土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。
(完整word版)最新相关土壤酶测定方法(综合)
土壤蛋白酶活性测定(茚三酮比色法）实验试剂:1、pH7。
6的0.05mol/L的tris—HCL缓冲液（三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲液):50ml0.2mol/L 的三羟甲基氨基甲烷与27.5ml0.2mol/L的盐酸混合,稀释成200ml。
2、2%酪酸钠溶液:称取2g 酪酸钠，加入10ml0.1mol/L的NaOH溶液，沸水浴处理5min,待膨化后加入pH7.6的tris—HCl缓冲液约80ml，继续沸水浴处理,直至完全溶解，用同样的缓冲液定容至100ml。
3、Tris—HCl—CaCl2混合溶液:用pH7.6的0.05mol/Ltris—HCl缓冲液配制的0。
01mol/L的CaCl2溶液。
4、0。
6mol/L乙酸铅溶液。
5、草酸钠—乙酸混合溶液：每1000ml0。
26mol/L的草酸钠溶液含有240。
7ml0。
2mol/L的乙酸.6、茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂:称取2g茚三酮，0。
02g 抗坏血酸，溶于100ml无水乙醇。
7、0。
2％KIO3溶液。
8、pH5.8乙酸-乙酸钠缓冲液：94 ml0。
2mol/L乙酸钠与6ml0。
2mol/L乙酸混合.9、0.01%甘氨酸标准溶液：1g甘氨酸溶于1000ml水，再稀释10倍。
10、甲苯。
以上试剂均为分析纯。
实验仪器:基本仪器如试管、烧杯等、离心机、分光光度计、刻度试管、水浴锅、电子天平、移液管实验步骤1、标准曲线的绘制①分别吸取50 、100、150、200、250、300μl0。
01％甘氨酸标准溶液,置于10 ml刻度试管中(浓度分别相当于NH2 0.107、0。
213、0。
320、0。
426、0。
533、0.639μg/ml），加入2mlpH5。
8的乙酸—乙酸钠缓冲溶液②加入1。
5ml 茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂，混合均匀,沸水浴加热16min③取出立即用自来水冷却15min,加入1ml0.2%KIO3并混合均匀，用蒸馏水定容至10ml，1h内在570nm处比色测定吸光值；以氨基氮(NH2）的浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线.2、培养与测定①称取0.200g土壤,加入2mlTris—HCl—CaCl2混合溶液和1ml甲苯,混合均匀后静置15min以抑制微生物活性；②然后再加入5ml2%的酪酸钠溶液,50℃振荡培养2h。
土壤酶活活性测定方法
土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。
与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38℃的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液于50mL容量瓶中，用蒸馏水加至10mL。
然后按标准曲线绘制的操作加入苯酚钠等试剂，显色，比色，最后根据标准曲线求出氨态氮含量。
土壤纤维素酶的测定
土壤纤维素酶活性的测定方法
土壤纤维素酶活性的测定方法包含以下步骤：
1. 准备醋酸缓冲液、CMC溶液、水合葡萄糖溶液等试剂，恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器，三角瓶等设备。
3. 取10.00 g（耕地）或5.00 g（林地）的新鲜土壤，加入15 ml醋酸缓冲液和15 ml CMC溶液，在50℃下培养24小时。
4. 过滤，同时做空白对照。
5. 取2.00 ml样品于50 ml容量瓶中定容，吸取2.00 ml稀溶液于20 ml去离子水中，加入10.00 ml无水葡萄糖溶液，在100℃下水浴加热15分钟。
6. 冷却后加入10.00 ml无水葡萄糖溶液，在690nm波长下进行比色定。
注意：此方法适用于林地土壤，耕地土壤的测试效果可能较差。
土壤学酶活性实验报告
土壤学酶活性实验报告实验目的：本实验的目的是通过测定土壤样品中的酶活性，了解土壤中酶活性对土壤养分转化和有机质降解的影响，为土壤肥力评价提供参考依据。
实验原理：土壤是一个复杂的微生物生态系统，其中微生物和土壤酶活性对于土壤有机质降解和养分转化起着关键作用。
本实验选择常用的酶活性指标进行测定，包括脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。
脲酶是土壤中一种主要的氨氧化酶，催化氨离子氧化为亚硝酸离子。
本实验采用亚硝酸盐评价方法，根据脲酶催化下苏亚硝酸盐的生成量来测定酶活性。
过氧化氢酶是一种氧化酶，催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。
在本实验中，加入过氧化氢和酶作用后，通过测定生成的氧气体积来计算酶活性。
蔗糖酶是一种糖酶，催化蔗糖降解为葡萄糖和果糖。
在实验中，将土壤样品与蔗糖溶液反应，再通过添加硫酸酸化，使用菲林试剂测定生成的还原糖量来测定酶活性。
实验步骤：1. 收集土壤样品，并将其空气干燥后研磨成粉末状。
2. 准备酶活性测定所需的荧光素磷酸盐、过氧化氢、蔗糖等试剂，按照说明书配制所需的溶液。
3. 酶活性测定前，先将土壤样品与适量的氯仿进行均匀摇匀，以杀死微生物活性。
4. 进行脲酶活性的测定，依次将土壤样品溶液、反应液和荧光素磷酸盐溶液加入96孔板中，放入荧光光度计中进行测量。
5. 进行过氧化氢酶活性的测定，将土壤样品溶液、过氧化氢和缓冲液加入96孔板中，加入过氧化氢酶溶液后，用气泡计测定产生的气体体积。
6. 进行蔗糖酶活性的测定，将土壤样品溶液、蔗糖溶液和酸化剂加入96孔板中，加入菲林试剂后，使用分光光度计测定溶液的吸光度。
实验结果：根据实验步骤测定得到的数据，可以计算出脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶的活性值。
根据实验条件和添加的试剂浓度，可以计算出单位土壤样品中酶活性的相对值，以便进行土壤酶活性的比较和评价。
实验结论：通过测定土壤样品的酶活性，可以了解土壤中微生物代谢活性和有机质降解程度。
较高的脲酶活性表明土壤中氮转化能力较强，有机氮物质较容易转化为无机氮形式。
测土壤酶活方法
测土壤酶活方法酶活性是评价土壤质量和生物活性的重要指标之一。
测定土壤酶活性可以帮助我们了解土壤中微生物的活动水平和土壤中有机物的分解能力，从而判断土壤的肥力和健康状况。
本文将介绍几种常用的测土壤酶活性的方法。
一、脲酶法测定土壤酶活性脲酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中脲酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
脲酶是一种催化尿素分解的酶，可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
测定土壤中脲酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
脲酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有尿素和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的尿素，计算出脲酶的活性。
二、过氧化氢酶法测定土壤酶活性过氧化氢酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中过氧化氢酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可以将过氧化氢分解为水和氧气。
测定土壤中过氧化氢酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
过氧化氢酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有过氧化氢和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的过氧化氢，计算出过氧化氢酶的活性。
三、醋酸红法测定土壤酶活性醋酸红法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中醋酸红酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
醋酸红酶是一种催化醋酸红分解的酶，可以将醋酸红分解为醋酸和二氧化碳。
测定土壤中醋酸红酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
醋酸红法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有醋酸红和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的醋酸红，计算出醋酸红酶的活性。
测定土壤酶活性可以通过脲酶法、过氧化氢酶法和醋酸红法等方法来进行。
土壤脲酶靛酚蓝比色法
土壤脲酶靛酚蓝比色法
土壤脲酶靛酚蓝比色法是一种测定土壤脲酶活性的方法。
具体步骤如下：
1.试剂的配制：包括10%尿素、柠檬酸盐缓冲液(PH=6.7)、苯酚钠溶液(1.35mol/L)、次氯酸钠溶液、氮的标准溶液(0.1mg/ml)等。
2.样本处理：取适量土壤样本，称重并记录，然后加入适量的尿素和柠檬酸盐缓冲液，摇匀后静置30分钟。
3.比色：取适量上述混合液，加入苯酚钠溶液和次氯酸钠溶液，摇匀后静置15分钟，然后加入适量的无水乙醇，摇匀后静置5分钟。
4.测定吸光度：用分光光度计在625nm波长下测定上述混合液的吸光度。
5.计算：根据吸光度和氮的标准溶液的浓度，计算出土壤样本中脲酶的活性。
注意事项：在操作过程中，需要保证试剂的准确配制和仪器设备的精度，同时要严格控制操作步骤和时间，以避免误差的产生。
此外，为了得到准确的测试结果，建议按照实验要求进行重复实验，并对结果进行平均处理。
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土壤酶的测定
1．三角瓶用稀HNO
3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后刷洗，然后再用蒸馏水润洗，晾干。
2．土样研磨精细后分袋装好。
土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g，重复一次，14.5×2=29g。
一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323）
1．试剂配制：
(1)0.3%过氧化氢溶液：
①（1：100 30%的H
2O
2和水）
②（0.5molH
2O
2+49.5ml蒸馏水）
③（1ml30% H
2O
2+99ml蒸馏水）
(2)3N硫酸：
（10ml硫酸+50ml水）
(3)0.1N高锰酸钾溶液：
（1.58gKMnO
4+100ml蒸馏水）
2．操作步骤：
2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml 0.3%过氧化氢（现配）→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以稳定未分解的H
2O
2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色
3．结果计算
过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1N KMnO
4的毫升数表示：
M=（A－B）×T
式中：
A：
空白消耗的0.1N KMnO
4毫升数
B：
滤液消耗的0.1 N KMnO
4毫升数
T：
KMnO
4滴定度的校正值
以容量法测H2O2的酶活：
Kappen
（1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。
此法根据H
2O
2与土壤相互作用时，未分解的H
2O
2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H
2O
2）测定H
2O
2的酶活
2 KMnO
4＋5H
2O
2＋3H
2SO
4→2MnSO
4＋K
2SO
2O＋5O2土壤H
2O
2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用
二、蔗糖酶（P278）滴定法
1.试剂配制：
(1)20％蔗糖：
（20g蔗糖＋80ml水或12.5g蔗糖＋50ml水）
(2)甲苯(分析纯)
(3)PH5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液
0.5ml磷酸氢二钠·12 H
2磷酸二氢钾（）
磷酸氢二钠·12H
2：23.88g Na
2HPO
4,，加H
2O溶解，定容至100ml。
磷酸二氢钾（）：9.072g KH
2PO
4，加H
2O溶解，定容至1000ml。
(4)33%KI溶液（4.925g+10ml水）现配，冰箱遮光
(5) H
2SO
4（1：3）（体积比）：15ml 98%H
2SO
4+ 45ml蒸馏水
(6)淀粉指示剂
取0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的2.5%NaCl液煮沸1min。
（2.5%NaCl：2.5g NaCl加97.5ml蒸馏水。
）
(7)0.1NNaS
2O
3滴定液
取25克-----溶解于刚煮沸而冷却的蒸馏水中，加入少量的碳酸钠，稀释至1升。
(8)菲林溶液
取3.464克CuSO
4·5H
2O溶于蒸馏水，并稀释至50ml（a）,取17.3g酒石酸钾钠和5gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至50ml（b），使用前将（a）（b）按1：1混合。
2.操作步骤
取2.5g土置于100ml三角瓶→用0.375ml甲苯处理15min。
加2.5ml20％蔗糖和
2.5mlPH5.5醋酸铅－磷酸盐缓冲液摇匀后放在37度恒温箱中培养24h。
培养结束后，加12.5ml蒸馏水。
摇荡后过滤，取5ml的滤液移入100ml三角瓶中，加2.5ml的菲林溶液，在沸水浴上放置10min，冷却至室温后，再加0.75ml 33%KI溶液和1ml H
2SO
4（1：3）。
加入淀粉指示剂2滴，然后用0.1NNaS
2O
3滴定。
颜色：
棕色→棕蓝色→乳白色（滴定结束）
注意：
减量滴定，一般取5ml即可，滴定需NaS
2O
3溶液（大量）
空白对照：30.15ml（取5ml时）
3．结果计算：
蔗糖酶活性（M），用对照与试验的0.1NNaS
2O
3滴定量毫升数之差表示。
试验应设以水20毫升代替基质。
M=（A－B）×T×
式中：
A：
对照所消耗的0.1NNaS
2O
3毫升数
B：
滤液所消耗的0.1NNaS
2O
3毫升数
T：
NaS
2O
3滴定度的校正值
×：
换算成1g土消耗的0.1NNaS
2O
3量
三、脲酶
1.试剂配制
(1)PH=6.7柠檬酸盐缓冲液
取3.68g柠檬酸溶液于6ml蒸馏水中，另取2.95g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将PH调至6.7，并将水稀释至20ml。
(2)苯酚钠溶液
称62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，然后用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中。
称27gNaOH溶于100ml水中（B液），存于冰箱中。
使用前，取A,B两液各20ml混合，并用蒸馏水稀释至100ml备用。
(3)次氯酸钠溶液
用水稀释制剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
（17.3mlNaClO定容至100ml）。
(4)10%尿素液
10g尿素＋90ml水
50g尿素＋450ml水
(5)甲苯
(6)氮的标准溶液（不要配）
精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。
绘制氮的标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
2.操作步骤
取5g风干土，至于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。
15min加10ml 10%尿素液和20mlPH6.7柠檬酸缓冲液。
摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
过滤后取3ml滤液注入50ml锥形瓶中，然后加蒸馏水20ml，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，边加边摇匀。
20min后显色，定容50ml：1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。
然后按绘制标准曲线（显色方法）进行比色测定。
3．结果计算：
脲酶活性（M）以24h后1g土壤中NH 3－N的毫克数表示
M=x×
标准曲线：
y=0.0268x+0.001804
即：
M=（0.001804-y）×
式中：
x：
从标准曲线查得的NH
3－N毫克数
y：578nm处吸光度
×：
换算成1g土的系数
四、磷酸酶
1.试剂配制
(1)PH=9.8氯化铵－氢氧化钠缓冲液
取20g NaOH溶于100mlNH
4OH中
(2)8%铁氰化钾液
称8g铁氰化钾，溶于蒸馏水中稀释至100ml（仅在同一周内存放）
(3) 2% 4－氨基安替比林液
取1g 4－氨基安替比林溶于水中，稀释至50ml（仅在同一周内存放）
(4)0.5%磷酸苯二钠溶液
取1g溶于200ml水中
(5)酚的标准溶液（不要配）
酚原溶液的配制及酚工作液的稀释浓度同磷酸苯二钠法
酚原液：
取1g重蒸酚溶于水中，稀释至1L存于棕色瓶中
酚工作液：
取10ml酚原液稀释至1L（0.01mg/ml酚）
(6)甲苯
标准曲线绘制
吸取1,3,5,7,9,11,13ml酚工作液，分置50ml的容量瓶中，分别加20ml蒸馏水，再加0.25ml缓冲液，0.5ml4－氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾液，每次充分摇动。
最后定容至50ml，15min内在分光光度计上于波长510nm处比色。
根据光密度值于溶液浓度绘制标准曲线。
50－（20＋2＋0.5＋0.5＋0.25）=26.75ml蒸馏水
2.操作步骤
取5g风干土，至于50ml三角瓶中，加5滴甲苯。
20ml0.5%磷酸苯二钠，充分振荡后在37℃恒温箱中培养2h。
取培养后滤液5ml，分置50ml的锥形瓶中，加20ml蒸馏水，再加0.25ml 缓冲液，0.5ml4－氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾液，每次充分摇动。
最后定容至50ml，15min内在分光光度计上于波长510nm处比色。
3．计算
磷酸酶的活性（M），以2h后100g土壤中P
2O
5的毫克数表示
M＝x×80×0.32×2.29
标准曲线：
y=0.002161x-0.000839
即：
M=（y+0.000839）×80×0.32×
式中：
x：
从标准曲线查得5ml滤液中酚的完整数
y：510nm处吸光度
80：换算为100g土壤的余数
0.32：在磷酸苯二钠中，1个重量单位的酚相当于0.32g重量单位的磷
2.29：将P换算为P
2O
5的系数
11/ 11。