药物分析抗生素类药物的分析精品PPT课件
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抗生素类药物的分析PPT课件
谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应 与对照品溶液主峰的保留时间一致。
Ch.P（2005） HPLC、IR
（二）各种盐的鉴别
1. K+、Na+的反应 Na+ 焰色→鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌→↓黄 焰色→紫色 K+ + 0.1%四苯硼钠 + Ac-→↓白
青霉素钠 Ch.P（2005） 【鉴别】（3）本品显钠盐的火焰反 应（附录 Ⅲ）。
青霉素钾 Ch.P（2005） 【鉴别】（3）本品显钾盐的火焰 反应（附录 Ⅲ）。
2. 旋光性 3. 紫外吸收特性 （1）青霉素分子的母核无吸收，侧 链有吸收 （2）头孢菌素分子的母核有吸收
4. -内酰胺环的不稳定性 -内酰胺环不稳定，与酸、碱、
青霉素酶、羟胺及某些金属离子等作 用，易发生水解和分子重排，导致失 去抗菌活性
二、鉴别试验
（一）显色反应 1. 羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
2. 沉淀反应 （1）在稀盐酸中生成白色沉淀
在过量HCl或 有机溶剂中溶解
青霉素钠、青霉素钾 Ch.P（2000） 【鉴别】（2）取本品约0.1g，加水5ml
溶解后，加稀盐酸2滴，即生成白色 沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、 氯仿、乙醚或过量的盐酸中溶解。
（2）有机胺盐的特殊反应 普鲁卡因青霉素可发生重氮化—偶 合反应
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH
S
侧链 O
N CH2R1
COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性及溶解性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
Ch.P（2005） HPLC、IR
（二）各种盐的鉴别
1. K+、Na+的反应 Na+ 焰色→鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌→↓黄 焰色→紫色 K+ + 0.1%四苯硼钠 + Ac-→↓白
青霉素钠 Ch.P（2005） 【鉴别】（3）本品显钠盐的火焰反 应（附录 Ⅲ）。
青霉素钾 Ch.P（2005） 【鉴别】（3）本品显钾盐的火焰 反应（附录 Ⅲ）。
2. 旋光性 3. 紫外吸收特性 （1）青霉素分子的母核无吸收，侧 链有吸收 （2）头孢菌素分子的母核有吸收
4. -内酰胺环的不稳定性 -内酰胺环不稳定，与酸、碱、
青霉素酶、羟胺及某些金属离子等作 用，易发生水解和分子重排，导致失 去抗菌活性
二、鉴别试验
（一）显色反应 1. 羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
2. 沉淀反应 （1）在稀盐酸中生成白色沉淀
在过量HCl或 有机溶剂中溶解
青霉素钠、青霉素钾 Ch.P（2000） 【鉴别】（2）取本品约0.1g，加水5ml
溶解后，加稀盐酸2滴，即生成白色 沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、 氯仿、乙醚或过量的盐酸中溶解。
（2）有机胺盐的特殊反应 普鲁卡因青霉素可发生重氮化—偶 合反应
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH
S
侧链 O
N CH2R1
COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性及溶解性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
药物分析课件第十一章A抗生素类药物分析
药物分析课件第十一章a抗生 素类药物分析
目录
• 抗生素类药物概述 • 抗生素类药物分析方法 • 抗生素类药物的体内分析 • 抗生素类药物的体外分析 • 抗生素类药物分析的挑战与展望
01
抗生素类药物概述
抗生素的定义与分类
01
02
抗生素
分类
由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中 所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他 生活细胞发育功能的化学物质。
根据来源和化学结构，抗生素可以分为天然抗生素和半合成抗生素。 天然抗生素是由微生物产生的，如青霉素；半合成抗生素则是在天然 抗生素的基础上经过结构改造得到的，如氨苄西林。
抗生素的发现与发展
青霉素的发现
1928年，亚历山大·弗莱明发现了青霉素，这是人类历史上第 一个抗生素。青霉素的发现开启了抗生素治疗的新时代，挽 救了无数生命。
随着临床和药物研究的深入，对生物 样品中抗生素的分析将更加重视，需 要发展更为灵敏和特异的分析方法。
血药浓度法通常在给药后一定时间点采集血液样本，通过高效液相色谱法、气相色 谱法等分析方法测定血药浓度。
血药浓度法对于监测抗生素的疗效、安全性以及指导临床合理用药具有重要意义。
尿药浓度法
尿药浓度法是通过测定尿液中抗 生素的浓度，评估药物在体内的
代谢和排泄情况。
尿药浓度法通常在给药后一定时 间点采集尿液样本，通过高效液 相色谱法、气相色谱法等分析方
02
改变细胞膜通透性
某些抗生素如多黏菌素可以增 加细菌细胞膜的通透性，引起 细菌内部的重要物质如质粒、
核糖体等外泄死亡。
03
影响蛋白质合成
某些抗生素如大环内酯类、林 可霉素、克林霉素等作用于细 菌核糖体的50S亚基，阻碍蛋 白质合成的延长因子复合物合 成，使核糖体循环受阻，细菌
目录
• 抗生素类药物概述 • 抗生素类药物分析方法 • 抗生素类药物的体内分析 • 抗生素类药物的体外分析 • 抗生素类药物分析的挑战与展望
01
抗生素类药物概述
抗生素的定义与分类
01
02
抗生素
分类
由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中 所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他 生活细胞发育功能的化学物质。
根据来源和化学结构，抗生素可以分为天然抗生素和半合成抗生素。 天然抗生素是由微生物产生的，如青霉素；半合成抗生素则是在天然 抗生素的基础上经过结构改造得到的，如氨苄西林。
抗生素的发现与发展
青霉素的发现
1928年，亚历山大·弗莱明发现了青霉素，这是人类历史上第 一个抗生素。青霉素的发现开启了抗生素治疗的新时代，挽 救了无数生命。
随着临床和药物研究的深入，对生物 样品中抗生素的分析将更加重视，需 要发展更为灵敏和特异的分析方法。
血药浓度法通常在给药后一定时间点采集血液样本，通过高效液相色谱法、气相色 谱法等分析方法测定血药浓度。
血药浓度法对于监测抗生素的疗效、安全性以及指导临床合理用药具有重要意义。
尿药浓度法
尿药浓度法是通过测定尿液中抗 生素的浓度，评估药物在体内的
代谢和排泄情况。
尿药浓度法通常在给药后一定时 间点采集尿液样本，通过高效液 相色谱法、气相色谱法等分析方
02
改变细胞膜通透性
某些抗生素如多黏菌素可以增 加细菌细胞膜的通透性，引起 细菌内部的重要物质如质粒、
核糖体等外泄死亡。
03
影响蛋白质合成
某些抗生素如大环内酯类、林 可霉素、克林霉素等作用于细 菌核糖体的50S亚基，阻碍蛋 白质合成的延长因子复合物合 成，使核糖体循环受阻，细菌
药物分析第10章抗生素类药物的分析PPT课件
抑制蛋白质合成
如大环内酯类和林可霉素类通 过抑制细菌蛋白质合成的起始 阶段，阻断核糖体形成，导致 细菌死亡。
抑制核酸合成
如喹诺酮类通过抑制DNA回旋 酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性，干 扰DNA复制和转录，导致细菌
死亡。
抗生素的耐药性
产生钝化酶
某些细菌可以产生钝化酶，使抗生素 失活或降低其活性。
改变药物作用靶位
限度要求
根据不同抗生素类药物的特点， 制定相应的杂质限度要求，确保
药物的质量和安全性。
抗生素类药物的稳定性考察
影响因素
影响抗生素类药物稳定性的因素 包括温度、湿度、光线、氧气、 金属离子等，这些因素可能导致
药物降解或变质。
考察方法
通过加速试验、长期储存试验、影 响因素试验等方法考察抗生素类药 物的稳定性，以确定药物的保存和 使用条件。
质量控制
生物效价测定是抗生素类药物质量控制的重要环节，需要 严格控制实验条件、操作规范和结果判断标准等，以确保 测定结果的准确性和可靠性。
05
抗生素类药物的合理使 用与监管
抗生素类药物的临床应用
抗生素在临床上的应用广泛，主要用 于治疗和预防细菌感染。常见的抗生 素种类包括青霉素类、头孢菌素类、 氨基糖苷类、四环素类等。
色谱法主要包括高效液相色谱 法、气相色谱法和薄层色谱法 等。
免疫分析法
免疫分析法是利用抗原和抗体之间的 特异性结合反应，对抗生素进行定性 和定量分析的方法。
免疫分析法主要应用于抗生素残留检 测和生物样品中抗生素含量的测定等 方面。
免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、 操作简便等优点，但需要制备针对不 同抗生素的抗体。
微生物检定法是一种经典的抗生 素分析方法，通过微生物的生长 抑制或杀灭实验，测定抗生素的
药物分析课件第十一章B抗生素类药物分析
化学分析法
化学分析法是利用抗生素的化学性质进行分析的方法，主要包括光谱法和色谱法。
光谱法通过测定抗生素分子对光的吸收、发射或散射等性质来进行分析，具有较高 的灵敏度。
色谱法利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离和检测，具有 分离效果好、灵敏度高等优点。
色谱法
色谱法是一种常用的抗生素类药物分 析方法，主要包括高效液相色谱法和 气相色谱法。
03
新型抗生素的合成与改造
通过合成与改造现有抗生素的结构，可以开发出具有新作用机制和抗菌
谱的新型抗生素。科研人员正在利用化学和生物技术手段进行抗生素的
优化和改造。
抗生素耐药性的研究进展
耐药性机制研究
为了解决抗生素耐药性问题，科研人员正在深入研究细菌 的耐药性机制，包括细菌对抗生素的抗药性基因、抗药性 蛋白等。
气相色谱法主要用于挥发性抗生素的 测定，具有分离效果好、灵敏度高、 分析速度快等优点。
高效液相色谱法具有分离效果好、灵 敏度高、可同时测定多种抗生素等优 点，是抗生素类药物分析中应用最广 泛的方法之一。
免疫分析法
免疫分析法是利用免疫学原理进 行抗生素类药物分析的方法，主 要包括放射免疫分析法和酶联免
抗生素类药物的监管政策与措施
药品审批与注册管理
01
政府应加强对新药审批和注册的管理，确保新药的安全性和有
效性。
药品质量监管
02
对药品生产、流通和使用等环节进行全面监管，确保药品质量
符合标准。
处方药与非处方药分类管理
03
通过处方药和非处方药的分类管理，规范医生处方行为，减少
抗生素滥用。
抗生素类药物的滥用与对策
化学检测法
利用抗生素的化学特性， 通过色谱法、光谱法等手 段进行定量和定性分析。
抗生素类药物分析—抗生素类药物概述(药物分析课件)
（三）含量测定或效价测定
1.微生物检定法
以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的一种方法。
优点
1、灵敏度高、需用量小、测定结果直观 2、测定原理与临床一致，适用范围广 3、同一类型的抗生素无需分离，一次测定总效价
缺点
1、操作繁琐 2、培养时间长 3、测定误差大
2.理化方法
适用于提纯的以及化学结构已确定的抗生素
（一）鉴别试验
1.化学方法 利用某些官能团的特性 利用适当的试液与其反应显色 2.物理化学方法 UV、IR、TLC、GC、HPLC等 3.生物学方法 特异的酶反应或其他反应
（二）杂质检查
1.影响产品稳定性的指标 水分、酸碱度、干燥失重 2.控制有机、无机杂质的指标 溶液的澄清度与颜色、重金属、
残留溶剂、炽灼残渣
优点 缺点
1. 操作简单、省时、方法准确 2. 专属性 1. 不一定代表生物效价
2. 易受杂质干扰
3.抗生素活性表示方法
• 抗生素的活性以效价单位表示：每ml或每mg中含有某种抗生素的有效 成分的多少;用单位（u）或微克（ug）表示。
• 如：1mg青霉素钠定为1670单位；1mg硫酸卡那霉素定为670单位。 • 1mg青霉素钾单位（u）=1598u/mg
第十四章 抗生素类药物分析
第一节 概述
抗生素的定义 在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）
的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。
抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物， 对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。
一、抗生素类药物的特点
1.化学纯度低 同系物多：结构相似、分子组成相差若干个
三、抗生素的分类（按结构与性质）
β–内酰胺类
药物分析抗生素类药物分析ppt课件
➢空白实验 ➢因样品中杂质会耗费碘，故应作空白
实验
空白实验与经典空白实验不同： 参与样品，不加碱，其他试剂〔醋酸 盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠〕都加
➢实验条件：〔I2氧化〕
➢弱酸性〔pH4.5〕
➢ 碱↑ I2 → IO3- + I-
➢
酸↑ 某些药物与碘生成复盐沉
淀✓温度〔24～26℃〕
✓ 温度＞38 ℃时未水 解的供试品亦耗费碘
头孢他啶中聚合物测定
色谱条件与系统适用性实验 用葡聚糖凝胶G-10〔40～ 120 m〕为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.5cm，床体积 50～60ml；流动相A为含3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸 盐缓冲液〔取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加 水1000ml使溶解，调理pH至7.0〕，流动相B为0.01% 十二烷基硫酸钠溶液；流速为每分钟1ml；检测波长为 254nm。以流动相A为流动相，用1mg/ml蓝色葡聚糖 2000溶液进样200 l进展测定，实际板数应不低于900， 拖尾因子在0.75～1.5，对照品溶液以流动相B为流动相， 反复进样200 l，峰面积值的相对规范差应小于5.0%
4. 检查 TLC、HPLC法 杂质吸收度〔降解产物颜色较深〕
5.含量 ChP、USP： HPLC法 JP： 比色法
五、高分子杂质的检查
高分子杂质
内源性：药物本身聚合物 来源于消费过程、储存过程、运用不当
外源性：蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物 来源于发酵过程
高分子杂质控制方法 凝胶色谱法：葡聚糖凝胶 Sephadex G10
第十一章 抗生素类药物的分析
一、概述
1.抗生素〔antibiotics〕：
在低微浓度下即可对某些生物〔病原
《药物分析》第14章：抗生素类药物的分析PPT课件
质量标准的更新
随着科学技术的发展和临床需求的改 变，抗生素类药物的质量标准也应不 断更新和完善，以适应新的发展要求 。
谢谢
THANKS
高效液相色谱-质谱联用技术能够快速、准确地分离和鉴定抗生素 类药物，适用于复杂基质中痕量成分的检测。
表面增强拉曼光谱技术
表面增强拉曼光谱技术能够提高拉曼散射的信号强度，适用于抗生 素类药物的快速检测和鉴别。
纳米材料技术
纳米材料技术能够提高检测的灵敏度和选择性，可用于抗生素类药 物的痕量分析。
未来发展趋势与展望
03 抗生素类药物分析的挑战与展望
CHAPTER
分析方法的局限性
抗生素类药物种类繁 多，结构复杂，分析 方法难以统一。
抗生素类药物的痕量 分析要求高，对检测 设备的灵敏度和选择 性要求高。
抗生素类药物在体内 代谢过程复杂，给药 物成分的分离和鉴定 带来困难。
新兴分析技术的应用
色谱-质谱联用技术
高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种分离和分析复杂化合物的方法，具有 高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点。在抗生素分析中 ，高效液相色谱法可用于测定抗生素的含量、有关物质和降 解产物等。
高效液相色谱法在抗生素分析中应用广泛，可同时分离多种 抗生素，操作简便，分析速度快，为抗生素的质量控制和研 发提供了有力支持。
02
抗生素主要分为以下几类：β-内酰 胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、 四环素类、氯霉素类、糖肽类、林 可胺类和喹诺酮类等。
抗生素的发现与发展
1928年，亚历山大·弗莱明发现 了青霉素，开启了抗生素的开 端。
随后，链霉素、四环素、氯霉 素等抗生素相继被发现并用于 临床治疗。
随着抗生素的广泛应用，也出 现了抗生素耐药性问题，促使 人们不断研发新型抗生素。
随着科学技术的发展和临床需求的改 变，抗生素类药物的质量标准也应不 断更新和完善，以适应新的发展要求 。
谢谢
THANKS
高效液相色谱-质谱联用技术能够快速、准确地分离和鉴定抗生素 类药物，适用于复杂基质中痕量成分的检测。
表面增强拉曼光谱技术
表面增强拉曼光谱技术能够提高拉曼散射的信号强度，适用于抗生 素类药物的快速检测和鉴别。
纳米材料技术
纳米材料技术能够提高检测的灵敏度和选择性，可用于抗生素类药 物的痕量分析。
未来发展趋势与展望
03 抗生素类药物分析的挑战与展望
CHAPTER
分析方法的局限性
抗生素类药物种类繁 多，结构复杂，分析 方法难以统一。
抗生素类药物的痕量 分析要求高，对检测 设备的灵敏度和选择 性要求高。
抗生素类药物在体内 代谢过程复杂，给药 物成分的分离和鉴定 带来困难。
新兴分析技术的应用
色谱-质谱联用技术
高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种分离和分析复杂化合物的方法，具有 高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点。在抗生素分析中 ，高效液相色谱法可用于测定抗生素的含量、有关物质和降 解产物等。
高效液相色谱法在抗生素分析中应用广泛，可同时分离多种 抗生素，操作简便，分析速度快，为抗生素的质量控制和研 发提供了有力支持。
02
抗生素主要分为以下几类：β-内酰 胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、 四环素类、氯霉素类、糖肽类、林 可胺类和喹诺酮类等。
抗生素的发现与发展
1928年，亚历山大·弗莱明发现 了青霉素，开启了抗生素的开 端。
随后，链霉素、四环素、氯霉 素等抗生素相继被发现并用于 临床治疗。
随着抗生素的广泛应用，也出 现了抗生素耐药性问题，促使 人们不断研发新型抗生素。
药物分析课件第十一章B抗生素类药物分析
N
CH3
H
COCH3
麦芽酚反应
链分子霉 重排 素 O H 链 霉 糖 链霉素特征反应 （四）
紫 红色 FH +e3麦 芽 酚
麦芽酚
紫红
坂口反应
链 霉 O 素 H 链 霉 次 胍 溴 酸 橙钠 8羟 基 喹 啉
链霉胍特有反应
（或α-萘酚）
OH
OH
8-羟基喹啉
N
（五）
α O 缓 冲 液N H H 滴O N 定 g 2 O V 样 总
样
pH4.6
品
醋酸盐缓冲液 pH4.6
Hg (NO3)2
滴定
V空(降)
以未经水解的样品作空白测定
3、讨论
（1）水解必须完全 （2）汞盐滴定液用EDTA标定
（3）空白试验 消除已降解产物干扰 （4）优点 不需标准品
（四） 稳定性 链霉素 pH5～7.5 庆大霉素 pH2～12
稳定
HO
H2N C NH NH
NH
NH C NH2 O
OO
O OH
OH CHONH
OH
CH3
CH3
CH2OH OH
OH
坂口反应
N-甲基葡萄 糖胺反应
麦芽酚反应
鉴别
二、 （一） 茚三酮反应
羟基胺结构
庆链大霉霉素 素 茚 △三 酮 蓝 紫 色
剩余
反应分两步进行：
水解反应(按化学计算量进行)
氧化-还原反应(无固定的量关系，受温度、PH值和时间 等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对 照测定)
第二步
RCOHN O
S N
CH3
CH3 COOH
NaOH
第一步
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
对照品溶液的制备：取头孢他啶对照品适量，精 密称定，加水制成每1ml中含头孢他啶100g的 溶液，摇匀
测定法 取本品适量，精密称定，加水制成每1ml 中约含头孢他啶20mg的溶液，立即进样200l， 以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图； 另取对照品溶液200l注入液相色谱仪，以流 动相B为流动相，记录色谱图，按外标法计算， 本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得过 0.3%
0 0
峰高(mAU) 2.401
11.919 13.954
2 3
4 56 10 20 30
时间(min)
有关物质
取本品适量，精密称定，加流动相制成每1ml 中约含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；精密 量取适量，加流动相制成每1ml中约含6g的溶 液，作为对照溶液。取对照溶液20l注入液相 色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高约为 记录仪满量程的10%，再取供试品溶液和对照 品溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色 谱图至主峰保留时间的2.5倍，供试品溶液如显 杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对 照溶液主峰的面积
1.化学结构：
**
**
*
青霉素类：6-APA为母核 头孢菌素类：7-ACA为母核
2. 主要理化性质： 1）酸性（羧基）：
pKa 2.5-2.8 酸性较强 与碱金属成盐后水溶性好 2） UV（共轭）： 青霉素类：苯环取代基 头孢菌素类：母核有共轭结构
3）旋光性： 有多个手性碳
4）稳定性（内酰胺）：
一、概述
1.抗生素（antibiotics）：
在低微浓度下即可对某些生物 （病原微生物）
2.分类
β–内酰胺类 氨基糖苷类 四环素类 大环内酯类 多烯大环类 多肽类
3.来源：
生物合成（发酵） 化学合成或半合成
4.抗生素的特点： 化学纯度较低
活性组分易发生变异 稳定性差
生产工艺复杂 发酵过程不易控 制易受污染
异构体
取本品适量，配制成每 1ml中约含0.25mg的甲 醇-流动相(11)的溶液， 取20μl注入液相色谱仪， 记录色谱图。B异构体 峰的相对保留时间约为 0.85，A异构体峰的相 对保留时间为1.0。供 试品色谱图中A异构体 峰的面积与A、B异构 体峰的面积和之比应为 0.48～0.55。
60 40 1 20
✓反应时间：（ 20分 钟）
20分钟后，耗碘量随 时间的变化较小
➢特点
✓灵敏度高：样品 : 碘 = 1 : 8
✓反应条件、实验操作要求高
1份含量
干燥条件较稳定，溶液不稳定
青霉素
氧化剂、酸、碱 酶、金属离子、Δ
降解、失效
3. 鉴别
1）羟肟酸铁反应：
β–内酰胺类 NH2OH·HC羟l 肟酸
NaOH
Fe3+显色
H+
2）茚三酮反应
呈
茚三酮
α-氨基 Δ
蓝紫色
色 反
3）双缩脲反应
应
β–内酰胺类 碱性酒石酸铜 紫色
4）光谱法（UV、NMR）
5）色谱法（HPLC、TLC）
头孢他啶中聚合物测定 色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G-10（40～
120m）为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.5cm，床体积 50～60ml；流动相A为含3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸 盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加 水1000ml使溶解，调节pH至7.0），流动相B为0.01% 十二烷基硫酸钠溶液；流速为每分钟1ml；检测波长为 254nm。以流动相A为流动相，用1mg/ml蓝色葡聚糖 2000溶液进样200l进行测定，理论板数应不低于900， 拖尾因子在0.75～1.5，对照品溶液以流动相B为流动相， 重复进样200l，峰面积值的相对标准差应小于5.0%
➢空白试验 因样品中杂质会消耗碘，故应作空白 试验
空白试验与经典空白试验不同： 加入样品，不碱，其余试剂（醋酸 盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都加
➢试验条件：（I2氧化） ✓弱酸性（pH4.5） 碱↑ I2 → IO3- + I酸↑ 某些药物与碘生成复盐沉淀
✓温度（24～26℃）
温度＞38 ℃时未水解 的供试品亦消耗碘
USP(24) 25mg/ml 5µl 硅胶 醋酸乙酯-水-乙腈-冰 HAc(48:18:14:14)；短波长UV光检出
BP(1999) 0.4%(W/V) 1µl 硅烷化硅胶HF254 15.4% NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)；254nm检出
4.特殊杂质检查
聚合物、有关物质、异构体等
5.抗生素质量分析
采用生物学法与物理化学法 鉴别：理化方法、微生物法 检查：水分、pH值、异常毒性、热原、细菌
内毒素、降压物质等 含量/效价测定：
微生物法 ： 与临床疗效吻合,灵敏度高；但 操作复杂费时 理化方法：准确度与专属性较高, 且操作简 便；但与临床疗效有偏差
二、 β–内酰胺类
包括青霉素类和头孢菌素类
5.含量测定
1）碘量法（ChP2000） ➢原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反 应，但其碱性降解产物可消耗碘
青霉素族 NaOH 头孢菌素族 水解
I2+2Na2S2O3 剩余
定量过量
4I2 H+
8I-
2NaI + Na2S4O6
➢ 反应分两步进行： ✓ 水解反应 (按化学计算量进行)
✓ 氧化-还原反应 (无定量关系，受温度、 pH值和时间等因素影响，应严格控制反应 条件并采用标准品平行对照测定)
头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查
色谱条件与系统适用性试验：测定头孢呋 辛酯的HPLC系统为ODS分析柱；0.2mol/L 磷酸二氢铵-甲醇（62:38）׃为流动相，流 速1ml/min；检测波长278 nm。要求头孢呋 辛酯A，B异构体之间，头孢呋辛酯A异构 体与头孢呋辛酯△2-异构体之间的分离度应 大于1.5；理论板数按头孢呋辛酯A异构体 峰计算，应不低于1500
头孢利定的NMR鉴别法(JP14)
取本品50mg溶于0.5ml重水中，测定NMR 光谱时，应显示
δ3.8 附近 δ6.9～7.5
δ7.9～9.0
单峰信号 多重峰信号 多重峰信号
强度比 2 ： 3
：5
头孢氨苄鉴别的TLC条件
ChP(2000) 5mg/ml 2µl 硅胶G 0.1mol/L枸橼酸液0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)；0.1%茚三酮 溶液显色