浙科版高中生物选修一实验一-大肠杆菌的培养和分离
浙江省地区学科高三生物实验1-大肠杆菌的培养与分离课件浙科版选修
实验目的: 实验目的
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养 进行大肠杆菌的扩增 基进行细菌培养的操作 2.进行大肠杆菌的分离,用 2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培 进行大肠杆菌的分离 养基进行细菌的划线培养 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求 说明大肠杆菌培养的条件和操作要求 的原理
划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。
分离后,一个菌体 分离后 一个菌体 便会形成一个菌 这是消除污染 落,这是消除污染 这是 杂菌的通用方法, 杂菌的通用方法 也是用于筛选高 也是用于筛选高 表达量菌株的最 表达量菌株的最 简便方法之一
一旦划破，会造成划线不均匀， 一旦划破，会造成划线不均匀，难 以达到分离单菌落的目的； 以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落， 形成规矩的菌落，菌落会沿着划破 处生长，会形成一个条状的菌落。 处生长，会形成一个条状的菌落。
（四）大肠杆菌的划线分离
1、划线分离法 、 注意事项: 注意事项 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划 接种环只蘸一次菌液 但要在培养基不同位置连续划 线多次. 线多次 2.划线首尾不能相接 划线首尾不能相接 划线 3.划线后 培养皿倒置培养 划线后,培养皿倒置培养12~24h 划线后 培养皿倒置培养
一、基础知识： 基础知识： (一)微生物 ：是一切肉眼看不见或看不清 一 微生物 楚的微小生物的总称． 楚的微小生物的总称．
病毒 细菌
微生物包括哪五类： 放线菌 微生物包括哪五类： 真菌 原生动物
2017-2018学年高中生物浙科版浙江专版选修1课件：第一章 实验一 大肠杆菌的培养和分离 精品
干热灭菌
干热灭菌箱在 160～170 ℃加热 1～2 h 100 kPa、121 ℃ 维持15～30 min
高压蒸汽灭菌
培养基及多种器材、物品
灭菌和消毒种类 玻璃砂漏斗过滤 灭菌
尿素或葡萄糖的培养 基的灭菌 家庭餐具等生活用品的 消毒 接种室、接种箱、超净 工作台
(2) 倒平板 ：将培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中，水平 放置，使之形成平面。 (3) 接种：在装有液体培养基的 三角瓶 中接种大肠杆菌，在 每分钟 200 转的摇床上振荡培养 12 h。 (4)划线分离：用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液 一次，在固体培养基的平板上 连续划线 ，盖好培养皿。培养皿倒
提示：所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤(特别 是培养基)；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。
核心要点一| 培养基及无菌技术
1．LB 培养基的分类及用途
2．几种常用灭菌和消毒方法的比较
灭菌和消毒种类
灼烧灭菌
主要方法
酒精灯火焰灼烧
应用范围
微生物接种工具，如接种 环、接种针或其他金属用 具等，接种过程中的试管 口或瓶口等 玻璃器皿(如吸管、培养皿 等)、金属用具等凡不适宜 用其他方法灭菌而又能耐 高温的物品
5．微生物生长对 pH 的要求 细菌要求在中性偏碱(6.5～7.5)的环境中生长；真菌 要求在中性 偏酸(5.0～6.0)的环境中生长。 三、无菌技术 1．获取纯净培养物的方法
获得纯净培养物的关键是防止外来 杂菌的入侵， 具体操作如下： (1)对实验操作的 空间、操作者的 衣着和手，进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 灭菌 。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 酒精灯火焰 附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相 接触。
浙科版选修1实验1大肠杆菌的分离和培养
B）
3、在平板划线操作中，错误的是 ( C ) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C．接种环在平板上的划线位置是随机的 D．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰
在适当的稀释浓度下， 可以培养到相互分开的单菌落
倒平板
制斜面
（五）、 纯化 分离 方法
划线分离法和涂布分离法
（一）划线分离法（接种环）
操作： 用蘸有菌液的接种环（只蘸一次）在固体培养 基表面连续划线。 结果： 接种环上菌液减少 细菌分散 单细菌 细菌间距离加大 单菌落
（二）涂布分离法（玻璃三角刮刀）
操作：先将菌液稀释，然后将0.1ml不同稀 释度的菌液涂布到固体培养基上。 结果：适当的稀释度 单细菌
细
毒
菌
2.微生物包括五类
放线菌 真 菌
原生动物
大肠杆菌
酵母菌
放线菌
链球菌
艾滋病病毒
肺炎双球菌
曲霉菌
菌落 （1）概念 P20第七行
（2）菌落形状、颜色、大小 等特征是鉴定菌种的重要依 据。
培养皿涂布杂菌形成的菌落
实验器材
洗耳球
移液管
移液枪
玻璃刮刀（涂布棒）
接种环
超净工作台
摇床
(一)培养基
(三)无菌操作
•
1、获得纯净培养物的关键: 防止外来杂菌的入侵
•菌
（1）灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 ② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
浙科版高二生物选修1_《大肠杆菌的培养和分离》教案
实验1 大肠杆菌的培养和分离【学习目标】1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的化纤培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
【教学重点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。
【教学难点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读。
【实验教材分析】本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。
本次课程主要包括了本次实验的目的、大肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实验步骤等内容。
在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。
并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。
故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化，同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。
因此，本节课起着承前启后的重要作用。
【学情分析】本节课的教授对象是选了选修1这门课的高二学生，在实验前，学生已经学习过了革兰氏阳性菌与阴性菌的相关知识，本次实验主要是学生在掌握细菌的相关知识后学习大肠杆菌的分离与鉴定，很好地实现了将所学知识与实践相联系，易引起学生的兴趣，学生的积极性较高，从而有利于实验教学的展开。
但学生对于实验原理、实验方法和实验技术等方面还不熟悉，需要教师对此进行详细的讲解，在讲解过程中注意运用适宜的教学方法，引导学生将所学知识运用到具体的实验实践中。
同时，教师需严格要求学生在操作上符合实验室规范，将实验操作过程中的注意事项对学生进行逐一说明，保证实验的有序性与安全性。
【实验教学过程】（一）创设情境，导入新知【教师活动】教师展示饮用水净化、消毒灭菌、检测、出品的简略过程，抛出在检测这一过程中主要是以某一微生物作为指标来进行检测，从而引出本次实验的材料—大肠杆菌（展示图片）。
浙科版高中生物选修一 第一部分 实验1 大肠杆菌的培养和分离(共15张PPT)精品课件
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1
高中生物第一部分《实验一大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1微生物的利用大肠杆菌的培养和分离学案一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2和实验3不作要求。
三、知识要点：1、微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2、细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3、培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
有的还需要在培养基中加入特殊营养物质。
4、在培养微生物时，必须进行。
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
高中生物浙科版(浙江专版)选修一课件：第一章 实验一 大肠杆菌的培养和分离
方法简单，但单菌落 较难分开
使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体—— 目的 菌落
五、大肠杆菌的培养与分离 1．大肠杆菌 (1)特性：革兰氏 阴性 、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)繁殖：以 分裂 的方式繁殖，分裂速度很快。 2．扩大培养与分离 扩大培养用LB 液体培养基， 划线分离用 LB 固体平面 培养基。 3．大肠杆菌分离过程 (1)培养基灭菌：50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养 基及培养皿使用 高压蒸汽 灭菌。
)
2．下列对灭菌和消毒的理解，错误的是
(
)
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是完全相同的 C．接种环用灼烧法灭菌 D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法
解析：消毒是使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面 或内部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。灭菌则是使用强烈的 理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 答案：B
置 (盖在下面)， 放在 37 ℃恒温培养箱中培养 12～24 h 后， 可看到 在划线的末端出现不连续的 单个菌落 。
(5)培养观察：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划 线法接种在空白斜面上，在 37 ℃下培养 24 h 后，置于 4 ℃冰箱 中保存。
1．下列操作错误的是 A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源 C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精擦拭灭菌
4．请回答下列与大肠杆菌有关的问题： (1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________。 (2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成分 蛋白胨
乳糖
蔗糖 K2HPO4
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浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生 长繁殖的营养基质。
液体培养基 扩大培养，工业生产
凝固剂 琼脂
固体培养基 分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
选择培养基 鉴定培养基
天然培养基 合成培养基
第一区域 第二区域
第三区域
1.为什么在操作的第一步以及每次划线 之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时， 仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
• 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可 能存在的微生物污染培养物
• 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束 后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接 种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目 逐渐减少，以便得到菌落
只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置 培养1-2天、划线末端出现不连续的单个菌落
灼烧接种环
冷却
蘸取菌液
灼烧接种环
冷却
灼烧接种环 灼烧接种环
冷却 冷却
划线 （第一区域）
划线 （第二区域）划线来自（第三区域）划线 （第四区域）
灼烧接种环
冷却
平板倒置放置培养
划线 （第五区域）
灼烧接种环
第五区域 第四区域
实验1：大肠杆菌的培养和分离
单细胞原核，分支状的菌丝（基内~、气生~）
芽孢：细菌的休眠体
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 物质(元素)组成：C H O N P S…
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
成分 碳源 氮源 无机盐
水 生长因子
作用
主要作能源物质 合成含N类化合物
调节渗透压等
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类)
N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨
调节促生长
维生素，AA，碱基等
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培
将单菌落用划线法接种到斜面，37度培养24h后放 入4度冰箱保藏
谢谢！
xiexie!
(1)常用消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯 气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
消毒：较为温和的方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢
灭菌：强烈，所有，完全无菌 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重
要的技术。
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
(2)常用灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
浙科版高 中生物 选修一 实验一- 大肠杆 菌的培 养和分 离
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称量-计算-溶化-灭菌-倒平板 灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭
养皿，立刻盖上皿盖 待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置
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从大肠杆菌斜面→锥形瓶中的液体培养基 接种好后在37度摇床振荡培养12h 工具：接种环在接种前要灭菌
分离方法：平板划线分离法
原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表 面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
• 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残 留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进 行划线？
• 以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么 总是从上一次划线的末端开始划线？
• 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处 要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。