苏丹红最新检测方法
食品中苏丹红的检测方法
2 薄层色谱法(TLC)
• 采用薄层色谱法分离样品中的苏丹红，主 要是利用样品溶液中苏丹红理化性质如吸 附力、分子极性等的差异，由于各组分受 固定相阻力与流动相推力的影响不同，因 而各组分在两相间的分配不同，从而使各 组分以不同流速流动，从而达到分离的目 的。
3 色谱－ 质谱联用法
•
质谱法比高效液相色谱法更灵敏，近年
• 将薄层色谱分离和分光光度法结合测 定了苏丹红Ⅰ含量［21］。该方法便 捷、可靠、经济实惠。
5 拉曼光谱法
• 根据苏丹红中 N=N 官能团产生的 拉曼信号，利用拉曼光谱技术检测了 苏丹红含量［22］。该方法无须对样 品进行特殊处理，可直接测量固体粉 末，隔瓶测定液体，快速方便。
பைடு நூலகம்
6 共振瑞利散射法
• 根据人血清白蛋白与苏丹红结合后 共振瑞得散( RLS) 的变化，建立了一 种新型的苏丹红检测方法———共振 瑞利散射法［23］。该方法成本低、 灵敏度高、可靠、简便、快速，可直 接测定水样中的苏丹红。
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食品中苏丹红的检测方法
检测食品中苏丹红的特点及其研究进展
苏丹红的简介
• 苏丹红是人工合成的亲脂性偶氮化合物，属工业染料，不溶于水，易溶于有 机溶剂，可作为化学合成着色剂应用于蜡、油彩、地板蜡等化工产品生产中; 但苏丹红却被作为食品添加剂而广泛应用。在食品中添加苏丹红的主要目的 是增色，苏丹红对光线的敏感性不强，食品中添加苏丹红后能长期保持鲜红。
红心鸭蛋
1，高效液相色谱法(HPLC)
• 高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上， 引入气相色谱理论和技术而发展起来的现代色谱 柱分离分析方法。。该方法以液体为流动相，具 有速度快、效率高、灵敏度高等特点。目前高效 液相色谱法检测苏丹红主要有欧洲委员会推荐方 法、国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布方法( 国标法) 和凝胶柱净化－ 高 效液相色谱法。
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析一、苏丹红(Sudan Red)苏丹红是一种常用的红色染料，被广泛应用于食品、化妆品、药品、指甲油等业界，能够赋予产品艳丽的色泽。
然而苏丹红也被认为是致癌物质之一。
为了避免食品安全问题，许多国家和地区禁止苏丹红的使用。
在分析检测方法方面，薄层层析技术是一种比较简单、快捷、经济的方法。
下面是针对苏丹红的薄层层析过程：试料：苏丹红试剂：正洁净丙酮、橄榄油(甘油)、硅胶G工具：薄层层析板、层析罐、玻璃棒、显色剂方法：1.将硅胶G加入根据需要加入橄榄油(甘油)加至湿润状态。
2.将硅胶G加至薄层层析板上。
3.将湿润硅胶G平均的铺置于薄层层析板上，待干燥。
4.取适量的苏丹红加入正洁净丙酮中，使其完全溶解（尽量不要加多）。
0.2克左右即可。
5.将Sudan Red加入到上一步得到的层析板中。
6.晾干后，将层析板塞于等温层析罐中，上面加入适量的正洁净丙酮，将罐盖好。
7.将等温层析罐放入直线扫描层析仪中，使其等温30-60分钟。
8.测定苏丹红的吸收峰，记录其波长和相对强度。
9.采用显色剂可更加准确的测定吸收峰的波长和相对强度，进而进行定量分析。
苏丹黄是一种荧光亮黄色的有机颜料，被广泛用于染料、涂料、食品、饮料等多个领域，亦为一种致癌物质。
因此，人们对其分析检测越来越重视。
下面是苏丹黄的薄层层析方法：试剂：苯酚，四氯化碳1.取得薄层层析板，并在上面用硅胶G均匀的抹上一层。
2.将苯酚和四氯化碳混合，其配比为1：1，得到的混合溶液为显色剂。
3.将苏丹黄与混合溶液按需要的含量混合，制成样品溶液。
4.将样品溶液放在层析板边缘上，慢慢靠近层析板中心。
5.用含四氯化碳小槽将薄层层析板放入液面中，控制好溶液高度。
6.让样品溶液慢慢上升，进行层析分离。
7.分离结束后，将层析板晾干。
8.将晾干的层析板放入紫外灯下进行检测，通过温和化学反应，苏丹黄将被氧化，产生出淡黄色的荧光。
9.将层析板放入显色剂中，用显色剂复过程进行检测，最后根据相对迁移率计算定量分析。
红辣椒粉中苏丹红Ⅰ的检测
A
4
u j A u A 4 r A A
r
eff
A
u c W
u A
A
4
W
4
u As
A s
As
4
V W Cs M AS
A=2349、As=2955、Cs=1.52ug/mL、 V=5mL、M=5.0000g代入上式得
W=1.208mg/kg
A
误差分析：
V W Cs M AS A
0.001 u j (M ) 0.00058( g ) 3
2 2 (M) (M) u u j u f (M) 0.00058( g )
有效自由度
eff
4 u C 4 4 4 u A s s uV 4 u M u A As Cs V A M A A M s Cs V
u c W 4 W
公式简化为
其中
A
j
u A 4
样品峰面积 序 号 1
样品
2
3
4
5
6
7381 2290 2229 2345 2465 2437 2316 2349 积
标准工作液峰面积
序 号
1
2
3
4
5
6
7
8
平 均
峰面 2931 2989 3005 2985 2907 2954 2981 2888 2955 积
样品中的苏丹红Ⅰ的含量：
已知：
苏丹红Ⅰ纯度95%±1%；液相色谱面积不确
薄层色谱法测定苏丹红
薄层色谱法测定苏丹红1.试剂和仪器苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液，乙醚，正己烷，0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，硅胶G，7.5cm*2.5cm玻璃板、毛细管、250mL广口试剂瓶、尺子和铅笔等。
2.苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液的配制（提前配制）分别称取苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ各0.5mg，用乙醚溶解后用正己烷定容至50mL，相当于100μg/mL的苏丹红。
3.展开剂的配制正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）4.薄层板的制备（至少提前一天准备）取7.5cm*2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液8mL，调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置于干燥器中备用。
5.点样取1块用上述方法制好的薄层板。
分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。
取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起始线上点苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液和混合液4个样点。
样点间距0.5-0.8cm。
如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行。
样点直径不应超过2mm。
6.展开用正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250mL广口瓶中进行展开。
点样一端应浸入展开剂0.5cm。
盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的，比较样点的R f值的大小。
7.数据处理计算公式：比移值：R f = R1/ R2R1：原点至样品斑点中心之间的距离，cmR2：原点至展开剂前沿的距离，cm相对比移值：R is=R f（i）/R f（s）R f（i）是试样至原点的距离，cmR f（s）是标样至原点的距离，cm数据结果记录表8.思考题（1）在一定的操作条件下为什么可利用R f值来鉴定化合物？（2）在混合物薄层谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？（3）展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？。
苏丹红检测方法
苏丹红检测方法检测方法 (中文)欧洲委员会健康与消费者保护综合委员会第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全第三部―物理化学危害物监督新方法声明:03/99主题:苏丹红检测方法的更正以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。
2 定义苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，一般不溶于水易溶于有机溶剂，胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。
3 方法要点上述着色剂经乙腈提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。
4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。
4.1 乙腈色谱纯4.2 水色谱级4.3 冰醋酸4.4 氯仿4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)4.12 标准溶液4.12.1 标准贮备液称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。
着色剂溶解和转移溶剂定容溶剂苏丹红1号乙腈乙腈苏丹红2号乙腈乙腈苏丹红3号氯仿乙腈苏丹红4号氯仿乙腈苏丹橙B 乙腈乙腈苏丹红7B 乙腈乙腈胭脂树橙氯仿氯仿 4.12.1 标准工作液取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容，再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。
苏丹红快速检测试剂盒使用说明
苏丹红快速检测试剂盒使用说明一、本方法适用于非食用色素苏丹红（1、2、3、4号）的现场快速检测。
二、样品处理：1、取约1克样品于试管中，加入2～5ml乙酸乙酯，振摇提取1分钟，静置5分钟，2、取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个+字线或点五个小点。
3、用四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许（毛细管尖端不多于0.5厘米容积距离）点在层析纸1、2、3、4号+字线上，另取1支毛细管沾取静置后已经染色的乙酸乙酯样品溶液（体积不限），将其点在层析纸5号+字线上。
（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米内。
三、测定：取一个约200ml的烧杯，加入约5ml展开剂，将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。
四、判断：在本实验条件下，如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。
五、说明：1、本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。
注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。
2、苏丹红对照液的点样量不要太多，否则会产生拖尾现象。
在用毛细管沾取对照液后，可在棉花球或一张废弃的层析纸上沾弃多余的溶液，使毛细管尖端留有不超过0.5厘米距离的溶液，将其一次性点到层析纸+字线上。
3、展开剂的使用应适量，液面高度应控制在斑点以下，展开过程中层析纸不能倾倒，每展一张层析纸最好更换一次展开剂。
4、环境温度会影响斑点的展开距离。
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苏丹红最新检测方法
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苏丹红检测套装：
固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)
液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）
苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。
然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。
我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。
因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。
目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。
由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。
国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。
但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。
因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。
方法的优势：
∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰
∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
∙方法简单、快速、节省溶剂
∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰
1. 样品处理：
1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）
1.1.1辣椒粉等粉状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品
将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
1.1.4番茄酱、甜辣酱样品
称取番茄酱1g，加入1 mL水，再加5 mL正己烷/丙酮（3/1，v/v），涡旋3分钟，超声10分钟，接着10000 r/min离心5分钟，取上层有机相3 mL，加无水硫酸钠0.5 g，涡旋0.5分钟，静置取上清液作为上样液。
1.2固相萃取柱净化：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL)
（1）活化：在HiCapt Sudan柱中依次加入3mL丙酮，2 mL正己烷活化。
（2）萃取：将待净化液加入HiCapt Sudan柱中（在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸），再用200μL正己烷淋洗样品管，一并加入SPE柱中。
流出液弃去。
（3）清洗：待上样液完全流出后，用2mL的3%异丙醇-正己烷溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。
（4）解吸：3mL丙酮解吸，收集解吸液。
（5）吹干及定容：解吸液50℃氮气吹干，加入1mL丙酮溶解并定容，用0.45μm有机滤膜过滤后HPLC 分析。
2.色谱条件：
色谱柱：HiSep C18-T(150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)；
流动相：流动相A：0.3%甲酸的水溶液：乙腈=85:15，
流动相B：0.3%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20；
流速：1mL/min
柱温：35℃
检测波长：520nm
进样量：10μL
注：40分钟后主要在冲洗柱子
3. 标准溶液液的配制
准确称取苏丹红I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ标准品各5 mg(按其标称含量折算)，用乙酸乙酯定容至10 mL，分别配成500 mg/L的标准储备液。
取储备液各200 L于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，得4种苏丹红的质量浓度均为10 mg/L的混合标准储备液。
将该溶液放置于4℃冰箱中避光保存。
4 结果
4.1 标准曲线与检出限
将10 mg/L的苏丹红储备液用提取液逐级稀释配制了0.05 - 5 mg/L苏丹红标准溶液。
按照选定的色谱条件测定，以峰面积对质量浓度进行线性回归。
由表1可见，四种苏丹红在其质量浓度为0.05 - 5 mg/L 的范围内具有较好的线性关系，相关系数的平方均大于0.999；方法的检出限分别为21 - 41 ng/g（辣椒粉）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %
4.2 回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的苏丹红标准溶液于辣椒粉样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为80.70.14%-107.88%（见表2）。
图5为添加苏丹红的辣椒粉样品的色谱图。
从该图可以看出，没有杂质干扰。
且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %。
按本方法测定了咸鸭蛋、腊肠、辣椒油的回收率和相对标准偏差，其回收率81.56%-110.41%（见表3）。
结果表明，本实验方法能够有效地去除食品中的基质干扰，具有简单、灵敏的特点，适用于食品中苏丹红的检测。