吉姆萨染色方法及结果

原代贴壁细胞吉姆萨染色法

原代贴壁细胞吉姆萨染色法原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Soreen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液；贴壁细胞染色步骤：1. 去除培养器皿内的培养液，用平衡盐溶液反复漂洗单层培养物2次；2. 加入平衡盐溶液，再逐滴加入等体积甲醇，边加边混合，静置10mi n；3. 将50%甲醇-混合液丢弃，加入新鲜的甲醇液浸泡固定细胞10min，然后用甲醇漂洗细胞1次；4. 将瓶内细胞干燥后储存或直接染色；5. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层，染色2min；6. 移除染液，用自来水冲洗掉粉红色背景后，再用去离子水冲洗细胞；7. 用显微镜观察单层潮湿细胞。

若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察；结果：细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色；吉姆萨染色法注意事项：1. 染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。

染液保存时间不宜超过48 h；2. 吉姆萨对pH极敏感，因此，缓冲液pH要准确，否则染色效果不佳。

如用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮）易附着在玻片上形成污秽，且不易除掉。

因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。

染色完毕，应把标本浸入水中漂洗染液；提供：5. 原代细胞总蛋白质抽提物；6. 原代细胞总RNA；7. 原代细胞总DNA。

吉姆萨染色鉴定细胞凋亡实验方法

吉姆萨检测细胞凋亡实验方案1 材料及器具吉姆萨染料（粉剂）、甘油、甲醇、KH2 PO4、Na2 HPO4、蒸馏水、封闭型棕色瓶2 试剂配制吉姆萨母液：吉姆萨染料粉剂0.75g甘油50ml甲醇50ml将粉剂放于甘油内搅匀，放入60℃温箱24h，经常摇匀，取出待冷再加甲醇混匀，配成母液，封闭棕色瓶保存。

吉姆萨工作液：使用时以原液10ml加入pH为6.4-6.8的磷酸盐缓冲液100ml稀释成工作液。

磷酸盐缓冲液：A液Na2HPO4 0.946g，蒸馏水100mlB液KH2PO4 0.907g，蒸馏水100ml临用时取A液40ml，B液60ml混合，pH值约为6.64。

3 染色步骤（1）常规脱蜡至水；（2）蒸馏水洗；（3）在37℃温箱中吉姆萨染色30min；（4）蒸馏水洗2min；（5）PBS分色适度；（6）将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失为度；（7）入100%酒精中30s至1min；（8）二甲苯透明5min；（9）中性树胶封片。

4 预期结果背景淡蓝色，核为深蓝色，凋亡细胞为深蓝色。

5 体会在染色中第6步是关键，不经过此步骤直接入100%酒精脱水，脱色会很严重，无法控制，使染色失败；在第6步后入95%的酒精中脱水，脱色也非常快；若将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失后再入100%酒精脱水，效果良好。

因此，用吉姆萨染料染料检测细胞凋亡操作简便、色彩鲜艳、对比度好、细胞核和凋亡细胞着色清晰，能够长期保存、不褪色，为一种值得推广的方法。

参考文献：《吉姆萨染色法对大脑组织凋亡细胞的染色》-徐广有，2005年。

Giemsa染色法

Giemsa染色法1 染色原理编辑本段Giemsa染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

嗜酸性颗粒碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。

细胞各成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

2 介绍编辑本段MGG由May-Grunwald染料和Giemsa染料组成。

前者化学名为曙红亚甲基蓝Ⅱ，对胞质着色较好；后者对胞核着色较好。

因此MGG染色，可兼两者的优点，常用于细胞涂片染色。

2.1 1．染液配制I液的配制：迈格染料 lg甲醇 100ml在研钵内用少量纯甲醇将染料充分研磨成均匀一致的悬液，倒人烧瓶中，加入其余的甲醇后置入37℃温箱4-6小时，每隔半小时研磨半小时，然后放入深棕色瓶内，在室温下保存，2周后使用。

临用前取上液40ml，加纯甲醇20ml混合用作工作液。

Ⅱ液的配制：姬氏染粉 0.6g甘油 50ml甲醇100ml将姬氏染粉溶于甘油内，在研钵内研磨3-4小时，使之磨匀，加入纯甲醇后搅拌均匀,放入深棕色瓶内，室温下保存，2周后即可使用。

磷酸缓冲液配制：1％磷酸氢二钠20ml，l％磷酸二氢钠30ml，加蒸馏水至1000ml，调整pH 6.4-6.8(用蒸馏水代替缓冲液，效果亦佳)。

2.2 2．染色步骤(1)自然干燥的细胞涂片(预先滴加甲醇固定更好)水平置于染色架上。

吉姆萨染色方法及结果

1.材料
1g的姬姆色素染料加入66ml甘油，混匀，60度保温溶解两小时，再加入66ml甲醇混匀，即配成姬姆色素原液，此原液用前用PBS（6.8）稀释十倍左右就可以使用（此为姬姆萨工作液）。

工作液可保存一个月左右，Camon固定液（3体积乙醇+1体积冰乙酸）；
PBS缓冲液配制：在基因工程手册里，网上的不大准确！
2.方法
①涂片的制作与固定：用移液枪吸取10-20μL待检溶液滴在载玻片上,均匀涂布,室温下阴干后,用Camon固定液固定涂片10min。

②染色：置姬姆萨工作液30min。

③洗脱：染色完成后,涂片立即用ddH2O洗脱。

④显微镜观察：用甘油压片,指甲油封固。

在100×油镜下观察。

荧光,吉姆萨染色

荧光,吉姆萨染色
用品：培养肺癌细胞(95D) 荧光染料Hoechst33258 PBS (无Ca++ 、 Mg++)，PH 7.2 4%福尔马林、PBS配荧光显微镜
步骤 1.单层培养细胞，用PBS洗2次； 2. 4%福尔马林固定10分钟后；用PBS洗1次 3.以5~10ug/mI Hoechst33258染色5~10分钟水冲洗 4.荧光显微镜观察。
缓冲液的配置:Ⅰ 1/15mol KH2PO4 Ⅱ 1/15mol Na2HPO4 Ⅰ:Ⅱ=4:6 pH=6.9
染色液配置:1份原液+9份缓冲液
步骤：
1.单层培养细胞，PBS洗二次； 2.甲醇固定 10分钟; 3. 用滴管将配好的染色液布满整孔; 4.染10分钟，用自来水冲去染液； 5.显微镜计数，统计克隆形成率。
结果凋亡细胞核呈强亮的兰色荧光及明显核形态，
正常细胞仅呈弱荧光，死细胞不被Hoechst332 染色。
细胞胞核Hoechst33258荧光染色
正常细胞
凋亡细胞
克隆形成率计数
Giemas染色法
适用细胞染色和染色体染色
用品：
原液的配置:
Giemsa 甘油
甲醇
0.25g 2 5ml 25ml
Hale Waihona Puke 汇报结束谢谢大家! 请各位批评指正

吉姆萨配方

吉姆萨染色方法显示X染色质结构吉姆萨粉1 g ,甘油(AR) 66 mL ,甲醇(AR) 66 mL 。

先将吉姆萨粉溶于少量甘油中,用研钵研磨成匀浆,再将全部甘油倒入。

放入56 ℃温箱中2 h ,取出将甲醇加入混匀,即配成原液,于棕色瓶中密封保存备用。

临用时加入pH为6. 8 的磷酸缓冲液( V∶V = 9∶1) 配成吉姆萨染色剂。

（二）吉姆萨染色法此法可将细胞核与胞质同时染色，故便捷快速；但染液配制技术不易准确掌握，效果常不如HE染色稳定。

1.吉姆萨(Giemsa)染液的配制（1）取1.5g吉姆萨粉末放入50ml甘油，置于60℃温箱，约3h后溶解。

（2）取出后倒入50ml中性甲醇，即为母液。

于棕色瓶可长久保存。

需要注意的是，有的甲醇内含醋酸，会使染液中的伊红沉淀出来，不利染色。

（3）将母液与0.1 mol／LPBS(Ph6.9～7.2)按1:9混合即成工作液。

吉姆萨染液对pH极敏感，偏酸时染色过红，偏碱时则过蓝。

所以，工作液宜现用现配，保存时间不超过48h以免被CO2酸化。

瑞氏－姬姆萨染色方法1、试剂配制：原料:A:瑞氏染粉0.8--1克；吉姆萨染粉0.5克B:甘油33mlC：甲醇500ml配法：将A放入研钵中，加入少量B研磨，再加入少量B磨，再加入少量B磨……倒出，将未溶部分，继续加入B磨……>全溶，加入C，或中间加入C 亦可。

2、染色步骤：滴数滴入玻片盖满标本，30秒，再加入双蒸水或PBS2-3倍染1-3分中，倾去染液，水洗……封片。

吉姆萨染色液贮备液配制：吉姆萨粉1g，加甘油60ml，加热并搅拌，待溶解冷却至室温，再加甲醇33ml吉姆萨(Giemsa)氏母液将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66mL)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。

然后再加入甲醇(66mL)，搅匀后保存于棕色瓶中。

母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。

he染色吉姆萨染色试剂方法[精华]

两种染色试剂和方法如下。

000000一、HE染色000000试剂：000000苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。

A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。

B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。

把A 液和 B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。

最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。

染液配制当日即可应用于染色。

酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。

000000伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。

工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

000000（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

000000( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。

000000( 4 ) 苏木精染液 3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。

000000( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。

000000( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红。

000000(7) 自来水再次冲洗，返蓝。

000000( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。

000000二、吉姆萨染色000000试剂：000000吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。

0000 00PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。

000000（2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。

000000（3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。

吉姆萨染色实验步骤及注意事项

吉姆萨染色实验步骤及注意事项实验步骤1.将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。

（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。

（2）3个盘：水。

（3）脱水系列溶液：①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。

②2个盘：盛有100%乙醇。

③3个盘：盛有二甲苯。

2.在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s（依染色时间决定染色的强弱），将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

3.连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。

4.在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。

加4滴Permount 的于另一端（切片所处位置），左手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上（在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成人为假象）。

5.用3MM 滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余固片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。

6.将玻片平放于一硬纸盒盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。

7.以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳，染料及固片介质。

用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。

放入玻片盒，必要时，载玻片上再注明标签。

8.显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱，调节光亮。

注意事项▲1.勿将玻片直立存放于玻片中，因此时固片介质尚未凝结。

▲2.细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。

▲3.配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。