13.富氢液对大鼠脑缺血辕再灌注损伤后海马线粒体通透性转换孔及细胞凋亡的影响

收稿日期： 圆园员圆 原 园圆 原 圆园 ， 修回日期： 圆园员圆 原 园猿 原 圆远 员远猿援 糟燥皂； 作者简介： 崔耀梅 （ 员怨愿缘 原 ） ， 女， 硕士， 住院医师， 耘鄄皂葬蚤造： 糟怎蚤赠葬燥皂藻蚤岳 段满林 （ 员怨远源 原 ） ， 男， 博士， 主任医师， 教授， 硕士生导师， 岳 员远猿援 糟燥皂；
万方数据 与临床
· 愿缘源·
中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员圆 允怎灶； 圆愿 （远）
远园 泽 内大鼠意识、 角膜反射、 瞳孔对光反射和翻正反 射均消失， 眼球苍白等为缺血成功的标准， 缺血 员缘 氢液 缘 皂造·噪早
原员
下拉紧两侧丝线， 阻断双侧颈总动脉血流， 以 猿园 耀
中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员圆 允怎灶； 圆愿 （远） ： 愿缘猿 耀 愿
· 愿缘猿·
网络出版时间： 圆园员圆 原 缘 原 员员 员源： 园源摇 网络出版地址： 澡贼贼责： 辕 辕 憎憎憎援 糟灶噪蚤援 灶藻贼 辕 噪糟皂泽 辕 凿藻贼葬蚤造 辕 猿源援 员园愿远援 砸援 圆园员圆园缘员员援 员源园源援 圆园员圆园远援 愿缘猿赃园圆苑援 澡贼皂造
苍术苷 员缘 μ造，
员 援 源摇 大鼠海马细胞线粒体的提取 摇 再灌注 圆源 澡 每 组取 愿 只大鼠， 依据线粒体提取试剂盒说明提取海 后断头， 迅速分离出海马， 用剪刀将海马剪成 圆 皂皂猿 马线粒体： 大鼠 员园豫 水合氯醛 （ 源园园 皂早 · 噪早
原员
中取 员 皂皂 的 冠 状 脑 片， 取 海 马 悦粤员 区 组 织 制 成 锇酸固定 员 澡， 梯度丙酮脱水， 耘责燥灶鄄愿员圆 树脂包埋， 半薄切片定位， 苑园 灶皂 超薄切片， 醋酸铀 原 枸橼酸铅 双重染色， 允耘酝鄄员圆园园 透射电镜 （ 匀蚤贼葬糟澡蚤 公司， 日本）
进行阻闭。匀 组和 匀粤 组于再灌注即刻腹腔注射富
原员
皂蚤灶 后恢复灌注。杂 组仅分离椎动脉和颈总动脉， 不 ， 其余组腹腔注射等容量生理盐水。
（ 源园园 皂早·噪早
员 援 猿摇 大鼠侧脑室给药方法 摇 大鼠用 员园豫 水合氯醛
原员
Hale Waihona Puke 苷 圆 皂皂燥造 ·蕴 ， 员缘 μ造， 晕杂 组和 匀 组侧脑室注射等 容量生理盐水。 ） 麻醉后固定于立体定向仪（ 晕葬则蚤泽澡鄄
富氢液对大鼠脑缺血 辕 再灌注损伤后 海马线粒体通透性转换孔及细胞凋亡的影响
崔耀梅， 程慧娴， 曾宪明， 曾秋婷， 高摇 玮， 段满林， 徐建国
（ 南京军区南京总医院麻醉科， 江苏 南京 摇 圆员园园园圆 ）
凿燥蚤： 员园援 猿怨远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园员 原 员怨苑愿援 圆园员圆援 园远援 园圆苑
心过程均在 园 耀 源益 下完成， 线粒体含量以所含蛋白 肿胀液 （ 皂皂燥造·蕴 ： 运悦造 员圆园 ， 栽则蚤泽鄄匀悦造 员园 ， 酝韵孕杂 圆园 ，
原员 原员
圆援 员摇 大鼠海马细胞 皂孕栽孕 开放情况 摇 与 杂 组比 较， 其余各组再灌注 圆源 澡 时 皂孕栽孕 吸光度的改变值 升高， 提示 皂孕栽孕 开放程度增加 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 与 陨砸 的改 变 值 降 低， 提 示 皂孕栽孕 开 放 程 度 减 少 （孕 约 组比较， 匀 组和 匀粤 组再灌注 圆源 澡 时 皂孕栽孕 吸光度 园郾 园缘 ） ； 与 匀 组比较， 匀粤 组 皂孕栽孕 吸光度的改变值 圆援 圆摇 大鼠海马细胞线粒体和细胞溶质中 悦赠贼 悦 蛋 白表达情况摇 与 杂 组比较， 其余各组再灌注 圆源 澡 时 线粒体 悦赠贼 悦 表达降低 ， 细胞溶质 悦赠贼 悦 表达升高 线粒体 悦赠贼 悦 表达升高， 细胞溶质 悦赠贼 悦 表达降低 降低， 细胞溶质 悦赠贼 悦 表达升高 （ 孕 约 园郾 园缘 ） 。见 云蚤早 员。 升高， 提示 皂孕栽孕 开放程度增加 （ 孕 约 园郾 园缘 ） 。见 云蚤早
藻则灶 遭造燥贼 法测海马线粒体和胞质细胞色素 悦 （ 悦赠贼 悦 ） 水平， 免 和 月葬曾 表达的比值 （ 月糟造鄄圆 辕 月葬曾 ） ， 透射电镜观察海马 悦粤员 区 度的改变值升高， 月糟造鄄圆 和 月葬曾 表达上调， 线粒体 悦赠贼 悦 表达 线粒体超微结构。结果摇 与 杂 组比较， 其余 缘 组 皂孕栽孕 吸光 疫组化法观察 月糟造鄄圆 、 月葬曾 在海马 悦粤员 区表达， 并计算 月糟造鄄圆
原员
伊 早 离心 员园 皂蚤灶， 取上清液以远 园园园 伊 早 离心 员园 皂蚤灶，
员 援 苑摇 统计学处理 摇 采用 杂孕杂杂 员猿郾 园 统计学软件进 珋 行分析， 计量资料以 曾 依 泽 表示。多组样本均数比较 圆摇 结果 较采用最小显著差法 （ 蕴杂阅） 。
观察海马线粒体超微结构。
行单因素方差分析 （ 燥灶藻鄄憎葬赠 粤晕韵灾粤 ） ， 组间两两比
［ 源 原 缘］ 伤 ， 然而其机制是否与抑制 皂孕栽孕 开放有关尚
下调， 胞质 悦赠贼 悦 表达上调 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 与 陨砸 组比较， 匀组
皂孕栽孕 吸光度的改变值降低， 月糟造鄄圆 表达上调， 月葬曾 表达下调， 线粒体 悦赠贼 悦 表达上调， 胞质 悦赠贼 悦 表达下调 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 与 匀 组比较， 匀粤 组 皂孕栽孕 吸光度的改变值升高， 月糟造鄄圆 表达下 调 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 陨砸 组与 晕杂 组间上述指标比较差异无统计学 意义 （ 孕 跃 园郾 园缘 ） 。透射电镜结果显示富氢液可以改善全脑 缺血后线粒体超微结构的改变， 苍术苷可部分取消富氢液的 调， 月葬曾 表达上调， 线粒体 悦赠贼 悦 表达下调， 胞质 悦赠贼 悦 表达下
马线粒体通透性转换孔 （ 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 责藻则皂藻葬遭蚤造蚤贼赠 贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶 责燥则藻 ， 皂孕栽孕 ） 及细胞凋亡的影响。 方法 摇 怨远 只成年健康 ♂
杂阅 大鼠， 体质量 圆缘园 耀 猿园园 早， 随机分为 远 组 （ 灶 越 员远 ） ： 假手术 （ 匀） 、 苍术苷组 （ 粤） 、 富氢液 垣 苍术苷组 （ 匀粤） 。采用四血管 组 （ 杂） 、 缺血 辕 再灌注组 （ 陨砸 ） 、 生理盐水组 （ 晕杂 ） 、 富氢液组
灌注， 杂 组仅分离椎动脉和颈总动脉， 不进行阻闭。 匀 组和 腔注射等容量生理盐水。 粤 组和 匀粤 组于再灌注前 员园 皂蚤灶
［ 员］ 。研究表明， 抑制 皂孕栽孕 开放在大鼠 体膜完整性 ［ 圆 原 猿］ 的作用 。富氢液是氢气饱和生理盐水， 腹腔注
射富 氢 液 可 有 效 减 轻 大 鼠 全 脑 缺 血 辕 再 灌 注 损 不清楚。本研究拟评价海马神经细胞 皂孕栽孕 在富氢 液减轻大鼠全脑缺血 辕 再灌注损伤中的作用， 并观察 其对凋亡相关蛋白的影响。 员摇 材料与方法
员 援 圆摇 动物模型的建立及分组摇 成年健康 ♂ 杂阅 大鼠 怨远 只， 体质量 圆缘园 耀 猿园园 早， 由南京军区南京总医院 动物实验中心提供。随机分为 远 组 （ 灶 越 员远 ） ： 假手 、 脑缺 血辕 再 灌 注 组 （ 陨砸 ） 、 生理盐水组 术组 （ 杂）
（ 晕杂） 、 富氢液组 （ 匀） 、 苍术苷组 （ 粤） 和富氢液 垣 苍 。采用改良四血管阻断法建立大鼠脑 术苷组 （ 匀粤） 缺血 辕 再灌注模型。腹腔注射 员园豫 水合氯醛 源园园 皂早 ·噪早 原 员 麻醉， 俯卧位固定， 颈后正中切开暴露第一颈
员 援 员摇 材料摇 皂孕栽孕 开放剂苍术苷， 猿鄄 （ 晕鄄吗啡啉） 丙 ； 悦赠贼 悦 蛋白免疫印迹杂交法内参 盒 （ 匝蚤葬早藻灶 公司）
磺酸（ 酝韵孕杂） 均购自 杂蚤早皂葬 公司； 线粒体提取试剂 二抗 陨早郧鄄匀砸孕 （ 允葬糟噪泽燥灶 陨皂皂怎灶燥砸藻泽藻葬则糟澡 公司） ； 鼠抗 月糟造鄄圆 和 月葬曾 多克隆 陨早郧 抗体、 羊抗鼠 杂孕 法二抗试
文献标志码： 粤 文章编号： 员园园员 原 员怨苑愿 （ 圆园员圆 ） 园远 原 园愿缘猿 原 园远 中国图书分类号： 砸鄄猿猿圆 ； 砸猿圆圆援 愿员 ； 砸猿圆怨援 圆缘 ； 砸苑源猿援 猿员园援 圆圆 摘要： 目的摇 观察富氢液对大鼠全脑缺血 辕 再灌注损伤后海
后细胞凋亡， 其机制与抑制海马细胞 皂孕栽孕 的开放有关。 关键词： 氢； 再灌注损伤； 脑； 线粒体通透性转换孔； 细胞色素 悦； 月糟造鄄圆 ； 月葬曾
研究方向： 重要脏器功能保护， 通讯作者， 耘鄄皂葬蚤造： 凿怎葬灶怨园园员
究方向： 多脏器功能衰竭、 心肺脑复苏、 急慢性疼痛的基础
徐建国 （ 员怨源源 原 ） ， 男， 教授， 博士生导师， 博士后导师， 研
椎翼孔， 热凝双侧椎动脉， 使其永久性闭塞。然后取 仰卧位， 分离双侧颈总动脉并置线， 系活结， 缝合伤
贼赠 贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶 责燥则藻 ， 皂孕栽孕） 是线粒体内、 外膜之间的非 贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶， 酝孕栽） ， 导致能量合成障碍， 从而破坏线粒 全脑缺血模型中具有减少梗死面积和改善神经症状 起线 粒 体 通 透 性 转 换 （ 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 责藻则皂藻葬遭蚤造蚤贼赠
摇 摇 线粒体通透性转换孔 （ 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 责藻则皂藻葬遭蚤造蚤鄄
特异性通道， 脑缺血 辕 再灌注可导致 皂孕栽孕 开放， 引
阻塞法建立大鼠全脑缺血 辕 再灌注模型， 缺血 员缘 皂蚤灶 后恢复
匀粤 组于再灌注即刻腹腔注射富氢液 缘 皂造 · 噪早 原 员 ， 其余组腹 侧脑室注射苍术苷 员缘 μ造 ， 晕杂 组和 匀 组侧脑室注射等容量 生理盐水。再灌注后 圆源 澡 取海马组织， 分离海马细胞线粒 体， 通过紫外分光光度仪检测海马 皂孕栽孕 的开放情况， 宰藻泽贼鄄
粤 组和 匀粤 组于再灌注前 员园 皂蚤灶 行侧脑室注射苍术
次灌注生理盐水 员园园 皂造 和 源豫 多聚甲醛 圆园园 皂造， 取 采用 杂孕 法进行检测， 阅粤月 显色。显微镜下胞质呈 棕黄色为阳性细胞。随机取 猿 张切片， 顺序观察海 月葬曾 表达水平， 并计算 月糟造 鄄圆 和 月葬曾 的比值 （ 月糟造 鄄圆 辕 月葬曾） 。