细胞活体染色技术
细胞生物学实验细胞活体染色技术
02030401Contents实验目的Experimental purpose01.实验目的Experimental purpose1．学习细胞活体染色的方法。
2．观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。
实验原理Experimental principleExperimental principle活体染色：是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造。
分类：体内活体染色和体外活体染色。
Experimental principle试剂原理：1.詹纳斯绿B(Janus green B)能够活染线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态(即有色状态)，在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
2.中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，该染料对液泡系具有一定专一性。
3.台盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料，它可以把死亡细胞的质膜染色，可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞实验用品Experimental supply03.实验用品Experimental supply(一）材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。
(二)器械：显微镜、镊子、刀片、剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。
(三)试剂：L．Ringer氏液NaCl 0．90gKCl 0．42gCaCl2 0．25g2．1／3000中性红溶液先配制1％的中性红Ringer氏原液，因中性红难溶解，需稍加热，(30℃-40℃)使之溶解，过滤，将滤液装入棕色瓶中暗处保存，临用前取少许原液用Ringer氏液稀释成1／3000的中性红溶液。
3．1／5000詹纳斯绿B先配制1％詹纳斯绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。
4．台盼蓝染色液将1克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中5．香柏油、二甲苯、蒸馏水等。
实验方法Experimental methods04.实验方法Experimental methods(一)液泡系的中性红活体染色黄豆芽根尖1．用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。
细胞活体染色技术
（三）人口腔粘膜上皮细胞线粒体 1、取清洁载玻片放在37摄氏度的恒温水浴锅 的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B 2、用牙签取上皮细胞，将刮下的粘液状物放 入载玻片染液中，染色10-15分钟（不可干 燥），盖上盖玻片，吸去多余的溶液，镜 检
三、台盼蓝鉴别死活细胞 抽取小鼠腹腔水细胞涂于载玻片上，滴台盼蓝 一滴，盖上盖玻片观察 四、注意事项 1、在从小鼠体内取肝组织块时要尽量快，从而能够 保证它更高的活性。 2、染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可 完全 淹没，以便使线粒体酶系得到氧化。 3、在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚 的地方选取。 4、观察前要将肝组织充分剪碎，制片时要吸取上悬 液，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，而要避 免吸取稍大的组织块
生物系
实验目的
• 学习细胞的染色方法
• 观察动植物细胞内的线粒体某些无毒的或毒性较小的 染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下 显示细胞的天然构造。 • 詹纳斯绿B能够活染线粒体为蓝色（细胞色 素酶系）
• 中性红能够活体染色液泡系为红色（专一 性） • 台盼蓝可以使死细胞着色（鉴别）
2、打开腹腔，在横隔膜的下方，在胃的前方 找到深红色的肝脏 3、取出肝脏，在肝脏的边缘较薄的地方剪一 小块，放在盛有Ringer氏液的表面皿中洗去 血液 4、将肝组织洗净后吸去血液，加入1/5000的 詹纳斯绿B染色30分钟，不可将组织完全浸 没 5、染色后撕开组织块，用吸管吸取溶液，放 在载玻片的Ringer氏液中，垫两根头发，加 盖玻片，镜检
二、线粒体的活体染色 （一）植物细胞中的线粒体 1、用镊子撕取洋葱内表皮一小块，放在载玻 片上用1/5000詹纳斯绿B染色30分钟 2、吸取染液，滴加Ringer氏液，盖上盖玻片， 镜检观察线粒体的分布、颜色、形态
活体染色名词解释
活体染色名词解释活体染色是一种广泛应用于生物学研究的技术，它可以用来研究细胞的结构、功能和遗传特性等方面。
本文将从名词解释的角度，详细介绍活体染色的相关概念、原理、方法和应用等内容。
一、活体染色的概念活体染色是指在不破坏细胞结构和功能的情况下，对细胞进行染色的过程。
它是一种在活体中观察细胞结构和功能的重要手段，可以为生物学研究提供有关细胞内部结构和功能的信息。
二、活体染色的原理活体染色的原理是通过染料与细胞内的不同成分发生特异性反应，从而使细胞结构和功能得到染色。
染料可以与细胞内的某些化学物质结合，形成染色体或染色体前体，进而反映细胞的形态和功能。
三、活体染色的方法活体染色的方法可以分为直接染色和间接染色两种。
1、直接染色直接染色是指直接将染料加入到活体中，通过染料与细胞内成分的特异性反应，使细胞得到染色。
直接染色的优点是操作简便、染色时间短，但缺点是染色结果不稳定，染色体易于破裂，因此适用于对细胞染色要求不高的情况。
2、间接染色间接染色是指先将染料与某种物质结合，形成染色物质，然后将染色物质加入到活体中，通过染色物质与细胞内成分的特异性反应，使细胞得到染色。
间接染色的优点是染色结果稳定、染色体不易破裂，但缺点是操作复杂、染色时间长，因此适用于对细胞染色要求较高的情况。
四、活体染色的应用活体染色在生物学研究中具有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1、细胞形态和结构的研究活体染色可以用来研究细胞的形态和结构，如细胞核、细胞质、细胞器等的形态和位置关系。
例如，通过对细胞染色可以观察到细胞核的形态、大小、位置等特征，从而了解细胞的生长、分裂和发育等过程。
2、细胞功能的研究活体染色可以用来研究细胞的功能，如细胞代谢、细胞分化、细胞分裂等过程。
例如，通过对细胞染色可以观察到细胞内的各种代谢产物、酶活性等，从而了解细胞的代谢过程；还可以观察到细胞的分裂和分化过程，了解细胞的生长和发育规律。
3、细胞遗传特性的研究活体染色可以用来研究细胞的遗传特性，如染色体的数量、形态和位置等。
实验二液泡系和线粒体的活体染色法
实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。
动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。
在一切动物细胞内皆有。
通常为圆形泡状，数目多少不定。
除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。
液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。
液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。
动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。
在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。
根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。
小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。
经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。
含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。
如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。
此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。
为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。
因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。
细胞材料要浸泡在生理盐水中。
长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。
（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。
3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。
活体染色名词解释
活体染色名词解释活体染色，是一种在生物学领域中广泛应用的技术，也称为细胞染色。
它是一种将活体细胞中的染色体和细胞器染色的方法，以便于观察和研究细胞的结构、功能和代谢过程。
在生命科学研究中，活体染色技术已经成为一种不可或缺的工具之一。
在活体染色中，最常用的染色剂是荧光染料。
这些染料具有强烈的荧光特性，可以在显微镜下观察到。
荧光染料广泛应用于生物学、医学和生物工程学等领域，用于研究细胞的生命活动和疾病的发生机理。
活体染色技术的应用范围非常广泛。
在生物学领域中，它被广泛用于研究细胞分裂、细胞分化和细胞凋亡等过程。
在医学领域中，它被用于研究癌细胞、病毒和细菌等病原体的生长和繁殖，以及研究药物的作用机理。
在生物工程学领域中，活体染色技术被用于研究基因表达、蛋白质结构和功能等。
活体染色技术的发展历程非常悠久。
早在19世纪初期，科学家就开始使用染色剂来观察细胞的结构和功能。
在20世纪初期，发现了荧光染料，这使得活体染色技术的应用范围更加广泛。
随着显微镜和成像技术的发展，活体染色技术的精度和可靠性也得到了极大的提高。
活体染色技术虽然具有很多的优点，但也存在一些局限性。
首先，活体染色技术需要特定的实验条件，如培养基的温度、湿度和pH值等，这使得实验的复杂度和成本较高。
其次，活体染色技术对细胞的生命活动有一定的干扰作用，可能会导致细胞的死亡或变异。
因此，在使用活体染色技术时需要谨慎操作，避免对实验结果产生不良影响。
总之，活体染色技术是一种非常重要的生物学工具，可以帮助科学家研究细胞的结构、功能和代谢过程。
虽然它存在一些局限性，但随着技术的不断发展，相信活体染色技术在未来会有更广泛的应用和更好的发展。
活体染色技术
活体染色技术染色技术是生物学研究中常用的一种技术手段，它可以用来观察和研究生物体的细胞结构和功能。
传统的染色技术通常需要对生物样本进行固定和破坏，这可能导致染色结果与原始样本存在一定差异。
为了解决这个问题，科研人员开发了一种新的技术，即活体染色技术。
本文将介绍活体染色技术的原理、应用以及其在生命科学研究中的重要性。
一、活体染色技术的原理活体染色技术是指在不破坏生物样本的情况下，直接对活体细胞进行染色。
这一技术的实现基于荧光染料的特性，荧光染料能够在细胞内部产生荧光信号。
通过对特定的细胞结构或分子进行染色，科研人员可以观察到细胞内部的结构和功能信息。
相比于传统的染色方法，活体染色技术可以更准确地反映生物样本的真实状态。
二、活体染色技术的应用活体染色技术在生物学研究中有着广泛的应用。
首先，它可以用于观察细胞的结构和功能。
例如，科研人员可以用活体染色技术来观察细胞器的分布和动态变化，研究细胞的功能和代谢过程。
其次，活体染色技术还可以用于研究细胞信号传导和基因表达调控机制。
通过对信号分子或转录因子进行染色，科研人员可以观察到其在细胞内的定位和活动，进而揭示细胞内部的信号传递机制和基因调控网络。
此外，活体染色技术还可以应用于细胞分化和发育研究、肿瘤细胞的研究以及药物筛选等方面。
三、活体染色技术的意义活体染色技术在生命科学研究中具有重要的意义。
首先，它能够提供更准确和真实的数据。
相比于传统的染色方法，活体染色技术可以在不破坏生物样本的情况下获得染色结果，从而更好地反映生物样本的真实状态。
其次，活体染色技术可以提高实验效率和节约资源。
传统的染色方法通常需要多个步骤和较长的处理时间，而活体染色技术可以大大缩短实验时间，并且不需要额外的固定和处理步骤，节省了实验用品和试剂的消耗。
综上所述，活体染色技术是一种在不破坏生物样本的情况下直接对活体细胞进行染色的技术。
它通过荧光染料的特性实现，可以观察和研究细胞的结构和功能。
细胞活体染色技术
02
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色
*
人口腔上皮细胞的线粒体分布
在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
”
*
中性红
中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定专一性。
比较线粒体在动、植物中的分布、颜色，其形状如何?
03
*
Thank you
thanks
⑵用动物细胞观察线粒体的活体染色
娶取鼠肝肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液表面皿中洗去血液 ↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 撕开组织块，这样溶液中会有一些细胞或细胞群 ↓ 吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中 ↓ 垫上两根短头发，盖上盖玻片进行镜检
*
单击此处添加副标题
202X
细胞活体染色技术
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实验目的
细胞膜结构
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实验原理
一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。
*
实验用品
材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。 试剂： Ringer氏液 1／3000中性红溶液 1／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
实验四 细胞膜的通透性及细胞活体染色技术
四、实验步骤
1. 液泡系的中性红活体染色 取黄豆芽的根尖处的纵切面 ↓ 于载玻片上的中性红染液中染色 5─10min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer Ringer液 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检
2.线粒体的活体染色 线粒体的活体染色
⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓ 于载玻片上的1/5000 1/ 5000 Janus green B染色 于载玻片上的 染色30min 染色 ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 吸去染液，滴一滴 液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检
较为常见的活体染色剂
•詹纳斯绿：专一用于线粒体的染色。它可以和 詹纳斯绿：专一用于线粒体的染色。 詹纳斯绿 的染色 细胞色素C 结合， 线粒体中的细胞色素 氧化酶结合 线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，保持氧化状 即有色状态)呈蓝绿色, 态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中 染料被还原,成为无色状态。 染料被还原,成为无色状态。
未溶血
溶血后
• 非极性化合物易溶于脂溶剂， 非极性化合物易溶于脂溶剂， 但在水中溶解度很小。碳链越长， 但在水中溶解度很小。碳链越长， 脂溶性越大。 脂溶性越大。 • 分配系数 —— 一种化合物在脂溶
剂中的溶解度与其在水中溶解度之比
各种非电解质溶液， 各种非电解质溶液，只要单位 体积中的分子数相同， 体积中的分子数相同，渗透压亦相 同。 • 若电解质溶液， 若电解质溶液，如NaCl与葡萄 糖分子数相同时， 糖分子数相同时，NaCl的渗透压要大 得多。 得多。
溶液 1mol/L异丙醇 1mol/L丙三醇 1mol/L葡萄糖 相对分子质量 62 92 180 溶血时间
2 . 脂溶性大小对细胞膜通透性的影响
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材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。
器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解 剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管 、收水纸等。
试剂：Ringer氏液
1／3000中性红溶液
1／5000詹纳斯绿B
台盼蓝染色液
香柏油、二甲苯、蒸馏水等
1. 液泡系的中性红活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓
詹纳斯绿B(Janus green B) 中性红 台盼蓝(trypan blue)
能够染活线粒体为蓝色，主要是由 于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染 料始终保持在氧化状态(即有色状态) ，在周围的细胞质内，这些染料被还 原为无色的色基(即无色状态)。
一定要注意，只有具有活性的细 胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧 化，从而使它显出颜色
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的 金属板上 ↓
滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓
用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液 滴中 ↓
染色10~l5min(注意不可使染液干 燥，必要时可再加滴染液)
口腔黏膜上皮细胞及线粒体
•在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
Hale Waihona Puke 滴加1%台盼蓝1滴 ↓盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
thanks
谢谢
中性红是液泡系的特殊活体染
色剂，它可将不同发育时期的液 泡染成不同深度的红色，在细胞 处于生活状态下细胞质和核不被 染色，该染料对液泡系具有一定 专一性。
台盼蓝(trypan blue)是一种 偶氮类酸性染料，它可以通过 死亡细胞的质膜而使细胞着色， 但不能通过活细胞的质膜，故 可用台盼蓝鉴别活细胞与死细 胞。
细胞活体染色技术
活体染色是利用某些无毒或毒 性较小的染色剂，在不影响细胞生 命活动的情况下显示细胞的天然构 造，更具真实性。活性染色又分为 体内活体染色和体外活体染色。
活体染色分为体内活染和 体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内，染 色后再取材观察。后者是 取材后，对离体的活细胞 进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需 供给细胞以正常的温度， 渗透压，PH等。
吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓
盖上盖玻片进行镜检
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块 ， 放入盛有Ringer氏液的表面 皿中洗去血液。将肝组织洗净后吸 去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染 液染色30分钟，注意不可将组织块 完全淹没。染色后撕开组织块，这 样溶液中就会有一些细胞或细胞群 。用吸管吸取溶液，放在载玻片的 Ringer氏液中。垫两根短头发，加 盖玻片，即可镜检。用油镜观察活 染色的线粒体标本，要不断地来回 转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢 慢移动。使材料总是得到氧气，线 粒体的染色才显得非常清楚。