马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测马铃薯病毒病是一种严重危害马铃薯产量和质量的病害。
为了保障马铃薯生产的可持续发展，需要进行有效的病毒病的检测。
马铃薯病毒病的检测主要包括生物学检测和分子生物学检测两种方法。
生物学检测主要依靠病毒在试验植物上的病征来判断是否感染了病毒。
常用的生物学检测方法有原植物传毒法、传粉虫传毒法和酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
原植物传毒法是将待检马铃薯叶片、茎或块茎与已知携带病毒的植物接种在一起，通过观察接种植物是否出现病征来判断原植物是否感染了病毒。
传粉虫传毒法是利用感染病毒的传粉虫，将其接触待检植株，观察是否能够传播病毒。
ELISA方法则是利用特异性抗体对病毒或病毒抗原进行检测，是一种高效、快速且敏感的检测方法。
分子生物学检测是通过特异性的分子生物学技术对待检样品中的病毒核酸进行检测和分析。
常用的分子生物学检测方法有聚合酶链式反应（PCR）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和实时荧光定量PCR等。
PCR方法是利用病毒特异性引物将待检样品中的病毒核酸扩增，通过分析扩增产物的大小和序列来判断样品是否感染了病毒。
RT-PCR方法则是在PCR的基础上加入逆转录酶，将病毒核酸逆转录为cDNA后再进行扩增，适用于RNA病毒的检测。
实时荧光定量PCR方法是利用特定荧光探针实时监测扩增反应过程中的荧光信号强度，可以定量检测病毒核酸的含量。
无论是生物学检测还是分子生物学检测，都需要进行样品的采集和处理。
样品的采集应选择有明显病征的植株，尽量避免外界污染。
对于茎、叶片等组织，应进行研磨或挤压，以释放病毒核酸；对于块茎等样品，宜在提取液中进行切割和搅拌，以增加病毒核酸的释放。
提取的核酸应进行纯化和测定，以保证检测结果的准确性。
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测马铃薯病毒病是一种严重危害马铃薯生产的病害，由于其易传播、难治愈的特点，极大地威胁了马铃薯产业的发展。
因此，对马铃薯病毒病及时、精准、快速的检测，对预防和控制该病害具有重要意义。
马铃薯病毒病的症状与检测方法：马铃薯病毒病是由多种病毒引起的病害。
常见的病毒有马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯病毒S、马铃薯镰刀病毒等。
根据不同的病毒，马铃薯病毒病的症状也会有所不同。
在马铃薯生长期间，易出现黄化、疮斑、变形、裂缝、枯死等症状，严重影响着马铃薯的产量和质量。
因此，对病株进行检测，及早发现病毒，有利于采取相应的防治措施，保障马铃薯产业的健康发展。
传统的马铃薯病毒病检测方法采用ELISA、PCR等分子生物学方法。
其中，ELISA检测方法依靠抗体和抗原的结合反应，通过检测样品中的病毒抗原，来判断样品是否感染马铃薯病毒。
而PCR检测方法，则是通过扩增样品中的特定DNA序列，利用特异性杂交探针等手段来诊断样品是否感染马铃薯病毒。
优势与不足ELISA检测方法准确性高、速度快、操作简单等优点广受研究人员的青睐。
但ELISA检测法也存在缺点：1）过程繁琐，操作技能要求高；2）ELISA试剂的价格相对较高，总成本较PCR较高；3）ELISA技术难以对感染病毒抗原含量极低的样品进行检测，且检测结果受到环境干扰较大。
PCR检测方法则具有灵敏度高、特异性好、快速且可靠、可以批量同时检测样品等优点。
同时，PCR技术已经逐渐发展成一种可视化的方法，如荧光PCR、喷墨PCR、金纳米探针PCR等，进一步提高了PCR检测的准确性和便利性。
但PCR检测方法也存在一些问题，比如通过PCR检测无法判断样品中所含病毒是否具有致病性，而且PCR扩增反应容易受到样品质量和环境因素的干扰，会导致假阳性或假阴性结果的产生。
综上所述，不同的检测方法各有优缺点，应根据实际情况，选用适合的方法开展病毒检测。
未来发展趋势传统的检测方法虽然已经取得了一定的进展，但还存在一些问题，比如针对新发现的病毒进行检测的问题。
马铃薯检测
马铃薯检测【导语】马铃薯检测是什么？马铃薯检测对于我们有什么作用？目前人们越来越关注马铃薯检测方面的知识和信息，因为马铃薯检测关系到我们生活的方方面面，那么今天小编就针对马铃薯检测这个话题，给大家针对性的介绍一些马铃薯检测相关的知识：马铃薯在我国广泛种植，已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。
然而在当前的马铃薯生产中，病毒病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题。
对于马铃薯产业的参与者而言，细菌、真菌及病毒的检测和识别十分重要。
本文从病毒种类及相应检测方法进行简要介绍。
1 马铃薯主要病毒种类及致病症状222.png2 马铃薯病毒主要检测方法2.1 酶联免疫吸附检测法酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbentassay, ELISA）是把抗原-抗体的免疫反应与酶的催化反应相互结合而发展起来的一种综合性技术。
该技术是在不影响酶活性和免疫球蛋白分子的反应条件下, 使酶分子和免疫球蛋白分子共价结合成酶标记抗体。
酶标记抗体可直接或通过免疫桥与包袱在固相支持物上待测定的抗原或抗体特异性结合,来检测病毒的存在。
ELISA具有特异强、灵敏度高、操作简便、易于观察等优点, 非常适合于大规模检测, 适于脱毒苗的检测。
方法经济简便，快速直观，但其也存在一定的缺点:（1）抗体的制备所需时间长，费时费力；（2）一次只能检测一种病毒，检测多种病毒时灵敏度降低；（3）对于蚜虫传播的病；有一些在植物上第一年不表现症状,病毒繁殖量少,无法用ELISA方法检测；（4）检测病毒时还经常存在假阳性反应，给脱毒种薯(苗)的检测带来困难。
2.2 PCR检测法近来，由于PCR检测的特异性和灵敏性，被广泛运用于许多细菌、真菌、病毒和类病毒的检测。
但是，运用普通的PCR分析仪检测多种病原菌时，不仅十分耗时，而且对实验室条件要求严格且需要很长的反应设置时间，易造成人为误差。
马铃薯主要病毒
• 三、影响马铃薯侵染和症状发生的因素
• （一）寄主基因型（Host genetype）
• 马铃薯普通栽培种亚种（tuberosum）和马铃薯安第斯亚 种（andigena）上的马铃薯卷叶病毒（PRLV）的表现。
• 在某一特殊的病毒侵染的栽培品种没表现出症状，可能是 受寄主基因型控制。受侵染而无症状的植株，对其产量无 显著的影响，这种情况称为耐病性（toletance），受侵染 的植株称之为无症状带毒者（asymptomatic carrier）。
• 常见的马铃薯病毒病症状类型（俗称马铃薯退化类型）有 花叶、卷叶、束顶、矮生四个。花叶类型中有各式各样花 叶症状，其致病毒原复杂。而另三个类型（卷叶、束顶、 矮生）的病原虽较单纯，但常与花叶型的病毒复合侵染， 呈综合症状。其中矮生型病株，除某种病原的特定症状外， 有时一些抗病性弱的马铃薯品种，如果被多种病原侵染， 发病严重，导致植株生育停滞，从而造成植株矮缩现象。
• 其他原因也能引起类似病毒病症状，如遗传异常、非虫害 和病原引起的生理异常以及由其他虫害或致病因子引起的 异常。
• 大多数情况下，病毒通过受感染植物所表现的症状而表达。
• 马铃薯受病毒侵染后会产生各种不同的症状，这些症状的 发生取决于受病毒及其株系侵染的植物基因型，病毒与寄 主发生反应时所处的环境条件。环境因素很多，包括自然 条件，有机体之间的相互作用及生物因素。
• （六）形状、质地等的畸形
• （Deviations of shape，texture，etc）
• 1．纺锤形块茎（Spindle tuber） • 2．过长（Elongation） • 3．气生薯（Aerial tubers） • 4．过度生长（Overgrowths） • 5．开裂（Cracking） • 6．软化（Flaccidity） • 7．对数量和大小的影响（Effect on number and size）
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测
内蒙古自治区马铃薯病毒病的检测马铃薯病毒病是一种常见的病害，会对马铃薯的生长和发展造成极大的影响，严重的情况下会导致产量大幅度下降，进而影响农民的经济收入。
因此，及时、准确地检测马铃薯病毒病是农业生产的重要环节之一。
现如今，随着技术的不断进步，人们已经能够利用一些先进的检测方法来检测马铃薯病毒病。
下面将详细介绍目前较为常用的两种检测方法。
（一）酶联免疫吸附试验方法（ELISA）酶联免疫吸附试验方法是一种比较常见的检测方法，它的原理是将待测物与特异性抗体结合，并且通过酶标记物来检测结合的情况。
这种方法的优点在于简单、快速、灵敏，可以对大量的样品进行检测。
同时，相对来说价格也比较便宜。
具体来说，酶联免疫吸附试验方法需要先将样品提取出来，再和特异性抗体结合。
接着，将其放入相应的试剂液中，让抗体和抗原之间结合。
如果待检测的物质中含有马铃薯病毒，则其会和抗体结合，此时酶标记物会在保持抗体-抗原结合的前提下与之结合，进行染色反应。
当反应结束后，利用酶标记物之间的反应来判断样品中是否含有马铃薯病毒。
（二）聚合酶链反应方法（PCR）聚合酶链反应方法是一种通过DNA扩增的方法来检测马铃薯病毒。
这种方法的特点在于灵敏度高，能够检测非常低浓度的病毒。
同时，PCR方法也比较快速、准确。
PCR方法需要的材料和设备相对复杂。
需要将提取的样品放入PCR扩增仪中，加入相应的引物和酶，开始扩增过程。
扩增后，通过凝胶电泳检测扩增后的产物。
总之，可见，现在已经有多种方法可以检测马铃薯病毒病。
但即使是最好的检测方法也不是百分之百精确的。
因此，在使用这些方法进行检测时，非常重要的一点是要选择合适的样品，并严格按照检测方法执行，才能取得准确的结果，从而提高农业生产效率。
浅析马铃薯病毒检测技术
马铃薯是我国重要的粮食作物和经济作物,马铃薯在定西市种植也有200多年的历史,在保障全市粮食有效供给和繁荣城乡经济中发挥了十分重要的作用,已由过去的“救命粮”变成了现在的“致富薯”,是定西最具生产潜力、市场优势和开发前景的特色农产品,也是农业增效、农民增收的第一大优势产业。
近年来,定西市委、市政府对马铃薯产业高度重视,作为全市农业和农村经济发展的战略性主导产业来扶持,制定了“全市马铃薯产业发展规划”,省上也制定下发了“关于进一步加快发展马铃薯产业的意见”,提出了工作思路和具体目标,促进了本市马铃薯产业的快速发展。
2013年全市种植面积达到319.84万亩,总产量506万t,是全国三大马铃薯集中产区之一。
但是由于定西经济条件落后,全市的马铃薯种薯的病毒检测并未随着种植面积的扩大而提高和普及,以至于马铃薯各种病每年在生长期发生,严重影响了全市马铃薯的产量和质量。
马铃薯病毒已成为马铃薯生产中的重要制约因素,急需大力提高马铃薯种薯的病毒检测,为马铃薯产业的持续快速发展把好第一增长关。
马铃薯病毒检测包括：基础试管苗、马铃薯原原种、大田种薯的检测。
严格的检测大大提高了种薯合格率,而种植合格的种薯,每亩可以提高产量500kg 以上。
马铃薯的病毒有6种,分别是马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯A病毒（PVA）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）。
目前最常用的马铃薯病毒检测是用双抗体夹心酶免疫吸附测定法（DAS-ELISA）检测,是用于快速、灵敏、准确的血清学技术,是国际通用的检测方法之一。
下面就本市引进的“马铃薯病毒DAS-ELISA检测”全套生产技术进行浅述。
1马铃薯病毒的概况1.1马铃薯X病毒（PVX）也称普通花叶病毒,是一种长520～550nm的线状病毒,有时在电镜下能看到病毒颗粒的中心孔。
在病毒外壳由亚基形成时,可看到它的横纹,这一点是与马铃薯重花叶病毒在形态结构上的主要区别。
马铃薯病毒
1、植物是否有免疫系统？ 2、马铃薯病毒有哪些？ 3、如何辨别马铃薯是否患病？ 4、马铃薯病毒的传播途径是什么？ 5、如何防治马铃薯病毒？
一、植物的免疫系统：
1、植物有自己的免疫系统。植物免疫系统存在于单个细胞
层面。
2、植物免疫：
第一层防御：关闭气孔，胼胝质沉积 ，氧化猝发 等。
第二层防御：主要包括过敏反应，一个重要的结果就是引起
马铃薯Y病毒（PVY）
马铃薯Y病毒+马铃薯A病毒 马铃薯X病毒（PVX） 马铃薯A病毒（PVA） 马铃薯S病毒（PVS）
50左右
80左右 10~50 与PVY复合侵染造成严重危害 10~20
马铃薯类病毒PSTVD
20~35，严重时可达60
三、马铃薯病毒病田间表现症状复杂多样，常见的症状 类型可归纳如下： (1)花叶型。叶面出现淡绿、黄绿和浓绿相间的斑驳花 叶（有轻花叶、重花叶、皱缩花叶和黄斑花叶之分）， 叶片基本不变小，或变小、皱缩，植株矮化。 (2)卷叶型。叶缘向上卷曲，甚至呈圆筒状，色淡，变 硬革质化，有时叶背出现紫红色。
受感染的细胞死亡（programmed cell death），许多病
原体需要宿主细胞存活自己才能存活（biotrophic），受感
染的细胞死亡可以限制病原体存活和扩散（这一点存在争
议）。
二、马铃薯病毒种类
• 世界上的马铃薯病毒有40多种，在我国普遍存在而且对 马铃薯危害严重的病毒有：
病毒 马铃薯卷叶病毒（PLRV） 对产量造成的影响（%） 40~60
马铃薯病毒病
马铃薯病毒病(一)病原及侵染对马铃薯能够侵染并且造成损失的病原病毒有马铃薯X 病毒、Y病毒等多种。
马铃薯花叶病毒(PVX)，是一种长520-550nm的线状病毒，有时在电镜下能看到病毒颗粒的中心孔。
在病毒外壳由亚基形成时，可看到它的横纹，这一点是与马铃薯重花叶病毒在形态结构上的主要区别。
马铃薯重花叶病毒(PVY)，是一种长680-900nm的线状病毒，在电镜下找不到它的中心孔和外壳蛋白亚基的横纹。
它比PVX更细一些、更长一些。
此外，还发现了马铃薯S病毒、M病毒、黄矮病毒和类病毒中的马铃薯纤块茎病毒。
对于马铃薯病毒侵染造成马铃薯病毒病的途径，主要是汁液传播。
汁液传播的主要媒介是蚜虫。
蚜虫有探食性特性，就是说，蚜虫在接触植物(主要是幼嫩叶片)时，首先在着落点吐出唾液，停一会再在有唾液部位，连同刺吸的汁液和唾液一同吸回，最后才确定是否继续吸食下去，正是由于这个特性，病毒在汁液悬浮中就依靠蚜虫这个主要媒介而传播。
所以，一般的农药杀蚜，并不能解决蚜传病毒问题。
蚜虫被杀死了，病毒也早已传播了。
PVX通过汁传后，在马铃薯植株上造成的症状是轻花叶，PVY通过汁液传播后，在马铃薯植株上造成的症状是重花叶，PVX与PVY的重复感染在马铃薯上产生明显的重花叶和斑枯，对产量和品质的影响就严重了。
在生产实际中，往往是复合感染，因此，后果严重。
成片的马铃薯枯斑坏死是屡见不鲜的。
直至收获的块茎都出现肉质褐变。
(二)微公害、无公害防治技术1.选留和选用无病种薯种用马铃薯，一般以秋薯为佳，一来腐烂率小，二来薯块较小而匀称，经济实用。
作为选留无病种薯，一般用目测法，植株生长健壮，芽眼鲜嫩无病，薯块韧实而鲜壮，同时注意尽量用新窖或未贮存过病株的场所，历经一段时间后，播前对选留的种薯再作一次逐块检查。
2.茎尖脱毒培养马铃薯病毒有一个很重要的特点，实践证明，在植株的生长点部位是不带毒的。
也就是说，病毒在寄主体内传递的速度不如植株生长的速度快，利用这一特性，在无毒条件下切取茎尖0.3-0.5毫米，”栽种”在烧瓶培养基上，培育无毒小苗和无毒小种薯，用这种无毒小种薯作一级种薯，再在无病地块中进行二级种薯扩大繁殖，用于大田生产。
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马铃薯病毒种类及主姜病毒检测方法•农学论文
马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法
罗燕娜,刘江娜,王航
（兵团第六师农业科学研究所,新疆五家渠831300 ）
收稿日期：2 015—01—20
摘要：本文对：Ibli地区马铃薯主要病莓的特性和致病症状逬行了描述”并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。
关键词：马铃薯；病莓；检测方法
马铃薯在我国广泛种植,已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。
由于光照强、昼夜遍差大、气候冷凉等优势，新疆北疆沿天山一带的昌吉州、乌鲁木齐、昭苏、新源等地都非常适宜种植马铃薯，现种植面积已达2310hm2［l］.
然而在当前的马铃薯生产中，病壽病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题［2］。
目前，已报道的马铃薯病毒种类超过25种、类病壽1种，其中，侵染乌鲁木齐地区马铃書的主要病原病莓有
PVX、PVY、PVA、PLRV,类病莓为PSTVd。
主要检测的马铃薯病毒有马铃薯X
病毒（PVX X马铃薯Y病量PVY 1马铃S S病頡PVS \马铃薯M病毒（PVM \
马铃薯卷叶病毒（PLRV ）及马铃薯纺锤块茎类病莓（PSTVd ）⑴。
1马铃薯主要病莓种类及致病症状
1.1马铃薯X病毒（PVX）
X病莓又称普通花叶病莓,病莓粒子为长杆状,大小为515nmxl3nm ,基因组全长6.4kb［3］。
该病莓可通过叶片汁液摩擦传播，也可通过蜗虫以非持久性方式传播,还可通过种暮传播［1］。
感病植株症状多种多样,因栽培品种的敏感性
不同和病莓株系的不同而存在差异，多数表现为轻花叶或潜隐症状，症状严重的
则表现为严更的花叶或皱缩,产量损失可达50%。
1.2马铃薯Y病毒（PVY）
Y病莓又称为重花叶病莓，病莓粒子形状为弯曲的线形,大小为
750nmxllnm ,多数通过桃妈和大戟长管妈传播。
PVY包括3个株系组：马铃薯Y病毒普通株系组（PVYO X马铃薯点条斑株系（PVYC ）和马铃薯Y病毒褐脉株系（PVYN L前2个株系组引起的主要初期症状是叶片坏死、斑驳，后期
则表现为矮化、皱缩、斑驳和卷曲；第3个株系组初期表现为不同程度的花叶, 后期为花叶和斑驳,当溫度低于10°C或高于25°C时，花叶症状消失。
产量损失最高可达80%。
通常该病莓不会引起块茎发病，但近年来欧洲出现的一个新株系PVYNTN ,则可在块茎上导致坏死环斑［4］。
1.3马铃薯A病莓（PVA ）
A病莓又称为轻花叶病莓,病莓粒体为弯曲的线形，大小为730nmxl5nm ,
基因组全长9.7kb。
该病莓可通过汁液摩擦传播或由33虫以非持久性方式传播, 也可通过种團专播。
感病植株的症状表现为脉间花叶、叶片有光泽、叶脉深陷和说缘粗缩，产量损失可达40%。
1.4马铃薯S病莓（PVS ）
S病毒又称为潜隐性花叶病毒，病莓粒子形状为线形,大小为650nmxl2nm,
病毒基因组全长7.4kb。
可通过汁液摩擦传播，也可通过!@虫传播。
感病植株初期症状不明显，严重危害时，叶片呈青铜色，叶脉轻微下陷，植株的开张度较大。
一些品种上会出现坏死斑和条纹。
在田间常与其他病莓混合侵染，当与PVX或
PVM病莓混合侵染时,可减产20%〜30%［5］。
L5马铃薯M病莓(PVM )
M病莓也厲于香石竹潜隐病毒厲(Carlavirus X病§粒子为线形,大小为
650nmxl2nm ,该厲病毒基因组全长&5kb。
可通过机械传播,或者通过4?虫以非捋久性方式传播，也可通过种薯的调运远距离传播。
感病植株叶上表面的叶脉深陷,有的出现粗缩.叶片轻微下垂,顶部叶片呈开散状。
1.6马铃薯卷叶病莓(PLRV )
PLRV厲于马铃薯卷叶病莓厲(Polerovirus),病毒粒子为六边形等轴对称，
直径24nm-26nm ,基因组全长5・9kb。
主要由4?虫传播，也可通过种薯传播。
感病植株发病较轻时表现为幼叶褪绿.卷曲，叶基常有紫红色边缘。
发病较重时.
植株矮化.叶片上卷并革质化,产量损失可达70%[1].
2马铃薯病莓检测方法
因马铃薯茎尖脱莓培养过程中各环节都会有误差，所以在茎尖苗扩繁之前必须对马铃薯苗进行严格的病莓学检测『确定不带病莓后才能逬一步扩繁。
除此之外, 还必须抽样检查以下几种情况：瓶苗下地之前、组培苗杆插结束.试管薯出苗后
30~40d、现蕾期至盛花期、收获前30d左右、收获后和种薯出库前。
因此■在
马铃書脱莓种書培育过程中，准确可靠的病莓检测方法与高效的脱莓方法同等重要⑹。
目前bl養地区常用的马铃薯病番检测方法是酶联免疫吸附法(双抗体夹心法
(DAS-ELISA)X该检测方法的主要操作过程有以下几步。
21准备工作
实验前.在设计图表上注明各反应孔的位置，以避免出错。
在密封塑料盒底部铺1张吸水纸■倒入适量蒸憎水使之刚好润湿,即为恒湿箱,孵育用。
微孑版为
可拆卸,根据用量取出所需数量的微孔，未使用完的微孑庖封好.4。
(：下保
存。
2.2样品的提取及稀释
尽可能选择出现症状的植物组织作为样品.通常将叶片作为ELISA实验的检
测样品,其它植物组织也可用于ELISA实验。
使用通用样品提取缓;中液来碾磨
稀释样品。
若用研钵提取样品,在每份样品提取后彻底清洗研钵,以免造成样品
间的相互污染。
将样品与通用样品提取缓冲液以1:10(样品重量(g ):提取缓冲液体积(mL)
的比例研磨样品。
每个反应孔需要lOOpL的样品提取稀释液。
多制备一些样品提取稀释液以利于吸取。
23点样
根据实验设计，取lOOpL样品提取稀释液到各样品孔中,取lOOpL阴性质控物溶液到阴性对照孔中,取lOOpL阳性质控物溶液到阳性对照孔中。
24准备酶合物
检测抗体和酶标抗体均为浓缩液体,应根据标签上的稀释倍数用ECM缓冲液稀释。
根据酶标记物标签上的稀释倍数将酶标记物和检测抗体(瓶A和瓶B )加
到1倍的ECM缓冲液中,混合均匀。
IpL的检测抗体稀释液可供8个反应孔使用,WpL的酶标记物稀释液可供96个反应孔使用。
2.5洗板
孵育结束后.将反应孔中的试剂倒出，加入250pL的1倍PBST缓冲液,之后快速倒出，重复7次，将微孔板倒扣在吸水纸上以控干孔中残留液体。
2.6加酶标结合物
在各反应孔中加入lOOpL配置好的酶标结合物溶液。
2.7孵育
室溫下(25°C )在恒湿箱中孵育2h。
2.8PNP底物的制备
孵育结束前ISmin制备PNP底物溶液。
在室溫下用SmLPNP缓冲液溶解1 片PNP底物片。
每片PNP底物片可溶解成5mL的底物溶液,溶解比例为
Img/mL ,可供40个反应孔使用。
在室温下用SmLPNP缓冲液(1倍浓度)
溶解1片PNP底物片。
2.9洗板、力DPNP底物溶液
洗板步骤同2.5 ,重复8次。
在各反应孔中加入lOOpLPNP底物溶液。
2.10孵育
在恒湿箱中孵育60min ,避免阳光直射或强光照射。
2.11结果分析
直接用肉眼观察或用酶标仪在405nm波长下测量结果。
阳性结果：微孔中有明显颜色变化;阴性结果:微孔中没有明显颜色变化。
只有在阳性质控孑U昙到阳性结果的时候，实验结果才是可靠的。
结果可保持Ih 左右(只要阴性质控孑QF发生颜色变化X
3结语
建议种書加工企业在3个环节上逬行质量检验:(1)核心种苗必须进行病莓检测，检测方法可采用DAS-ELISA. ( 2 )田间检验。
全部植株目测检查3次,
目测不能确诊的非正常植株采集样本进行实验室检验，种薯每批次至少随机抽检
5~10点,每点100株，各指标可参照GB18133-2012标准［7］。
( 3 )块茎检验
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