真菌感染的常规检验方法
真菌的常规检验法
真菌的常规检验法实验室检查：♦标本采集分离培养♦直接镜检生化反应♦染色镜检免疫学试验一、临床标本的采集♦1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。
2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。
♦3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。
4．脓汁及渗出物。
二、检验方法（一）标本直接检查法不染色标本检查染色标本检查（二）培养检查（三）鉴定①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。
②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等）③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。
④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。
微生物学检查步骤：取患部标本（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化→镜检（观察菌丝和孢子）直接镜检的意义①有诊断意义，如浅部真菌病等；②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等；③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
直接镜检的局限性：①阴性结果不能排除真菌感染；②有假阳性结果。
因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。
2. 染色标本检查♦（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。
♦（2）乳酸酚棉蓝染色♦（3）糖原染色：♦又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。
真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。
过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。
为真菌染色最常用的方法之一。
♦（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色♦（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。
隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。
♦（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。
（二）培养检查法♦本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。
①菌落性质：酵母菌还是霉菌；②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污染性真菌菌落不下沉，很少引起开裂。
真菌检测方法
分离培养：无菌采取病料接种马铃薯琼脂培养基中，置37℃恒温箱中培养24小时，长成绒毛样菌丝，未见其它细菌生长。
经48小时培养长成白色菌落。
72小时菌落呈纽扣状，由中心向外周逐渐变深，转变成灰白色、灰绿色。
取培养物镜检可见大量球形的分生孢子。
通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部真菌，包括皮肤癣菌、孢子丝菌、念珠菌、曲霉菌、隐球菌、组织胞浆菌等。
而霉菌多为细胞真菌的一种，也为深部感染真菌，包括烟曲菌、黄曲菌、黑曲菌、土曲菌等，常发生于免疫力低下的患者，引起全身播散性感然，影响预后。
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。
目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。
在日常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长,孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌,将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。
真菌检测鉴定方法有哪些
真菌检测鉴定方法有哪些真菌检测鉴定方法有哪些真菌，是一种具真核的、产孢的、无叶绿体的真核生物。
包含霉菌、酵母、蕈菌以及其他人类所熟知的菌菇类。
以下是店铺给大家带来真菌检测鉴定方法有哪些，以供参阅。
真菌检测鉴定方法1、直接鉴定法。
2、通过筛子检验。
3、比重检验法。
4、染色检验法。
5、洗涤检验法。
6、保湿萌芽检验。
7、分离培养检验。
真菌是细菌的一种吗真菌主要是酵母，霉菌和大型真菌三种，最常用的鉴定方法就是表形观察，霉菌和大型真菌可以通过菌丝的颜色，孢子的形态进行区分，辅以23srRNA就基本ok，酵母可以通过发酵代谢观察辅以23rRNA进行鉴定。
随着生活水平的逐渐提高，人们的卫生防病意识也在不断加强。
大多数人知道细菌可以导致疾病，并习惯用“有病菌”或“有细菌”来形容一个脏的环境或物品。
那么，真菌又是怎么回事，是细菌的一种吗?的确，真菌也很微小，也能使人生病，但它和细菌有着本质的区别。
我们知道，植物和动物都是由细胞组成的，细胞内都有细胞核。
而微生物中只有真菌具有真正的细胞核和完整的细胞器，故又称真核细胞型微生物;细菌仅有原始核结构，无核膜和核仁，细胞器很少，属于原核细胞型微生物;而病毒则没有细胞结构，属于原生微生物。
真菌在自然界中分布极广，有十万多种，其中能引起人或动物感染的仅占极少部分，约300种。
很多真菌对人类是有益的，如面粉发酵，做酱油、醋、酒和霉豆腐等都要用真菌来发酵。
工业上许多酶制剂、农业上的饲料发酵都离不开真菌。
许多真菌还可食用，如蘑菇、银耳、香菇、木耳等。
真菌还是医药事业中的宝贵资源，有的可以用于生产抗生素和维生素以及酶类;有的本身就可以入药用于医治疾病，如中药马勃、茯苓、冬虫夏草等。
真菌引起的疾病类型真菌还可引起动、植物和人类的多种疾病，在人类主要有三种类型：①真菌感染;②变-态反应性疾病;③中毒性疾玻真菌分类霉菌亦称“丝状菌”。
属真菌。
体呈丝状，丛生，可产生多种形式的孢子。
多腐生。
种类很多，常见的有根霉、毛霉、曲霉和青霉等。
检验真菌的方法
检验真菌的方法
1. 直接镜检法：将短柄棉签蘸取患部分泌物、皮屑、毛发等样本，涂于玻璃片上，用40倍至100倍的显微镜下观察，检测真菌的形态和数量。
2. 细胞学检查法：可采用细胞学方法检查骨髓、淋巴结等组织样本中是否存在真菌，包括涂片法、细胞学初筛法、细胞学制片法等。
3. 培养法：将样本接种于含有丰富营养成分的培养基上，利用真菌的生长特点判定是否存在真菌的培养。
4. 核酸检测法：查找真菌的DNA或RNA序列，并使用PCR 技术的手段拓展浓度，最后用电泳技术侦察出真菌的情况。
5. 基于免疫学的检测：包括诸如ELISA和荧光法等方法，主要检测真菌产生的免疫球蛋白或抗原，以用于检测真菌是否存在。
真菌感染检验
浅部感染真菌检验-皮肤癣菌
❖ （三）真菌检验
❖ 1.标本的采集、运送和保存
❖ 1）甲标本 采集标本前用75%乙醇彻底清洁病甲，以 减少培养时的细菌污染，提高镜检的阳性率。钝刀用 高压或者火焰灭菌，从甲的变色、萎缩或变脆部位、 健甲与病甲的交界处取材，保证一定量与一定深度标 本。甲标本建议取材后立刻进行真菌镜检及培养，甲 标本应尽量剪碎后接种。对于伴有甲沟炎患者的取材 ，应采用棉拭子，75%乙醇清洁局部后沾取损害分泌 物，每位患者至少应取两个拭子，放入无菌试管中以 备镜检和培养。
❖ 侵入表皮后，在皮肤角质层外2/3处生长、繁殖，引起一 种慢性、无症状或轻微症状的皮肤斑疹，呈灰白色、褐 色或淡黄色，上面附着细小糠皮样鳞屑，有时可融合成 片，似汗渍斑点，俗称汗斑即花斑癣（tinea versicolor）。皮损最常见于胸、背、臂的上半部皮脂 腺丰富部位。病程缓慢，多年不愈，对健康无碍，但影 响美观。油性皮肤易感，而且与遗传、免疫缺陷等因素 有关，诱发因素为高温多汗。近年大量研究显示，糠秕 马拉癣菌还可引起毛囊炎，可能为脂溢性皮炎的重要发 病原因之一。
浅部感染真菌检验-皮肤癣菌鉴定
❖ 1.毛癣菌属 在SDA（加CCG）上27+1℃培养，毛癣菌 属菌落生长速度慢到中等；质地光滑到毛状；表面呈 白色、黄色、米黄色或红紫色，背面呈苍白色、黄色 、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈多细胞、圆 柱状、棒状或香烟形，壁光滑，常缺乏。小分生孢子 呈单细胞、圆形、梨形或棒形，孤立或像葡萄状群生 。有时存在关节型孢子和厚膜孢子。
浅部感染真菌检验-皮肤癣菌
❖ （三）真菌检验
❖ 1.标本的采集、运送和保存
❖ 2）皮屑标本 采集标本前用75%乙醇清洁取材区域。 用高压或者火焰灭菌钝刀，从损害的边缘向外刮取或 用剪刀剪去疱顶。如果鳞屑量较少或婴幼儿患者，可 采用粘着透明胶带或粘着皮肤采样送检，将透明胶带 粘着面紧压于损害之上，然后剥下，将粘着面向下贴 在透明载玻片上送检。皮屑标本建议取材后立刻进行 真菌镜检及培养。
真菌感染的微生物学实验室检查方法
真菌感染的微生物学实验室检查方法对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位，完整的病史，包括职业、业余爱好和旅游史。
检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。
必要时再进行实验、血清学反应或动物接种等。
标本的采集用无菌操作收集适宜部位的标本，可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指（趾）甲屑及皮屑等，可疑深部真菌感染的病人应根据临床症状和体征选取、脑脊液或分泌物、排泄物及痰液等并及时检查，一般不超过1～2小时，以免变质污染。
真菌的直接镜检皮屑、指（趾）甲和毛发等致密而难以透明的标本应先用10%的KOH微加温处理，溶解角质层和细胞基质，然后进行镜检。
脓、痰或血标本可直接涂片镜检。
镜下观察是否有孢子、菌丝或假菌丝。
若怀疑新生隐球菌等有荚膜的真菌感染，根据所致疾病选取标本，经墨汁负染后镜检，见有芽生菌体外围绕着宽厚的荚膜即可做出诊断。
真菌的分离培养一般用于直接镜检不能确诊时。
病原性真菌培养用沙保弱培养基（pH5.6，不适宜生长）培养，为了防止细菌或腐生性真菌的污染，经常加入放线（菌）酮、青霉素、链霉素或其他抑制性抗生素。
如果是皮肤、毛发和甲屑等标本，需经70%乙醇或2%石炭酸浸泡2～3分钟杀死杂菌，再经无菌盐水洗净后接种于沙保弱培养基上，在25℃～28℃的条件下培养数日至数周，观察菌落特征。
可疑深部真菌感染的标本可接种于血平板、肉渣培养基或硫酸钠肉汤内，分别在室温和37℃培养数日至数周。
必要时可在玻片上做真菌小培养，能在光镜下观察真菌的形态和结构的特点及生长发育的全过程，便于鉴别。
阴道或口腔粘膜处标本可直接用棉拭子取材，在血平板上分离。
血液标本需事先增菌，脑脊液标本则取其沉淀物接种于血平板上，于37℃培养。
若疑为假丝酵母菌，可取菌落接种于0.5ml血清试管内，37℃1h后涂片，革兰染色后镜下见有假丝酵母菌细胞长出芽管即可初步鉴定为白假丝酵母菌。
血清学诊断可辅助检查深部真菌感染。
通常使用的方法是乳胶凝集和补体结合等试验。
真菌培养检查方法
真菌培养检查方法真菌培养检查是医院常用的检查方法，用于检测和鉴定真菌感染。
以下是真菌培养检查的步骤和注意事项：1. 采集标本：根据感染部位的不同，采集不同的标本。
例如，对于皮肤真菌感染，可以从病灶边缘刮取皮屑；对于深部真菌感染，可能需要采集血液、尿液等标本。
采集的标本应该尽快送往实验室进行培养，以免影响检查结果。
2. 培养基选择：根据不同的真菌种类，选择不同的培养基。
常用的培养基有沙保弱培养基、孟加拉红培养基等。
培养基的选择应该根据实验室的具体要求进行选择。
3. 接种：将采集的标本接种在培养基上，接种时要避免污染。
接种后将培养基放入恒温箱中进行培养。
4. 观察：在培养期间，需要定期观察培养基上是否有菌落生长。
一般情况下，真菌在培养基上生长需要几天到几周的时间。
如果发现有菌落生长，需要进行形态学鉴定和生化反应等试验，以确定真菌的种类。
5. 鉴定：通过形态学鉴定和生化反应等试验，可以确定真菌的种类。
有时还需要进行其他检查，如药敏试验等，以确定真菌对不同药物的敏感性。
6. 报告：鉴定完成后，医生会将结果报告给患者。
报告中包括真菌的种类、药敏试验结果等内容。
根据报告，医生可以制定相应的治疗方案。
注意事项：1. 在采集标本前，应该注意个人卫生，避免污染标本。
2. 培养期间，应该保持恒温箱的温度和湿度，以确保培养基上的真菌能够正常生长。
3. 在鉴定真菌时，应该注意观察菌落的形态和颜色等特征，以及进行生化反应等试验，以确保鉴定结果的准确性。
4. 对于深部真菌感染，需要进行多次检查，以排除假阳性的可能。
真菌检测方法
真菌检测方法真菌是一类微生物，广泛存在于自然界中，包括土壤、空气、水体等环境中。
在生活和生产中，真菌不仅对人类和动植物健康造成威胁，还会对食品、饮用水、药品等产品质量产生影响。
因此，对真菌的检测至关重要。
本文将介绍几种常见的真菌检测方法。
首先，传统的真菌检测方法之一是培养法。
这是一种常用的方法，通过将样品接种在含有营养物质的培养基上，利用真菌在培养基上生长繁殖的特性，观察和统计培养基上的真菌数量和种类。
这种方法简单易行，对于一些真菌种类的检测效果较好，但是需要较长的培养周期，并且对于一些难以培养的真菌种类可能无法进行检测。
其次，PCR法是一种利用聚合酶链式反应（PCR）技术进行真菌检测的方法。
这种方法可以通过扩增真菌DNA或RNA的特定片段，来检测样品中的真菌数量和种类。
PCR法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速准确地进行真菌检测，尤其适用于对样品中真菌种类进行快速筛查和鉴定。
另外，生物传感器技术也被广泛应用于真菌检测领域。
生物传感器是一种利用生物元件（如酶、抗体、细胞等）与传感器技术相结合的检测方法。
通过生物元件与目标真菌的特异性反应，可以实现对真菌的快速检测和定量分析。
生物传感器技术具有检测速度快、操作简便、灵敏度高等优点，对于一些需要快速检测的场合具有很大的应用潜力。
最后，近年来，基于光学技术的真菌检测方法也得到了广泛的关注和应用。
例如，荧光显微镜技术可以通过观察样品中真菌的荧光特性来进行检测；激光散射技术则可以通过检测样品中真菌颗粒的散射光信号来实现真菌的快速检测。
这些基于光学技术的检测方法具有操作简便、检测速度快的优点，对于真菌检测领域具有重要的应用价值。
综上所述，针对不同的真菌检测需求，可以选择合适的检测方法进行应用。
传统的培养法适用于一般真菌的检测；PCR法适用于快速准确的真菌鉴定；生物传感器技术和基于光学技术的检测方法则具有快速、灵敏的特点，适用于一些需要快速检测的场合。
在实际应用中，可以根据具体的检测需求和实际情况选择合适的真菌检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
真菌感染的常规检测方法
真菌感染的常规检测方法在生活中，真菌几乎无处不在。
现今发现的真菌种类已有7万多种这些真菌对人体有利有弊，其弊端就是导致人体疾病，损害两大系统。
一是皮肤系统，二是内脏系统。
内脏系统主要指的是肺以及其他重要脏器。
皮肤系统主要是皮肤会出现癣菌病，淋巴管感染等。
既然真菌感染对人体伤害大，那么我们怎样来对其进行检测呢？本文主要介绍真菌感染的监测方法。
1.标本的采集不同真菌感染的临床标本采集是不同的，对于一些人体浅部的真菌感染可以采用采集毛发、皮肤等方式，在采集完标本之后，利用75%的医用酒精进行消毒；而一些深部感染，如真菌性胃炎，则需要采集痰液、各种穿刺液或是活检组织，注意在深部感染样本采集中注意无菌性，提高样本采集的有效性和真实性，对于已经使用了一段时间的患者，其样本采集需要先停药一阵子再展开样本采集。
2.真菌检验方法1.真菌镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。
其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。
但由于阳性率较低，阴性结果也不能排除诊断。
直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。
2. 真菌培养真菌培养是实验室检查的重要环节，培养出致病真菌是进一步鉴定菌种的前提条件。
常规培养需要在28—30摄氏度下培养3—4周，一般培养选用沙氏培养基（SDA）或者马铃薯琼脂培养基（PDA）。
3. 分子生物学鉴定常用的分子生物学鉴定方法包括：真菌DNA？基组成（G+CMol%）、限制性片段多态性（RFLP）、随机扩增多态性DNA（RAPD）、Southern印迹、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、rDNA序列测定等。
4.生理学和生物化学法在纯培养上真菌生长比较快，可以使用生理、生化方法来鉴定菌种，多用于酵母菌的鉴定。
测定真菌的不同生长温度的温度试验也可用于鉴定。
对碳水化合物的利用能力是酵母菌鉴定的主要手段，目前已有商品化的API系统，也可用于丝状真菌的鉴定。
此外，微生物自动鉴定系统Vitek、autoSCAN-4、Biolog和MIS等自动鉴定系统，可以较满意地鉴定临床上常见的病原学酵母菌。
真菌感染的常规检验方法
真菌感染的常规检验方法真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应及免疫学试验等。
以直接镜检和分离培养最重要。
1标本采集不同真菌感染应采用不同的临床标本。
浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。
深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。
采集标本时应注意无菌操作。
采集标本后应及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。
标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。
2检查方法2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。
其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。
但是，除了少数真菌外，多数不能确定其种类。
由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进一步确定。
直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。
2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。
2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方法如下。
(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。
所有真菌均为革兰阳性。
(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌被染成蓝色。
该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。
(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆菌为红黄色，曲霉菌为绿色。
2.2 分离培养法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。
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真菌感染的常规检验方法
真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应
及免疫学试验等。
以直接镜检和分离培养最重要。
1标本采集
不同真菌感染应采用不同的临床标本。
浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、
痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。
深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴
道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。
采集标本时应注意无菌操作。
采集标本后应
及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。
标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。
2检查方法
2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。
其优点在于简便、
快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。
但是，除了少数真菌外，多数不能确定其
种类。
由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进
一步确定。
直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。
2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～
200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。
2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方
法如下。
(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。
所有真菌
均为革兰阳性。
(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌
被染成蓝色。
该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。
(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆
菌为红黄色，曲霉菌为绿色。
2.2 分离培养法
真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。
其培养方法有多种，根据需要选用最适合的方法。
2.2.1 培养基在不同的培养基上真菌菌落形态变化很大，一般以沙保弱(SDA)培养基为基
准描写菌落的形态。
常用的培养基有无选择性培养基(如沙保弱培养基、牛脑心浸液培养基和
血琼脂培养基)、选择性培养基(如放线菌酮－氯霉素琼脂)和鉴别培养基(如马铃薯葡萄糖琼脂、酵母浸膏琼脂、米粉琼脂)。
2.2.2 培养方法
(1)平皿培养法：培养基倾注于平皿，然后将皮屑、甲屑、毛发标本经70％乙醇浸泡2～
3 min以杀死杂菌，无菌盐水洗净后接种于沙保弱培养基上，置25～28℃培养数日至数周，
观察菌落特征；其他标本接种于血平板或沙保弱培养基上37℃培养。
此法的优点是便于分离
并观察菌落特征，但水分易蒸发。
(2)试管培养法：实验室中最常用的一种方法，一般用于菌种传代接种与保存。
在大口径试管中装入培养基，制成斜面。
接种方便、不易污染。
(3)小培养法：观察真菌结构特征及生长发育全过程的有效方法。
小培养法有多种多样，本节介绍玻片培养法：①取无菌“V”形玻棒(或浸泡乙醇，干后)放入无菌平皿内；②取无菌
载玻片(或浸泡乙醇，干后)放在玻棒上；③制备1cm2马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)于载玻片上；
④在琼脂块的每一侧用接种针接种待检菌。
2.3 真菌的鉴定
2.3.1 生化反应鉴定
(1)糖(醇)类发酵试验：检验真菌最常用的生化试验。
所用的糖有葡萄糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、密三糖、淀粉等；醇类有甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇等。
(2)同化碳源试验：检验真菌对糖类中的碳源利用能力的一种很有价值的试验。
主要用于鉴定酵母菌。
其原理是某些真菌在不含碳源而仅含氮源的合成固体培养基上不生长。
当培养
基中加入该菌能利用的糖类物质时，则该菌生长。
一般对双糖类发酵的真菌，都能同化或利
用糖类或碳源。
方法是含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45℃)混合，然后在培
养基上分别加糖或浸糖干燥滤纸片，置于25℃或37℃孵育24 h观察结果。
如能同化，则在
糖或含糖纸片周围有生长圈，否则无生长。
(3)同化氮源试验：与同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾，观察真菌对硝酸钾的利用情况。
多用于酵母菌的鉴定。
2.3.2 免疫学检查真菌感染的诊断，主要取决于病原学诊断。
但在某些情况不能获得病
原学证据，如急性组织胞浆菌病、曲霉型支气管炎等，需要依靠免疫学手段进行辅助诊断。
近年来产生了较多免疫学方法对深部感染的真菌进行检测，以作为荚膜组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌感染的辅助诊断。
但系统性感染患者常因免疫功能降低不出现抗体，而且许多真菌之
间抗原性有交叉反应，有的产生抗体后维护时间较长，正常人群中有一定比例的阳性率。
参考文献
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