Hoechst染色方法
hoechst染色原理
hoechst染色原理
目前最常用的染色方法是荧光染色法。
这种染色法利用荧光标记的染料与待测样品中的目标分子特异性结合，从而实现对目标分子的检测。
在荧光染色法中，常用的染料有荧光素（Fluorescein）、罗丹明（Rhodamine）以及具有更高荧光强度的荧光素衍生物，如荧兴蓝（FluoroX blue）和荧兴绿（FluoroX green）等。
这些染料具有荧光物质的特点，可以吸收特定波长的光，然后发射出特定波长的荧光。
在荧光染色法中，待测样品首先与染料进行孵育反应，使染料与目标分子特异性结合。
随后，通过荧光显微镜或荧光探针对结合后的染料进行观察和检测。
荧光显微镜可以通过特定的滤光片选择性地观察染料激发和发射的荧光信号，从而实现目标分子的定位和定量分析。
总的来说，荧光染色法利用荧光标记染料与目标分子的特异性结合，通过观察和检测染料的荧光信号来实现目标分子的定位和定量分析。
这种方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，因此在生物医学领域的研究和临床应用中得到了广泛应用。
hochest 染色及流式
hochest 染色及流式Hochest染色及流式染色技术在生物学和医学领域中起着重要作用，其中Hochest染色是一种常用的荧光染色方法。
Hochest染料是一类荧光染料，常用于细胞和组织的核酸染色。
本文将介绍Hochest染色的原理和应用，并结合流式细胞术探讨其在生物研究中的意义。
让我们了解一下Hochest染色的原理。
Hochest染料是一类DNA特异性染料，可以通过与DNA双链结合来发射荧光。
Hochest染料有多种不同的类型，如Hochest 33342和Hochest 33258等。
这些染料都具有很高的DNA亲和力，能够与DNA的碱基序列发生相互作用，从而实现染色的效果。
Hochest染色在细胞和组织学研究中具有广泛的应用。
首先，Hochest染色可以用于检测细胞核的形态和数量。
通过将Hochest 染料与细胞一起处理，可以使细胞核发出荧光信号，从而观察和分析细胞核的形态和数量变化。
这对于细胞周期研究、细胞增殖和凋亡等过程的研究非常重要。
Hochest染色还可以用于染色体分析。
在细胞分裂过程中，可以使用Hochest染色来观察和分析染色体的形态和数量变化。
这对于研究染色体异常、染色体结构和功能等方面具有重要意义。
此外，Hochest染色还可以用于研究DNA损伤和修复、DNA合成和复制等过程。
除了Hochest染色技术本身，流式细胞术也是一种常用的生物研究技术。
流式细胞术利用荧光染料标记的细胞或细胞器，通过流式细胞仪进行检测和分析。
结合Hochest染色和流式细胞术，可以更精确地分析细胞核的形态和数量，进一步研究细胞的生物学特性。
流式细胞术在生物研究中有着广泛的应用。
首先，流式细胞术可以用于细胞表型分析。
通过荧光染料标记的抗体，可以对细胞表面标记物进行定量分析，如细胞膜蛋白、细胞间连接蛋白等。
这对于研究细胞分化、细胞功能和细胞亚群的分离非常重要。
流式细胞术还可以用于细胞周期分析。
通过Hochest染色和荧光染料标记的抗体，可以对细胞周期不同阶段的细胞进行定量分析。
细胞染色方法总结(干货分享)
细胞染色方法总结Hoeｃｈst染色：ｈoｅｃhst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoecｈst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。
ｈｏｅｃhst 有hｏｅchest33３42和hoechst3３2５8两种hｏｅchｓts33258，hoeｃｈst333４２二者区别不大,但是hｏeｃｈst33３42对细胞的毒性作用更小一些,所以一般来说hｏｅcｈsts3３2５8用于细胞固定后再染色，而hoechsｔ3３3４2则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI （Ｐroｐiｄium Ｉodide碘化丙啶）染色：是一种可对DＮＡ染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。
碘化丙啶（Ｐｒoｐidium Iｏdide, PI)是一种核酸染料（红色）,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。
用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色)。
但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。
但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PＩ单一染色显然不够! annexin—v染色细胞凋亡早期，细胞膜标志发生改变.其中，磷脂酰丝氨酸(Annexin-V，PS）外翻,Annexin-Ｖ在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合．这样,Ａnnexin-v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态.Anneｘｉn－V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用ＰE标记就发红色荧光....文档交流仅供参考...JC-1染色ＪＣ－１是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体（monomer)存在,发射光以绿光(～52５nm）为主;而在高浓度时则可以形成多聚体（agｇregａｔioｎ）,发射光以红光(-590nm)为主.线粒体本身存在一定的极性（polarizaｔion),其外膜为负极，内膜为正极。
Hoechst33258 荧光染色法
Hoechst33258 荧光染色法【试剂盒不同，固定染色时间不同。
】
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为1× 106 /ml，接种于6孔培养板中。
置于37°C、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，加入不同浓度的人参皂苷转化物溶液200μl，继续培养24h。
③24h后消化收集细胞，1000r/min离心5min，弃去上清液；用PBS重悬细胞，1000r/min离心洗涤2 次；
④第二次离心洗涤后留少许上清，用微量加样器吸取细胞在洁净载玻片上涂片，室温自然干燥；随即使用甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定15 min；
⑤晾干后于暗处用Hoechst 33258 染色工作液(10mg/l)避光染色10 min后用双蒸
水冲洗5min，抗淬灭封片液封片；
⑥置于激光共聚焦显微镜下，激发波长350nm，发射波长460nm，观察细胞凋亡情况并拍照。
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为5×105/ml，接种于6孔培养板中。
置于37℃、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，一孔加入含10%胎牛血清的完全培养液，其余各孔分别加入高、中、低3个浓度的人参皂苷转化物溶液与顺铂溶液200μl，继续培养48h。
③倒置显微镜下观察各组细胞生长情况和形态变化。
Hoechst 染色
本人收集的激光共聚焦常见荧光染料染色方法zuohy(2008-09-19 17:33:43)一、Hoechst 33258染色1、试剂盒组成固定液 50 mlHoechst 33258染色液 50 ml抗荧光淬灭封片液 5 ml说明书 1 份保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。
本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
2、注意事项：需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
需PBS或0.9%NaCl溶液。
需盖玻片与载玻片。
荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3、使用说明：1）贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。
2）悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
hochest33342染色原理
hochest33342染色原理
hoechst33342染色原理：Hoechst33342渗透细胞膜并与富含A/T 的dsDNA序列的小沟结合，从而优先染色细胞核。
Hoechst33342StainingDyeSolution是一种用于在荧光显微镜下标记DNA的荧光染料。
该产品可用于荧光显微镜、微孔板、比色皿和流式细胞仪应用。
它还可用于通过绘制标准排放－含量曲线来检测样本DNA的含量。
hoechst33342染色步骤：
1、将荧光染料（Hoechst3334
2、AO、PI或EB）以合适浓度直接添加到细胞培养基中。
2、将细胞孵育5分钟。
3、在倒置荧光显微镜下直接观察细胞。
如果需要，在对转染细胞进行重要染色后修复细胞，以进一步详细分析形态：
1、用PBS清洗细胞（此步骤可省略），然后用4%（w/v）多聚甲醛或1%（v/v）戊二醛室温固定细胞5分钟。
2、用PBS清洗细胞。
3、将样品用PermaFluor水性封固剂封固，并在配备适当滤光片的荧光显微镜下检查细胞。
洗涤应尽可能轻柔，以尽量减少死细胞的损失。
Hoechst33342
激发/发射光谱。
当与dsDNA结合时，Hoechst33342在紫外范围(350nm)内具有最大激发波长，并且染料可以在最大发射波长461nm的蓝色通
道中被最佳检测。
Hoechst33342在激发和发射波长之间具有特征性的宽斯托克斯位移，当需要良好的光谱分离以减少荧光干扰时，例如在免疫荧光显微镜的染色质复染中，这种染料是最佳选择。
hoechst PI染色
2008/11/09 09:55PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。
但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。
正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。
故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。
电子天平准确称取1mg 碘化丙啶（propidium iodide，PI）溶于10ml PBS（PH 7.2），成100ug/ml 的储备液，用前等量混合（注意避光）protocol:1、收集细胞，数量需1－2×10E6个（悬浮细胞直接吹起即可，对于贴壁细胞用胰酶消化时，最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子，防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析），离心，11,000rpm，5min。
2、用1ml 冰冷的PBS重悬后，离心：11,000rpm，5min。
3、用200μl冰冷的PBS重悬后，用加样器混匀后，缓慢的加入含有4ml冰冷的70％乙醇的10ml离心管中，边加边摇匀。
－20℃，过夜。
（或者置4℃，1h后进行下一步）4、1,500rpm，10min，小心弃上清后，用1ml冰冷的PBS重悬，1,500rpm，5min。
小心弃上清。
5、加入含有40μg/ml 的PI，100μg/ml的RNase的PBS溶液500μl，37℃，培养30min －1h。
混匀。
溶液配方：PBS 910μlPI 80μlRNase 10μl共1ml6、过滤，供流式检测。
Hoechst 33342/PI双染色法紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;早期凋亡细胞(V A) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NV A) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。
(word完整版)HOCHEST 染色的讨论
Hoechst染色的讨论Hoechst染色的具体步骤caspase8428:我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。
那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB,浓度是多少，用什么稀释,最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片? sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ,经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）:细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3:1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。
凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染.操作比较容易的。
altbenair:想做肝癌细胞 hepG2。
看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样:固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H,将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测.细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化?drake015:。
1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。
操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0。
9％NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜,使约为50％—80％满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0。
5ml固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜）。
C。
去固定液，用PBS或0.9％NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0。
5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟.也宜用摇床,或手动晃动数次。
E. 用PBS或0。
9%NaCl洗两遍，每次3分钟.F。
滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
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Hoechst染色方法
实验步骤
1．贴壁细胞
1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片至于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%——80%满。
2)刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
5) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
6) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡，使细胞接触封片液，切勿弄反。
7) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
2. 悬浮细胞
1) 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
2) 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
4) 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5) 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
6) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
7) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8) H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
3. 组织切片
1) 常规包埋切片后，脱蜡，透明。
2) PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
可在六孔板中操作。
3)加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动。
4) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
5) 将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
6) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。