土壤蔗糖酶、纤维素酶的测定方法
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤酶类检测
土壤酶类检测土壤酶参与土壤中各种生物化学过程，如腐殖质的分解与合成；动植残体和微生物残体的分解，及其合成有机化合物的水解与转化；某些无机化合物的氧化、还原反应。
土壤酶的活性大致反映了某一种土壤生态状况下生物化学过程的相对强度；测定相应土壤酶的活性，可间接了解某种物质在土壤中的转化情况。
不同植烟模式对土壤酶类物质活性的影响迪信泰检测平台采用生化法，可实现高效、精准的检测多种土壤酶类物质。
目前可检测的土壤酶类物质包括土壤脲酶、土壤蔗糖酶、土壤纤维素酶和土壤脱氢酶等。
此外，迪信泰检测平台还提供土壤酶类生化试剂盒产品，以满足您的不同需求。
迪信泰检测平台可检测土壤酶类项目土壤脲酶(UE)活性检测土壤蔗糖酶(S-SC)活性检测土壤过氧化氢酶(S-CAT)活性检测土壤酸性磷酸酶(S-ACP) 活性检测土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP) 活性检测土壤中性磷酸酶(S-NP)活性检测土壤脱氢酶(SDHA)活性检测土壤纤维素酶(S-CL)活性检测土壤硝酸还原酶(S-NR)活性检测土壤亚硝酸还原酶活性检测土壤多酚氧化酶(PPO)活性检测β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性检测土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC) 活性检测土壤碱性蛋白酶活性检测土壤中性蛋白酶活性检测土壤酸性蛋白酶活性检测土壤过氧化物酶(S-POD)活性检测土壤淀粉酶活性检测土壤几丁质酶活性检测土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(SNAG)活性检测土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP) 活性检测土壤酸性转化酶(S-AI) 活性检测土壤漆酶活性检测土壤木质素过氧化物酶(S-LiP) 活性检测土壤锰过氧化物酶(S-Mnp) 活性检测土壤谷氨酰胺酶(S-GLS) 活性检测土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF) 活性检测FDA水解酶活性检测土壤中性木聚糖酶(NEX)/土壤中性半纤维素酶活性检测土壤酸性木聚糖酶(ACX)/土壤酸性半纤维素酶活性检测土壤碱性木聚糖酶(BAX)/土壤碱性半纤维素酶活性检测土壤植酸酶活性检测土壤羟胺还原酶(HR)活性检测生化法测定土壤酶类样本要求：1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL，测定样品不返还，请您保留备份。
土壤蔗糖酶的测定方法(一)
土壤蔗糖酶的测定方法(一)土壤蔗糖酶的测定方法简介土壤蔗糖酶是一种重要的土壤酶活性指标，其测定方法可以帮助我们了解土壤中有机质分解和糖类循环的过程。
本文将详细介绍几种常用的土壤蔗糖酶测定方法。
方法一：邻苯二甲酸缓冲法1.准备土壤样品和邻苯二甲酸缓冲液。
2.将土壤样品加入邻苯二甲酸缓冲液中，使样品均匀悬浮。
3.在恒温水浴中将样品搅拌一定时间，通常为1小时。
4.用酚酞指示剂进行滴定，直到溶液从紫色转变为粉红色。
5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。
6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性。
方法二：多酚类抑制法1.准备土壤样品和多酚溶液。
2.将土壤样品与多酚溶液混合，使样品与抑制剂充分接触。
3.静置一段时间，通常为4小时。
4.加入邻苯二甲酸缓冲液和酚酞指示剂，进行滴定。
5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。
6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性，与未添加抑制剂的样品相比较，计算抑制率。
方法三：重组蔗糖酶法1.准备土壤样品和蔗糖酶底物。
2.将土壤样品与蔗糖酶底物混合，使底物与土壤酶反应。
3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。
4.加入试剂，使反应停止。
5.根据试剂的反应产物的浓度变化，利用分光光度法或其他适当方法测定蔗糖酶活性。
方法四：荧光素二葡萄糖测定法1.准备土壤样品和荧光素二葡萄糖底物。
2.将土壤样品与荧光素二葡萄糖底物混合，使底物与土壤酶反应。
3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。
4.根据底物反应产物的荧光强度变化，利用荧光分析仪或其他适当设备测定蔗糖酶活性。
5.根据荧光强度的变化计算蔗糖酶活性。
结论通过以上介绍的几种方法，可以选择适合实际需求的土壤蔗糖酶测定方法。
无论是邻苯二甲酸缓冲法、多酚类抑制法、重组蔗糖酶法还是荧光素二葡萄糖测定法，都可以有效地测定土壤中的蔗糖酶活性，为土壤质量评价和农作物种植提供参考依据。
不同方法的选择应根据实际情况权衡利弊，以提高分析结果的准确性和可靠性。
土壤酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm处比色。
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性测定的实验步骤土壤酶的测定1.将三角瓶在稀释的硝酸（3-5%）或洗衣粉中浸泡24小时，然后刷洗，然后用蒸馏水湿润并在空气中干燥。
2.土样应细磨并袋装。
土壤量：2G+2.5G+5G+5G=14.5G，重复一次，14.5×2=29g一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫p323）1.试剂制备：(1)0.3%过氧化氢溶液：① （1:10030%过氧化氢和水）② （0.5mol H2O2+49.5ml蒸馏水）③ （1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）（2）3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）（3）0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gkmno4+100ml蒸馏水）2．操作步骤：将2G风干土壤放入100个三角形烧瓶中→ 40毫升蒸馏水和5毫升0.5毫升蒸馏水注入3%过氧化氢（现配备）→ 在往复式振动筛上振荡20分钟→ 添加5ml 3N硫酸（以稳定未溶解的H2O2）→ 用慢滤纸过滤→ 吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉色3．结果计算过氧化氢酶活性（m），20分钟后在1g土壤中以毫升0.1nkmno4表示：m=（a-b）×T，其中：a：空白消耗的0.1nkmno4毫升数b：滤液消耗的0.1nkmno4 ml T：高锰酸钾滴定的校正值备注：H2O2的酶活性是用容量法测定的：kappen（1913）首先介绍了在硫酸存在下用高锰酸钾滴定残余过氧化氢的方法。
根据H2O2与土壤相互作用过程中未分割H2O2的含量，采用容量法（常用高锰酸钾滴定未分割H2O2）2kmno4+5h2o2+3h2so4测定H2O2的酶活性→2mnso4+K2SO4+8H2O+5o2土壤h2o2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用二、蔗糖酶（p278）滴定法1.试剂配制：（1） 20%蔗糖：（20克蔗糖+80毫升水或12.5克蔗糖+50毫升水）（2）甲苯（分析纯）(3)ph5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液0.5ml磷酸氢二钠12H2O（1/15m）+9.5ml磷酸二氢钾（1/15m）磷酸氢二钠12h2o(1/15m)：23.88gna2hpo4,，加h2o溶解，定容至100ml。
土壤纤维素酶活性测定(3,5- 二硝基水杨酸比色法)
土壤纤维素酶活性测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）
一、原理
纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。
在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。
所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。
纤维素酶解所生成的还原糖与?3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1）甲苯
3）pH5.5
0.2mol/L
0.2mol/L
取
4）3,5-
75g
5
移至
温，
称10g
液和1ml 滤液，
则应该其中：a m表示
烘干土重
仅供个人学习参考。
土壤蔗糖酶实验报告
一、实验目的1. 了解土壤蔗糖酶活性的测定原理和方法。
2. 掌握土壤蔗糖酶活性的测定步骤和操作技巧。
3. 分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。
二、实验原理土壤蔗糖酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法。
该方法以蔗糖为基质，在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖和果糖，再与3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在508nm波长下，通过测定吸光度，可以计算出土壤蔗糖酶活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：风干土壤、蔗糖、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、硫酸、蒸馏水等。
2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、比色计、试管、烧杯、漏斗、滤纸等。
四、实验步骤1. 土壤样品处理：称取风干土壤0.15g，加入5ml蒸馏水，充分振荡后过滤，得到土壤悬液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列葡萄糖标准溶液，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，在508nm波长下测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 土壤蔗糖酶活性测定：取3ml土壤悬液，加入1ml蔗糖溶液和2ml氢氧化钠溶液，混匀后置于50℃恒温水浴锅中反应30分钟。
取出后，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀，在50℃恒温水浴锅中反应10分钟。
取出后，加入硫酸终止反应，冷却至室温。
在508nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性。
4. 数据处理：计算土壤蔗糖酶活性，分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y=0.0628x-0.0026，相关系数R²=0.9989。
2. 土壤蔗糖酶活性测定：根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性为1.23U/g土壤。
3. 分析：土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子呈正相关。
土壤酶的测定方法
参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
③8%蔗糖溶液。
④甲苯。
⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。
再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。
标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。
无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。
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土壤蔗糖酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）
一、原理
蔗糖酶与土壤许多因子有相关性，如与土壤有机质、氮、磷含量，微生物数量及
土壤呼吸强度有关，一般情况下，土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高。
蔗糖酶酶解所生
成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色深度
与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1）酶促反应试剂：基质8%蔗糖，pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠
（11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g
KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成，甲苯
2）葡萄糖标准液（1mg/mL）
预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。
准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。
若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
3） 3,5- 二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2mol/LNaOH和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释定容至100ml（保存期不过7天）。
三、操作步骤
（1）标准曲线绘制
分别吸1 mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新
沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，
以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶测定
称取5 g土壤，置于50mL三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml DNS试剂，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于508nm处进行比色。
（为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照；如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样。
）
四、结果计算：蔗糖酶活性以24h，1g干土生成葡萄糖毫克数表示。
蔗糖酶活性=（a样品－a无土－a无基质）×n／m
a样品、a无土、a无机质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数；n为分取倍数；m表示烘干土重
土壤纤维素酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）
一、原理
纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。
在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。
所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。
纤维素酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1）甲苯
2）1%羧甲基纤维素溶液：1g 羧甲基纤维素钠，用50%的乙醇溶至100ml。
3）pH5.5醋酸盐缓冲液：
0.2mol/L 醋酸溶液 11.55ml 95% 冰醋酸溶至1L.
0.2mol/L 醋酸钠溶液 16.4g C2H3O2Na或27.22g C2H3O2Na.3H2O溶至1L.
取11ml 0.2mol/L 醋酸溶液和88ml 0.2mol/L 醋酸钠溶液混匀即成PH 5.5醋酸盐缓冲液.
4）3,5-二硝基水杨酸溶液：称1.25g二硝基水杨酸，溶于50ml 2mol/LNaOH和
125ml水中，再加75g酒石酸钾钠，用水稀释至250ml（保存期不过7天），
5）葡萄糖标准液（1mg/mL）
预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。
准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用
蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。
若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤
葡萄糖标准曲线：分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、
0.8mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS溶液3ml混匀，于沸腾水浴中加热
5min，取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
称10g土壤置于50ml三角瓶中，加入1.5ml甲苯，摇匀后放置15min，再加5ml 1%羧甲基纤维素溶液和5ml pH5.5醋酸盐缓冲液，将三角瓶放在37℃恒温箱中培养72h。
培养结束后，过滤并取1ml滤液，然后按绘制标准曲线显色法比色测定。
（为了消除
土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做
无土壤对照；如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的
土样。
）
四、结果计算
纤维素酶活性以72h，1g干土生成葡萄糖毫克数表示。
纤维素酶活性=（a样品－a无土－a无基质）×n／m
a样品、a无土、a无机质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数；n为分取倍数；m表示烘干土重。