毒抗体检测试剂
丙型肝炎病毒抗体(金标法)SOP【检验原理】本试剂使用包被HCV混合抗原和免疫HCV抗体包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，另外用胶体金标记HCV混合抗原，应用免疫层析双抗原夹心法原理检测人血清中的HCV抗体。
当待检标本中含HCV 抗体时，该抗体与金标抗原形成”抗体-金标抗原复合物”，并在层析作用下向前移动，与包被抗原形成“抗原-抗体-金标抗原复合物”，出现一条肉眼可见的紫红色沉淀线（检测线，T），包被膜上还有一条控制反应过程的质控线（C），根据质控线是否出现判断检测是否有效：根据检测线是否出现，判断待测标本中是否含有HCV 抗体。
【主要组成成份】HCV混合抗原（固相金标物），包被HCV混合抗原（固相有检测线），免疫HCV抗体（质控线）。
【样本要求】取静脉血，静置使其自然收缩，离心得血清。
血清样本2-8°C冰箱存放最好不超过3天，若不能及时检测应-20°C冻存。
【检测方法】测试条把测试条和样本预先平衡至室温（20~30°C）。
在没有准备好之前，不可撕开铝箔袋，测试条打开包装后需在1小时内使用（湿度：20%~90%）。
1、打开铝箔袋，取出测试条，放在台面上。
2、用吸管加一滴（约25μL）样本于测试条指示箭头下端的加样处。
3、随即滴加2滴样本稀释液（约100μL）4、10~20分钟观察结果，20分钟后结果无效。
测试卡把测试卡和样本预先平衡至室温（20~30°C）。
在没有准备好之前，不可撕开铝箔袋，测试卡打开包装后需在1小时内使用（湿度：20%~90%）。
1、打开铝箔袋，取出测试卡，放在台面上。
2、用吸管加一滴（约25μL）样本于测试卡S孔内。
3、随即滴加2滴样本稀释液（约100μL）到测试卡上的D孔内。
4、10~20分钟观察结果，20分钟后结果无效。
丙型肝炎病毒抗体IgG (抗-HCV·IgG)标准操作程序SOP文件
4、加酶：除空白对照孔外，每孔加入2滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴15分钟。
5、洗涤：同步骤3。
6、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻拍混匀后，置37℃水浴15分钟。
7，每孔加终止液50ul。
2、试剂用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、若浓缩洗涤出现结晶，可于37℃放置至溶解。洗涤要充分，各孔均须加满，防止孔口内游离酶不能洗净。
6、本试剂盒应视为为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作
临界值（C.O.）=0.140+阴性对照平均OD值；
样本OD值＞临界值,为抗-HCV·IgG阳性;否则为阴性。
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
酶联免疫吸附试验：阴性
[临床意义]:
（1）在输血后患肝炎有80－90%的病人是丙型肝炎，其中大部分为阳性。
（2）在乙型肝炎患者中，特别是经常使用血制品（血浆、全血）的病人可以引起丙肝病毒的合并感染，使疾病转为慢性化、肝硬化或者肝癌。所以对乙型肝炎的复发病人或是慢性肝炎病人要进行HCV－Ab的检测。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-15
丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCV·IgG)
丙肝的操作规程
丙肝的操作规程丙肝是指由丙型肝炎病毒（HCV）引起的肝组织感染，丙型肝炎是一种慢性病毒性疾病，其传播途径主要包括输血、静脉毒品注射、性传播以及注射药物使用等。
为了规范丙肝的操作，保障工作人员和患者的健康安全，制定一套操作规程是非常重要的。
以下是丙肝的操作规程，供参考：1. 丙肝预防措施- 工作人员接受专业培训，了解丙肝的传播途径、病毒特性以及感染控制的方法。
- 严格遵守感染控制的标准预防措施，包括洗手、佩戴一次性手套、穿戴防护服等。
- 建立和执行规范的感染控制程序，保证环境的清洁和消毒。
2. 丙肝患者的管理- 丙肝患者应接受专业的医疗管理，并遵循医生的建议和治疗方案。
- 避免与丙肝患者共用个人卫生用品，如牙刷、刮胡刀等。
- 尽量减少直接接触患者的体液和分泌物，如血液、尿液、唾液等。
3. 丙肝的诊断和筛查- 对于高危人群（如输血史、注射药物史等）进行丙肝的筛查和检测。
- 采用可靠的丙肝检测方法，如抗体检测、核酸检测等。
- 定期对工作人员进行丙肝的筛查和检测，保证工作环境的安全。
4. 操作流程- 在操作过程中，工作人员应佩戴一次性手套，避免直接接触血液和其他体液。
- 所有使用的医疗器械和仪器应经过严格消毒和灭菌处理，确保无丙肝病毒残留。
- 执行消毒程序，对接触到患者体液的表面和设备进行消毒处理。
5. 操作后的处置- 操作结束后，工作人员应妥善处理一次性手套和其他废弃物，避免交叉感染。
- 对操作台面、工作区域和设备进行彻底清洁和消毒，保证操作环境的卫生。
- 定期进行设备的维护和检修，确保设备的正常运行和安全使用。
6. 丙肝的教育和宣传- 对工作人员进行丙肝知识的教育和培训，提高其对丙肝的认识和防控意识。
- 开展丙肝宣传活动，提高公众对丙肝的认识和了解，促进丙肝防控工作的开展。
总结：丙肝的操作规程是保障工作人员和患者健康安全的基础，通过严格的操作流程和感染控制措施，可以有效预防和控制丙肝的传播。
在实际操作过程中，要严格遵守预防措施，保持良好的个人卫生习惯，并不断加强对丙肝知识的学习和宣传，提高防控意识和能力。
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书
丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。
三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。
而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。
丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。
HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。
通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。
临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。
四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。
以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
HCV 操作规程
d.浓缩洗液：1瓶(40 m1)，使用前用去离子水做1：25倍稀释
e.增强液：1瓶(20 m1)
f.微孔反应板：一块(12*8，包被有HCV抗原)
g.吸头：20支
h.封片纸：3张(封板用)
i.说明书：1份
医院：
科：
室
丙型肝炎病毒抗体定性诊断试剂盒
9.3试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。
8.4振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。
9.5微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。
2.样本处理
血液样本尽快送实验室，室温下离心分离出血清，置于洁净离心管中保存。
3.试剂
本科室使用苏州新波生物技术有限公司丙型肝炎病毒抗体（HCV）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：
a.阴阳性对照：2瓶(1m1)
b.生物素标记HCV抗原冻干品：1瓶(1m1)，使用时复融后作1：21倍稀释
时间分辨免疫荧光分析法
标准操作规程
版本：
执行日期：
共3页 第2页
4.仪器（用户自备）
4.1时间分辨荧光分析仪，ANYTEST2000；
4.2微孔洗涤机，Egate2310；
4.3微孔振荡器，2510变频振荡器；
5.操作步骤
5.1工作洗液：将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤液；
5.2生物素标记抗原工作液：每瓶生物素标记HCV抗原的冻干粉加1000uL纯水，静置30分钟，待其充分溶解。使用前一小时内将其按所需量1：21倍稀释并一次用完(使用一次性的塑料容器来配制)。
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程
丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程1.检验目的用于体外定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒(HCV)抗体。
2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫层析技术，应用间接法原理定性检测人血清(浆)HCV抗体。
在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体(anti-IgGAb),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原(Core、NS3、NS4、NS5,源自大肠杆菌)和人IgG 抗体(丙种球蛋白)。
检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG 抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgGAb-HCVAb-HCVAg”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。
3.性能特征3.1用国家参考品测定，产品性能应符合以下要求。
3.1.1阴性参考品符合率：对20份阴性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阴性结果。
3.1.2阳性参考品符合率：对20份阳性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阳性结果。
3.1.3最低检出量：灵敏度1号1:8进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
灵敏度2号1:64进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。
3.1.4精密性：用精密性参考品平行检测10次，均在15分钟内显示出清晰可辨的检测线，且显色深度无显著差别。
3.1.5稳定性：试剂盒置37℃20天，阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密性均应符合要求。
3.2乙肝、人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝、庚肝、戊肝、类风湿因子(RF)、红斑狼疮等各种类型的标本不会对测试产生干扰。
3.3胆红素(342.0μmol/L)、胆固醇(20.7mmol/L)、血红蛋白(5.0g/L)、甘油三酯(28.2mmol/L)),不影响检测结果。
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3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、若浓缩洗涤出现结晶，可于37℃放置至溶解。洗涤要充分，各孔均须加满，防止孔口内游离酶不能洗净。
6、本试剂盒应视为为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作
[临床意义]:
（1）在输血后患肝炎有80－90%的病人是丙型肝炎，其中大部分为阳性。
（2）在乙型肝炎患者中，特别是经常使用血制品（血浆、全血）的病人可以引起丙肝病毒的合并感染，使疾病转为慢性化、肝硬化或者肝癌。所以对乙型肝炎的复发病人或是慢性肝炎病人要进行HCV－Ab的检测。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
临界值（C.O.）=0.140+阴性对照平均OD值；
样本OD值＞临界值,为抗-HCV·IgG阳性;否则为阴性。
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
酶联免疫吸附试验：阴性
3、阳性对照血清8、终止液
4、酶标记物溶液9、浓缩洗涤液5、样本稀释液（用蒸馏水1：20稀释后使用）
[试剂厂家]
深圳月亮湾工程有限公司
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
[标本的收集与处理]
标本为无血血清。
[操作步骤]
1、加对照：设空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔，并直接加入100ul阴、阳性对照血清。2、加样：(1:11)稀释：在板孔底部，加入2滴（100ul）样本稀释液，再分别加入10ul样本，轻轻振荡封板后，置37℃水浴20分钟。
3、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复4次，最后一次在吸水纸上拍干。
4、加酶：除空白对照孔外，每孔加入2滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴15分钟。
5、洗涤：同步骤3。
6、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻拍混匀后，置37℃水浴15分钟。
7，每孔加终止液50ul。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-15
丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCV·IgG)
版序：abcd
页码：第1页，共2页
[原理]
本试剂盒用间接法检测人血清或血浆中的抗-HCV·IgG抗体。具有简便、快速、准确及可多次使用等优点。
[试剂盒组成]
1、包被板条6、底物液A
2、阴性对照血清7、底物液B
[结果判定]
1、目测：在白色背景下观察各孔颜色，呈明显兰色或显色深于阴性对照者判为阳性；显色与阴性对照相近或稍深于阴性对照者判为阴性。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-15
丙型肝炎病毒抗体IgG(抗-HCV·IgG)
版序：abcd
页码：第2页，共2页
2、酶标仪检测（选择波长450nm）：每孔加终止液1滴，用空白孔校零，测定各孔OD值。