乙肝病毒DNA的实验室检测
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准
乙肝的实验室诊断标准主要包括以下几个方面：
1. 乙肝病毒标志物的检测：如乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）等。
这些指标的阳性或阴性可以用来判断是否感染了乙肝病毒。
2. 肝功能检查：包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆红素等指标。
这些指标的异常可以反映肝脏的功能状况，有助于判断病情和治疗效果。
3. 乙肝病毒DNA检测：通过检测乙肝病毒DNA的含量，可以了解病毒复制的程度，有助于判断病情和制定治疗方案。
4. 肝脏病理学检查：对于一些病情较重或需要进一步了解肝脏病变情况的患者，可以进行肝脏病理学检查，通过观察肝脏的组织结构、炎症程度、纤维化程度等指标，对病情进行评估和诊断。
需要注意的是，不同的实验室诊断标准在不同的临床情况下可能有不同的意义和用途，医生会根据具体情况选择合适的检测方法，并结合临床表现和其他检查结果进行综合分析和诊断。
乙肝dna即刻法质控规则
乙肝dna即刻法质控规则
乙肝DNA即刻法是用于检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的一种快速检测方法，而质控规则是保证检测结果准确可靠的重要环节。
乙肝DNA即刻法的质控规则通常包括以下几个方面：
1. 内部质控，实验室需要建立内部质控体系，包括稳定的实验操作流程、标准操作程序和质控样本。
内部质控样本应与临床样本一起进行检测，以确保实验操作的稳定性和准确性。
2. 外部质控，实验室需要参与外部质控项目，定期将实验室的检测结果提交给权威的外部质控组织进行评估。
通过与其他实验室的比对，可以评估实验室的准确性和可靠性。
3. 质控记录和分析，实验室需要建立完善的质控记录系统，记录每次实验的操作步骤、检测结果和质控样本的情况。
对质控数据进行定期分析，及时发现和纠正实验中出现的偏差和问题。
4. 质控标准和参考值，实验室需要按照相关的质控标准和参考值进行操作，包括使用符合要求的试剂盒和仪器设备，按照标准操作程序进行检测，以确保结果的准确性和可比性。
5. 质控措施，当实验中出现偏差或问题时，实验室需要及时采取相应的质控措施，包括重复检测、检查仪器设备状态、调整操作流程等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
总的来说，乙肝DNA即刻法的质控规则是确保实验室检测结果准确可靠的重要保障，实验室需要严格遵守相关规定和标准，建立完善的质控体系，不断优化实验操作流程，提高检测结果的准确性和可靠性。
乙肝dna定量标准
乙肝dna定量标准
乙肝DNA定量是用于测量乙型肝炎病毒（HBV）DNA在患者血液中的数量的一种检测方法。
定量检测有助于评估病毒活动性、指导治疗和监测疾病进展。
乙肝DNA定量的结果通常以国际单位（IU/mL）或拷贝数
（copies/mL）表示。
标准化乙肝DNA定量的一种常见方法是使用国际标准物质，即WHO国际标准物质。
该标准物质通常包括已知数量的乙肝病毒DNA，并已被广泛认可和使用。
在进行乙肝DNA定量时，实验室通常使用这些标准物质进行标定，以确保测试结果的准确性和可比性。
实验室通常会报告标本中乙肝DNA的数量，并与国际标准物质进行比较，以确定病毒载量。
这有助于医生了解患者的感染程度，并为治疗决策提供重要信息。
标准化和规范化乙肝DNA定量方法对于确保测试结果的可比性和一致性非常重要。
因此，在实验室进行检测时，通常会遵循相关的质量控制和质量保证标准。
乙肝病毒DNA检测Microsoft Word 文档
乙肝病毒DNA检测乙肝病毒DNA指的是脱氧核糖核酸，病毒的复制是靠DNA的复制来完成的，DNA的浓度越高，病毒的复制越活跃。
合起来，HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脱氧核糖核酸。
乙肝病毒DNA检测是判断乙肝病毒复制的常用手段。
一般的，把数值大于10的3次方为阳性，把3-5次方认为是低量复制，5-7为中等量，大于7次方为大量。
乙肝两对半并不能准确的判断病毒复制情况，DNA弥补了这个的不足。
不过由于DNA检测技术要求严格，容易受到干扰，因此，一次结果不足以说明问题，遇到阳性，可以换医院再次检查。
目录1DNA检测2作用3临床意义4复制过程▪第一步：黏附▪第二步:脱壳▪第三步：入核▪第四步：转录▪第五步：翻译▪第六步：逆转录▪第七步：组装5频率6注意事项7检测方法8检测报告9检测费用10检测要空腹吗11乙肝病毒DNA检测的作用1DNA检测以往乙肝患者抗病毒治疗的指征是：乙肝病毒e抗原阳性（大三阳）患者HBVDNA数值要求达到10的5次方拷贝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原阴性（小三阳）患者乙肝病毒DNA数值要求达到10的4次方拷贝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷贝/毫升以下也不能认为就没有问题了，最新的国际研究资料表明：和肝脏疾病进展相关的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持续低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在进一步发展，因此HBVDNA数值应该越低越好，目前国际建议的HBVDNA检测正常值应该是：< 50U/ml 。
2作用目前，乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中使用的越来越普遍，可见乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中占的分量越来越重，这是因为乙肝病毒DNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效果具有十分重要的作用。
主要表现在以下七个方面：1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、乙肝病毒是否复制。
3、乙肝是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。
5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。
5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
乙肝有哪些实验室检测
乙肝是临床上最为常见的一种传染性慢性疾病，其发病率非常高。
乙肝患者可能因为各类途径而感染乙肝病毒，乙肝病毒会破坏乙肝患者的肝脏及免疫功能，如果长期患病，就会诱发肝硬化，最终转化为肝癌。
就目前而言，临床上找不到治疗乙肝的方法，只能采取科学有效的措施预防乙肝，进而大大降低发病的概率。
乙肝病毒感染被誉为世界范围内最为严重的公共卫生问题。
据统计，世界上的百分之五的人口已出现慢性感染症状，百分之十五至百分之三十五的人口将由最初的慢性乙型肝炎演变为肝硬化或肝癌。
由此可见，想要降低乙肝病毒感染率，就需从根源入手，及时检测并进行针对性治疗。
鉴于部分研究人员在此方面已进行深入探究，且取得了一定进展，所以医者需基于乙肝病毒感染检测技术研究进展进行乙肝病毒感染检测工作。
如此，才可及时检测乙肝病毒感染，才能及时进行防治。
什么是乙肝？乙型肝炎病毒被称为乙肝病毒，它属于一种 DNA病毒。
猩猩和人类很容易感染这种病毒。
乙肝患者是感染乙型肝炎病毒而发病，这种疾病的病程较长，乙肝患者的肝脏会出现慢性炎性病变，进而导致患者患上肝癌、肝硬化以及出现多脏器损伤的情况。
目前来说，乙肝病毒携带者的数量仍然在逐年增长，大部分的患者患病都是由于对乙肝相关的知识不了解以及不重视预防乙肝，进而导致疾病的发生。
因此，乙肝相关预防知识的普及教育非常重要。
乙肝实验室检测有哪些？1.快速检测乙肝病毒感染快速检测技术为胶体金免疫层分析技术，其具备试剂稳定、检测时间短、标本用量少等优势。
因乙肝病毒感染突如其来，倘若无法进行快速检测，将会造成错珍，使患者错过最佳治疗时期，而快速检测技术可于简陋环境下快速生成报告结果，可为医者接下来的治疗奠定基础，所以在工作中起到了一定的作用。
2.电子显微镜技术2.1常规电镜法英国学者曾于1970年在电镜下发现了完整的乙肝病毒颗粒，通过不断探究后，发现这一方法于检测乙肝病毒感染方面有一定的优势。
如:观察较为直观、形象，制样速度较快，标本用量少。
乙型病毒性肝炎的实验室检查详解演示文稿
HBV C基因
前C区
C区 表达
HBeAg
前C / C 蛋白
切割、加工 HBcAg
分泌到细胞外
HBeAg只存在于血清中
5
第五页，共32页。
HBV 的三种形态
1,Hepatitis B virion(Dane particle)
2,secreted filament 3,secreted sphere
疗有效；
每日0.5mg恩替卡韦治疗1年时, HBeAg 阳性和阴性慢性乙型肝炎患者 HBV DNA 检测不到率分别为67% 和90%, 恩替卡韦的HBeAg转换率为 21% , 与其他口服抗病毒药相似。
并不以HBeAg转阴或HBsAg转阴为治疗终点或目标。 24
第二十四页，共32页。
HBV DNA 定量检测试剂盒的性能对比
胆碱酯酶, 甲胎蛋白, 凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子；
9
第九页，共32页。
2. HBV 血清标志物检测
方法学的发展
ELISA：灵敏性高，成本低，适用于普通病人筛查； 胶体金免疫层析法(金标法)：简便易行，可用于急诊病人快速检测； 化学发光法定量检测：价格昂贵，可用于HBVMs为临界值的病人的
学 改 善
清 除
对 干耐 扰药 素变 应异 答
27
常用HBV基因分型方法比较
分型方法 序列测定法
聚合酶链反应-限制性片 段长度多态性分析法 (PCR-RFLP) pre-S2单克隆抗体酶联 免疫测定 (mAbs EIA法)
分子探针杂交法
型特异性引物PCR法
优缺点
最直接，最可信，是HBV基因分型的金标准，但繁琐 费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本 检测。
乙肝实验室诊断标准
乙肝实验室诊断标准
乙肝实验室诊断标准主要包括以下几个方面的内容：
1.肝功能检查：包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆碱酯酶（ChE）、胆红素等指标。
正常值为0-40U/L。
对于肝功能出现异常的患者，要警惕肝炎的存在，其中转氨酶也是检测肝功能损害的指标之一。
2.乙肝病毒DNA定量检测：正常值为0-
100copies/ml，如果小于100copies/ml，则为阴性，乙肝病毒DNA定量阴性一般代表没有感染乙肝病毒。
3.乙肝两对半检查：即乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）的检测。
通过这项检查可以判断机体是否感染了乙肝病毒以及病毒的具体类型。
4.HBV-DNA测序：通过检测HBV-DNA的序列，可以了解病毒的变异情况，如检测出病毒的耐药位点等。
5.乙肝病毒前S1抗原（PreS1）检测：PreS1是乙肝病毒外膜蛋白上的抗原前体，具有很强的免疫原性，能刺激机体产生较强的保护性抗体。
PreS1抗原检测可弥补HBsAg检测的不足，有助于对乙型肝炎的诊断、病程观察、预后判断及疫苗效果的评价。
6.其他相关检测：如血常规、尿常规、凝血功能、甲胎蛋白等检查，以评估患者的整体健康状况。
在进行乙肝实验室诊断时，医生会根据患者的具体情况选择相应的检测方法。
同时，患者也需要注意提供准确的个人信息和病史，以便医生做出准确的诊断和治疗方案。
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提供直接证据缩短“窗口期”
PCR检测
HBV HCV HIV
“窗口期”
56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数
6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否
袁立云
LOREM IPSUM DOLOR
1、荧光定量PCR技术 2、乙肝病毒的感染 3、HBV-DNA与临床
荧光定量PCR技术
荧光定量PCR技术
• Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是 一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物 的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经
模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的
核酸测定中最灵敏的方法。
PCR 反应过程
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs
Taq 酶
反应组分
变
性பைடு நூலகம்
3’
5’
5’
3’
退
火
3’
Taq Taq
3’
5’
延 重
伸 复
3’
3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
循环2 4个拷贝
3’
3’
3’ 3’ 3’ 3’
对于HBV
DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗
处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV
DNA来决定。
HBV DNA检测的临床意义
HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。
●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结
合。 ●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。
Taq
l
R
Q
变
性
Q
5’
R
3’
退 火
R Q
5’
Taq
3’
1. 链取代 2. 水
R Q
5’
Taq
R
5’ 3’
解
Taq
5’
5’ 3’
3. 聚
合
l Taq
5’
R
5’ 3’
4. 检测荧光
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一） 乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
一般不存在于血循环中
HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM
提示HBV处于复制状态
HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） HBV-DNA与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据
HBV DNA是HBV复制的标志
HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’
循环3
8个拷贝
3’ 3’
3’
3’
3’
荧光定量PCR原理
插入染料法 SYBR Green I
杂交探针法(最常用) TaqMan
TaqMan探针
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs Taq酶
R
反应体系
Q
Probe
HBeAg阳性慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
正常 无炎症或仅有轻 度炎症 非活动性HBsAg 携带者
增高或者波动 中度或严重炎 症、肝纤维化
HBeAg阴性 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
乙肝病毒的感染
慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
HBV-DNA与临床
HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性
乙肝病毒的感染 免疫耐受期 免疫清除期 非活动或低（ 非）复制期 再活动期
HBV DNA
ALT 肝组织学 临床诊断
HBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
正常 无明显异常, 或 轻度炎症纤维化 慢性HBV携带者 增高或者波动 中度或严重炎症、纤 维化快速进展
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学 指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。
5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90％左右
乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的
药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。
目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类： 干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、 α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括
、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等
过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内
反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。 • 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入 ，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始