黄酮类成分分析
黄酮类化合物
黄酮类化合物一概述黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的重要有机化合物。
黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多的色彩。
这类化合物多存在与高等植物及蕨类植物中。
苔藓类植物中部分存在黄酮类化合物，而藻类，微生物（如细菌）及其他海洋生物中没有发现黄酮类化合物的存在。
黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。
绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方起着重要的作用。
它是很多中药的活性成分，具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、抗癌等生物活性。
1.1黄酮类化合物的基本结构以前黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮（flavone见图1）结构类的化合物。
现在泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳基团相互连接而成的一系列化合物。
图1它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。
黄酮类化合物结构中常见的取代基团有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等。
1.2黄酮类化合物的生物合成黄酮的基本骨架是由三个丙二酰辅酶A和一个桂皮酰辅酶A生物合成而产生。
经同位素标记，大体合成过程如下图5所示：上述标记实验同时证明了间苯三酚不是黄酮类化合物的生物合成前体，而桂皮酸和对羟基桂皮酸是黄酮类化合物B环更适合的生物合成前体。
1.3黄酮类化合物的分类（见图2）：根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置（2-或3-）以及三碳链是否构成环状等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分类。
图2 黄酮类化合物的分类1.3.1黄酮类及黄酮醇类黄酮及黄酮醇类是数量最多、分布最广的黄酮类化合物。
木犀草素是最常见的黄酮类化合物，在植物界分布较广，具有抗菌作用。
清热解毒中药黄芩含有较多的黄酮类化合物，主要成分为黄芩苷和次黄芩苷等。
槲皮素及及其苷类则是植物界分布最广、最常见的黄酮化合物。
1.3.2二氢黄酮类及二氢黄酮醇类二氢黄酮和二氢黄酮醇类是黄酮和黄酮醇的2,3-双键饱和结构，绝大部分天然来源的二氢黄酮是2S构型，二氢黄酮醇是2R,3R构型。
天然药物化学黄酮类结构解析天然药化结构鉴定
黄酮类化合物在其他天然药物开发中的应用
05
CHAPTER
黄酮类化合物研究展望
01
02
黄酮类化合物药理活性的深入研究
针对黄酮类化合物在预防和治疗重大疾病方面的应用进行深入研究，为其临床转化提供科学依据。
深入探索黄酮类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗衰老等方面的药理活性，揭示其作用机制和靶点。
黄酮类化合物提取分离技术的改进与创新
优化黄酮类化合物的提取工艺，提高提取效率和纯度，降低生产成本。
开发新型的分离纯化技术，如超临界流体萃取、分子印迹技术等，实现对黄酮类化合物的快速、高效分离。
黄酮类化合物结构修饰与新药研发
对黄酮类化合物进行结构修饰，改善其药理活性、代谢特性及稳定性，提高疗效和降低副作用。
基于黄酮类化合物的新药研发，发掘具有自主知识产权的创新药物，满足临床治疗需求。
提取
黄酮类化合物的分离可通过柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法等技术实现。
分离
黄酮类化合物的提取与分离方法
02
CHAPTER
黄酮类化合物结构解析
黄酮类化合物的基本母核是由2-苯基色原酮组成，通常包括A、B、C三个环。
母核结构
黄酮类化合物分子中常有羟基、甲氧基、烃基等取代基，这些取代基的种类和位置对化合物的性质和生物活性有重要影响。
天然药物化学黄酮类结构解析与天然药化结构鉴定
目录
黄酮类化合物概述 黄酮类化合物结构解析 天然药化结构鉴定技术 黄酮类化合物在天然药物开发中的应用 黄酮类化合物研究展望
01
CHAPTER
黄酮类化合物概述
黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，通常具有多个酚羟基，并具有C6-C3-C6的基本碳架结构。
黄酮类成分分析分析
中药名称:葛根 成分: 葛根素
定性鉴别方法：取本品粉末0.8g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，
滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根对 照药材0.8g，同法制成对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制 成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502） 试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使 成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。
三、含量测定
中药制剂中含有黄酮类成分，可按要求测定总黄酮含量、黄酮类单
体含量或两者均须测定。含量测定方法主要有分光光度法、薄层色谱法、 高效液相色谱法等。
（一）、总黄酮含量测定
1.分光光度法一般用于总酮类成分的含量测定。大多数黄酮类化合 物在甲醇溶液中的紫外吸收光谱ห้องสมุดไป่ตู้两个主要吸收带组成。 带Ⅰ—出现在300~400nm之间的吸收带 带Ⅱ—出现在240~285nm之间的吸收带 含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经必要的提取纯化后，可直接 于最大吸收波长附近测定总黄酮的吸光度，对照品的选定应以最大吸收 波长与总黄酮的相近为原则，单体黄酮和总黄酮均可作为对照品，常以 芦丁等对照品计算总黄酮的含量。 《中国药典》2015版中淫羊藿总黄酮的含量测定（书P156页）
色谱法
1.薄层色谱法 硅胶--分离鉴别弱极性黄酮类化合物 • 遵循正相色谱原理，化合物极性越大，所选择的展开剂极性也 相应增大，同时根据化合物酸性强弱调节展开剂的酸碱性。常 用展开剂有苯-甲醇等。 聚酰胺--分离检识含游离酚羟基的黄酮及其苷 • 利用氢键吸附原理，由于聚酰胺和黄酮类化合物上酚羟基形成 氢键缔合，所以作用力较强，需要极性强的展开剂，而在展开 剂中大多含有醇、酸或水，或兼有两者。所以，分离检识游离 黄酮常用有机溶剂作为展开剂，如氯仿- 甲醇等；而分离检识黄 酮苷常用含水有机溶剂作为展开剂，如甲醇- 水等。 纤维素--分离黄酮类多糖苷混合物 • 展开系统：正丁醇-乙酸-水，5%~40%乙酸 展开好的色谱，常在紫外灯（365nm）下观察荧光斑点及其颜 色；亦可喷三氯化铝试剂，在日光灯或紫外灯下观察荧光是否加 强；也可氨熏，是否出现黄色、棕色荧光斑点等。
黄酮
黄酮定义：黄酮是一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物。
植物中由苯丙氨酸产生的肉桂酰辅酶A，经碳链延长环化生成的查耳酮，再衍生成的各种α苯基衍生物。
其中有些可用于心血管病的治疗。
结构：黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。
黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。
此外，它还常与糖结合成苷。
黄酮分类根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置（2-或3-位）以及三碳链是否构成环状等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分类：黄酮类(flavones)、黄酮醇(flavonol)、二氢黄酮类(flavonones)、二氢黄酮醇类(flavanonol)、花色素类(anthocyanidins)、黄烷-3，4二醇类(flavan-3,4-diols)、双苯吡酮类(xanthones)、查尔酮(chalcones)和双黄酮类(biflavonoids)等十五种。
另外，还有一些黄酮类化合物的结构很复杂，其中包括榕碱及异榕碱等生物碱型黄酮理化性质天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄同感类。
组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。
黄酮苷固体为无定形粉末，其余黄酮类化合物多为结晶性固体。
黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。
这是由于其母核内形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长，因而显现出颜色。
黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。
糖链越长则水溶度越大。
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。
酸性强弱因酚羟基数目、位置而异。
黄酮的功效黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素E 的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。
黄酮类成分分析PPT
波谱法主要包括紫外可见光谱法、红外光谱法、核磁共振波谱法等，通过测定黄酮类成分的吸收光谱或发射光谱， 确定其结构和含量。该方法具有高精度和高分辨率的特点，但操作较为复杂，需要专业人员操作。
04 黄酮类成分的生理活性与 功能
抗氧化活性
总结词
黄酮类成分具有显著的抗氧化活性，能够有效清除自由基，保护细胞免受氧化应激损伤。
抗氧化剂
黄酮类成分具有抗氧化作 用，可保护细胞免受自由 基损伤，延缓衰老。
日化产品
护肤品
黄酮类成分具有抗氧化、 抗炎和美白等作用，可用 于护肤品中，改善皮肤质 量。
洗发水、沐浴露
黄酮类成分具有抗菌、抗 炎和滋润等作用，可添加 到洗发水、沐浴露等日化 产品中。
口腔护理产品
黄酮类成分具有抗菌、抗 炎和抗龋齿等作用，可添 加到牙膏、漱口水等口腔 护理产品中。
要点二
详细描述
黄酮类化合物具有广谱的抗菌和抗病毒活性，对多种细菌 、真菌和病毒具有抑制作用。它们可以通过破坏病原体的 细胞膜、抑制酶的活性等机制发挥抗菌和抗病毒作用，为 治疗和预防感染性疾病提供新的药物候选。
05 黄酮类成分的应用
食品添加剂
01
抗氧化剂
黄酮类成分具有较好的抗氧化性 能，可以延缓食品氧化变质，延 长食品保质期。
深入研究黄酮类成分的生物合成途径，了解关键酶和调 控因子，为优化黄酮类成分的产量提供理论基础。
基因工程与代谢工程的应用
通过基因编辑、基因敲除或过表达等技术手段，调控黄 酮类成分的生物合成过程，提高其产量和品质。
分析方法的改进与创新
高效分离纯化技术的研发
改进现有的分离纯化方法，提高黄酮类成分的提取纯 度与效率，降低生产成本。
优化提取温度和时间
鉴别生药中黄酮类成分的常用方法
鉴别生药中黄酮类成分的常用方法近年来，随着人们对天然药物的关注度逐渐增加，生药中黄酮类成分作为一类重要的药用成分备受瞩目。
黄酮类化合物具有多种生物活性，对于各种疾病的治疗和预防具有重要的药用价值。
然而，鉴别生药中的黄酮类成分并非易事，因此需要采用一些常用方法来进行准确鉴别。
本文将从不同角度深入探讨鉴别生药中黄酮类成分的常用方法。
一、外观鉴别在鉴别生药中的黄酮类成分时，可以首先从外观出发进行初步鉴别。
由于黄酮类化合物具有独特的颜色和形状特征，因此可以通过肉眼观察和比较，对生药进行初步鉴别。
某些黄酮类化合物在阳光下呈现出明亮的黄色，而另一些则呈现出深红色或紫色。
通过外观鉴别，有助于初步判断生药中是否含有黄酮类成分。
二、化学鉴别化学鉴别是鉴别生药中黄酮类成分的重要方法之一。
通过化学方法可以对黄酮类化合物进行特定的反应和检测，从而确定其在生药中的含量和类型。
常用的化学鉴别方法包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、质谱法（MS）等。
这些方法可以对生药中的黄酮类成分进行精确的定量和定性分析，为进一步研究和利用提供可靠的数据支持。
三、生物学鉴别除了化学方法外，生物学鉴别也是鉴别生药中黄酮类成分的重要手段之一。
通过利用生物学特性来鉴别黄酮类成分的方法越来越受到重视，比如通过细胞生物学实验、动物实验等手段来研究黄酮类成分的生物学活性和药理效应。
通过生物学鉴别，可以更全面地认识黄酮类成分的药理作用和药效特点，为药物研发和临床应用提供理论依据。
总结与展望鉴别生药中的黄酮类成分是一项复杂而重要的工作，需要综合运用外观鉴别、化学鉴别和生物学鉴别等多种方法。
通过文章的阐述，相信读者已经初步了解了这一领域的基本知识和方法。
未来，随着科学技术的不断进步，相信会有更多更精准的鉴别方法被开发出来，为生药中黄酮类成分的鉴别和利用提供更多可能性。
我认为，鉴别生药中黄酮类成分既是一项重要的科学工作，也是一项富有挑战的任务。
无花果中黄酮类化学成分及抗氧化活性研究
分析检测无花果中黄酮类化学成分及抗氧化活性研究董丽梅，孔令熙，陈玳欣，蓝乐淇，吴梓怡，赵 彤*（广东生态工程职业学院，广东广州 510520）摘 要：采用多种色谱分离技术从无花果中分离得到4个黄酮类化合物，经波谱分析，分别鉴定为槲皮素、山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。
抗氧化活性测试表明，山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更强的ABTS自由基清除活性；槲皮素、山奈酚、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更好的DPPH自由基清除活性。
关键词：无花果；黄酮；化学成分；抗氧化活性Study on Chemical Constituents and Antioxidant Activities ofFlavonoids in FigDONG Limei, KONG Lingxi, CHEN Daixin, LAN Leqi, WU Ziyi, ZHAO Tong*(Guangdong Eco-Engineering Polytechnic, Guangzhou 510520, China) Abstract: Four flavonoids were isolated from figs by various chromatographic separation techniques. On the basis of spectral data, they were identified as quercetin, kaempferol, kaempferol-3-O-β-D-glucoside, quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside. Antioxidant activity test demonstrated that kaempferol, kaempferol-3-O-β-D-glucoside and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed stronger ABTS free radical scavenging activity than vitamin C. Quercetin, kaempferol and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed better DPPH free radical scavenging activity than vitamin C.Keywords: fig; flavonoid; chemical constituents; antioxidant activity无花果又称奶浆果、文仙果，为桑科榕属植物无花果（Ficus carica Linn.）的聚花果，富含膳食纤维、维生素和矿物质[1-2]，有润肺止咳、健脾开胃、润肠通便等功效[1,3]。
第二节黄酮类成分分析
中药的甲醇或乙醇粗提取物常显酱 红色，在进行盐酸-镁粉反应时，可观 察加盐酸后升起的泡沫颜色，如果泡 沫是红色则为正反应。
例： 清喉咽合剂 处方：黄芩、连翘、地黄、麦冬、玄参
【鉴别】 取本品5mL，加醋酸乙酯5mL，振 摇提取，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干， 残渣加甲醇2mL使溶解，加镁粉少量及盐酸 3~4滴，即显红色。（黄芩苷）
2. 与金属盐的配位反应
C3-OH、C4=O，C5-OH、C4=O,邻二-OH可与金属 离子络合显色。
常用下列试剂的醇溶液 硝酸铝 三氯化铝 二氯氧锆
Al3+、Zr4+能与大多数黄酮类药物产生黄绿 色荧光。
O
O O Zr O
Cl H2OO OOAl来自：银黄口服液 处方：金银花、黄芩
【鉴别】（1）取本品1mL，加5%硝酸钠溶液和10% 硝酸铝溶液各0.3mL，生成黄色沉淀；再加5%氢氧 化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。 （黄酮类） （2）取本品0.1mL，加水10mL，摇匀，取溶液2mL， 加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再加盐 酸1~2滴，黄色不褪。（黄酮类） 表示B环无邻二-OH
OH O HO
葛根素
OH O OO
CH3 CH2CH C CH3
O
O
OH O CH3
淫羊藿苷
O
2
O OH
O
1
（2）极弱碱性 1-O
可与强酸成盐而显特殊颜色
H2SO4或HCl
·· · ·O
烊盐
O
4. 显色反应
（1）盐酸-镁粉反应
个别显 紫 ~ 蓝
黄酮类
二氢黄酮类 黄酮醇类
HCl
Mg(Zn)
红
~ 紫红
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银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定
[含量测定]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理 论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离度 应大于1.5。 对照品溶液的制备（略） 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相 当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量， 超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，精密量取续滤液 10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶 液5ml，摇匀，置水浴中加热回流 30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μ m）滤过，取滤 液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ l，注入液相色谱 仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总 黄酮苷的含量。 总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量）×2.51
薄层扫描法 样品经适宜的溶剂提取得到供试液，经硅胶、聚酰胺或纤维素薄 层 色谱有效分离后，用薄层扫描仪直接进行含量测定。对黄酮类单 体
既可以进行紫外-可见光扫描，又可以进行荧光扫描。 高效液相色谱法 正相色谱(多用于没有羟基或乙酰化黄酮类成分化合物） 固定相为硅胶，流动相可套用薄层色谱条件，但极性要相对小一 点。 • 反相色谱（C18或C8） 固定相多为十八烷基硅烷键合相 流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水 检测器：紫外检测器或荧光检测器
理化性质：易溶于碱水；可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶；微溶于
丙酮、乙酸乙酯；难溶于冷水、苯、乙醚、三氯甲烷。 Mp:177~178℃ ;UV:259,266,299,359nm
常见分析方法：HPLC;TLCS;紫外分光光度法
中药名称：黄芩 成分：黄芩苷 定性鉴别方法：取本品粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇（3：1）的混合
理化特征：溶于甲醇，略溶于乙醇，微溶于水，三氯甲烷或乙醚中不
溶。Mp:187℃（分解）UV:254nm
常用分析方法：HPLC;TLCS;紫外分光光度法
中药名称：槐花
成分：芦丁
定性鉴别方法：取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，密塞，振摇10分
钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每 1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试 验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙 酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三 氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
中药名称:葛根 成分: 葛根素
定性鉴别方法：取本品粉末0.8g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，
滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根对 照药材0.8g，同法制成对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制 成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502） 试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使 成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。
理化性质：易溶于二甲基甲酰胺、吡啶，微溶于热冰乙酸、碳酸氢
钠和氢氧化钠等溶液，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，几乎不溶于水、乙 醚、苯、三氯甲烷。Mp:233℃ UV:242,272,310nm
常见分析方法：HPLC,TLCS
中药名称：淫羊藿 成分：淫羊藿苷 定性鉴别方法：取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，温浸30有黄酮类成分，可按要求测定总黄酮含量、黄酮类单
体含量或两者均须测定。含量测定方法主要有分光光度法、薄层色谱法、 高效液相色谱法等。
（一）、总黄酮含量测定
1.分光光度法一般用于总酮类成分的含量测定。大多数黄酮类化合 物在甲醇溶液中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。 带Ⅰ—出现在300~400nm之间的吸收带 带Ⅱ—出现在240~285nm之间的吸收带 含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经必要的提取纯化后，可直接 于最大吸收波长附近测定总黄酮的吸光度，对照品的选定应以最大吸收 波长与总黄酮的相近为原则，单体黄酮和总黄酮均可作为对照品，常以 芦丁等对照品计算总黄酮的含量。 《中国药典》2015版中淫羊藿总黄酮的含量测定（书P156页）
溶液30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法 制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对 照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述供试品溶 液、对照药材溶液各2μl及上述三种对照品溶液各1μl，分别点于同一 聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10：3：1：2）为展开 剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下 检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同的暗色斑点。
（2）三氯化铝—醋酸钾比色法
常用芦丁为对照品，采用三氯化铝—醋酸钾为显色剂，显色后在420nm波长处 测定黄酮类成分含量。 (p S:黄酮类化合物与三氯化铝—醋酸钾反应后最大吸收波长并不一定都 在420nm处，因此，最好用所含黄酮作对照品）
消咳喘糖浆中总黄酮含量测定-铝盐配位比色法 见书p157页
（二）、单体黄酮含量测定
理化性质：在60℃溶于二甲基酰胺及甲酰胺。略微溶于甲醇及热冰
醋酸，几乎不溶于水，丙酮、苯及三氯甲烷。而易溶于稀碱及吡啶。 Mp:258~262℃ UV:284nm
常见分析方法：HPLC;TLCS
小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取 2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加15%乙醇5ml使溶 解，加入已处理好的聚酰胺柱（30～60目，1g，内径为1cm，用水湿 法装柱）上，用5%乙醇40ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸去乙醇， 水液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干， 残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取银杏内酯A对照品、银 杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品及白果内酯对照品，加丙酮制成 每1ml各含银杏内酯A0.5mg、银杏内酯B0.5mg、银杏内酯C0.5mg、 白果内酯1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则 0502）试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一用4%醋酸钠 溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（10：5：5： 0.6）为展开剂，在15℃以下展开，取出，晾干，在醋酐蒸气中熏15 分钟，在140～160℃中加热30分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点。 理化性质：略溶于无水乙醇，易溶于沸乙醇，溶于冰醋酸、碱性水 溶液呈黄色，几乎不溶于水。Mp：314℃（分解） 常见分析方法：HPLC;TLCS;紫外分光光度法
酸碱性 酸性：与酚羟基的数目和位置有关 7,4’- 二羟基> 7或4’- 羟基> 一般酚羟基> 5-羟基 碱性：r-吡喃酮环上的1-位氧原子，可表现出微弱碱性 显色反应 还原反应（盐酸镁粉反应） 与金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐） 硼酸显色反应碱性试剂反应 五氯化锑反应 Gibb’s反应和Emerson反应 光谱特征 I带(300-400nm) →B环桂皮酰基 II带(240-285nm) →A环苯甲酰基
过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色 谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和〔含量测定〕淫羊藿苷项 下的对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯丁酮-甲酸-水（10：1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫 外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，再置紫外光灯 （365nm）下检视，显相同的橙红色荧光斑点。
+ 常见的黄酮类成分分析
中药名称 主要黄酮类成分 黄芩 槐米 葛根 陈皮 枳实 山楂 淫羊藿 射干 补骨脂
p158~p159
黄芩苷， 黄芩素，汉黄芩苷，汉黄芩素，千层纸素 芦丁，槲皮素 葛根素，大豆苷 橙皮苷，川陈皮素，新橙皮苷，橘皮素 橙皮苷，川陈皮素，新橙皮苷，5-邻-去甲基川陈皮素 槲皮素，金丝桃苷 淫羊藿苷，淫羊藿次苷，槲皮素 次野鸢尾黄素，野鸢尾苷 补骨脂查尔酮，异补骨脂查尔酮
2 .铝盐配位比色法
本法采用分光光度法测定中药中黄酮类成分，若供试液中其 他组分的吸收存在干扰，可进行比色测定。该法利用黄酮类 成分与铝盐发生配位反应，生成的配合物与背景最大吸收波 长差别较大，可消除背景（即阴性空白）的干扰，显著提高 含量测定的选择性。
（1）硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法
将中药通过适当方法制成供试液 加5%亚硝酸钠反应6min 10%硝酸铝反应6min 4%氢氧化钠反应15min 生成红色配合物后在500nm测定，常用芦丁作为对照品。 （ＰＳ：该法是基于邻二酚羟基的反应，并非黄酮类化合物的专属反应。） 垂盆子颗粒中总黄酮含量测定—铝盐配位比色法 （见书ｐ156页）
色谱法
1.薄层色谱法 硅胶--分离鉴别弱极性黄酮类化合物 • 遵循正相色谱原理，化合物极性越大，所选择的展开剂极性也 相应增大，同时根据化合物酸性强弱调节展开剂的酸碱性。常 用展开剂有苯-甲醇等。 聚酰胺--分离检识含游离酚羟基的黄酮及其苷 • 利用氢键吸附原理，由于聚酰胺和黄酮类化合物上酚羟基形成 氢键缔合，所以作用力较强，需要极性强的展开剂，而在展开 剂中大多含有醇、酸或水，或兼有两者。所以，分离检识游离 黄酮常用有机溶剂作为展开剂，如氯仿- 甲醇等；而分离检识黄 酮苷常用含水有机溶剂作为展开剂，如甲醇- 水等。 纤维素--分离黄酮类多糖苷混合物 • 展开系统：正丁醇-乙酸-水，5%~40%乙酸 展开好的色谱，常在紫外灯（365nm）下观察荧光斑点及其颜 色；亦可喷三氯化铝试剂，在日光灯或紫外灯下观察荧光是否加 强；也可氨熏，是否出现黄色、棕色荧光斑点等。