9饲料用脂肪酶制剂企业标准-北京中科金澜生物技术研究所

X42Q饲料用酶制剂 脂肪酶制剂北京中科金澜生物技术研究所 发布本标准以NYT722-2003《饲料用酶制剂通则》及GB/T23535-2009《脂肪酶制剂》为基础制定 本标准由北京中科金澜生物技术研究所提出并起草。

本标准主要起草人：张晓华、付文友、陈春娟。

本标准于2012年月5月首次发布。

饲料用酶制剂脂肪酶制剂1 范围本标准规定了饲料用酶制剂脂肪酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存、保质期。

本标准适用于以玉米淀粉等为培养基，经黑曲霉菌深层发酵培养提取制成的饲料用酶制剂脂肪酶制剂。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 601-2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备GB/T 4789.3-2010 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定GB/T 6435-1986 饲料水分的测定方法GB 10648 饲料标签GB/T 13091 -1991 饲料中沙门氏菌的检验方法GB/T 13079 -1999 饲料中总砷的测定方法GB/T 13080 -1991 饲料中总铅的测定方法GB/T 13082 -1991 饲料中总镉的测定方法GB/T 17480 -1998 饲料中黄曲霉毒素B1的测定方法 酶联免疫吸附法QB/T 1803-1993 工业酶制剂通用试验方法GB/T 23535-2009 脂肪酶制剂NYT722-2003 《饲料用酶制剂通则》3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

3.1酶活力单位脂肪酶活力以脂肪酶活力单位表示，定义为1g固体酶粉（或1mL液体酶）在一定温度pH 条件下，1min水解底物产生1umol的可滴定的脂肪酸，即为1活力单位，以u/g(u/ml)表示4 要求4.1 感官要求固体剂型：白色至黄褐色粉末或颗粒，无结块、无潮解现象。

无异味。

有特殊发酵气味。

液体剂型：浅黄色至棕褐色液体，允许有少量的凝聚物。

无异味。

有特殊发酵气味。

4.2 理化指标产品理化指标应符合表1的规定。

表1 理化指标项 目 液体剂型 固体剂型酶活力a u/mL （ u/g ） ≥ 10000pH值 5.8～6.8容重，g/mL ≤ 1.15～1.25干燥失重b/% ≤ 8.0注：a酶活力可根据客户需求而定。

b不适用于颗粒产品4.3 微生物指标产品微生物指标应符合表2的规定。

表2 卫生指标项 目 指 标砷（以As计），mg/kg ≤ 3.0铅（以Pb计），mg/kg ≤ 10.0镉（以Cd计），mg/kg ≤ 0.5大肠菌群，MPN/100g ≤ 3000黄曲霉毒素B1，μg/kg ≤ 10沙门氏菌 不得检出注：若试样是液体剂型。

砷、铅、镉的计算结果已毫克每升（mg/L）表示，大肠菌群的计算结果以每100毫升（个/100mL）表示，黄曲霉毒素B1的计算结果以微克每升（ug/L）表示。

指标值与表2相同。

5 试验方法5.1 感官要求目视、鼻嗅。

5.2 理化指标5.2.1 酶活力5.2.1.1原理脂肪酶在一定条件下，能使甘油三脂水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯和甘油，所释放的脂肪酸可用标准碱溶液进行中和滴定，用pH计或酚酞指示液指示反应终点，根据消耗的碱量，计算其酶活力。

反应式为：ORCOOH+NaOH RCOONa+H2注1、 酯酶的存在会使检测的脂肪酶活力增加。

蛋白酶的存在会降解脂肪酶，从而使检测到的脂肪酶活力减少。

注2、 洗涤剂的存在会严重影响本方法。

依不同洗涤剂的类型和浓度不同，这种影响变现为从完全抑制到激活。

注3、 酶会附着在塑料上，因此应用玻璃器皿溶解稀释，同时也应用玻璃器皿滴定。

在溶液的转移中如果时间很短且选择适当的塑料材质，可以使用塑料移液枪头。

5.2.1.2 仪器和设备——分光光度计——恒温水浴:精度±0.2℃——自动移液器——高速匀浆机——pH计：精度为0.01pH单位——电磁搅拌器——微量滴定管：10mL，分刻度≤0.05mL5.2.1.3 试剂和溶液——聚乙烯醇（PVA）：聚合度1750±50——橄榄油：试验试剂——95%（体积分数）乙醇——底物溶液：称取聚乙烯醇（PVA）40g（精确至0.1g），加水800mL，在沸水浴中加热，搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至1000mL。

用干净的双层纱布过滤，取滤液备用。

量取上述滤液150mL，加橄榄油50mL，用高速匀浆机处理6分钟（分两次处理，每次间隔5分钟，每次处理3分钟），即得乳白色PVA乳化液。

该溶液现用现配。

——磷酸缓冲溶液（pH7.5）:分别称取磷酸二氢钾1.96g和十二水磷酸氢二钠39.62g。

用水溶解并定容到500mL。

如需要，调节溶液的pH到7.5±0.05——氢氧化钠标准溶液【c(NaOH)=0.05mol/L】：按GB/T601配制与标定。

使用时准确稀释10倍。

——酚酞指示液（10g/Ml）按GB/T603配制。

5.2.1.2分析步骤5.2.1.2.1待测酶液的制备——称取酶样品1g-2g精确至0.0002g,用磷酸缓冲液溶解并稀释。

如果样品为粉末，可用少量磷酸缓冲液溶解后用玻璃棒捣研，然后将上清夜小心倒入容量瓶中。

若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀，转入高速匀浆机捣研3分钟后供测定。

——测定时控制酶液溶度，样品与对照消耗碱量之差控制在1mL-2ml范围内。

5.2.1.3测定5.2.1.3.1电位滴定法（第一法）——按pH计使用说明进行仪器校正；——取两个100mL烧杯，于空白杯（A）和样品杯（B）中各加入底物溶液4.00mL和磷酸缓冲液5.00mL，再于A、B杯中各加待测酶液1.00mL，立即混匀计时，准确反应15分钟后，于B杯中立即补加95%乙醇15.00mL终止反应，取出；——在烧杯中加入一枚转子，置于电磁搅拌器上，边搅拌，边用氢氧化钠标准溶液滴定，直至pH10.3，为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。

5.2.1.3.2指示剂滴定法（第二法）——取两个100mL三角瓶，分别于空白瓶(A)和样品瓶(B)中各加入底物溶液4.00mL和磷酸缓冲液5.00mL，再于A瓶中加入95%乙醇15.00mL，于40±0.2℃水浴中预热5分钟，然后于A、B 瓶中各加待测酶液1.00mL，立即混匀计时，准确反应15分钟后，于B瓶中立即补加95%乙醇15.00mL终止反应，取出；——于空白和样品溶液中各加酚酞指示液两滴，用氢氧化钠标准溶液滴定，直至微红色并保持30秒不褪色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。

5.2.1.4计算脂肪酶制剂的酶活力按以下公式计算式中：X1——样品的酶活力，u/g或u/mL；V1——滴定样品时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；V2——滴定空白时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；c——氢氧化钠标准溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；50——0.05 mol/L氢氧化钠溶液1.00mL相对于脂肪酶50µmol;n1——样品的稀释倍数；0.05——氢氧化钠标注溶液浓度换算系数；1/15——反应时间15分钟，以1分钟计。

所得结果表示至整数。

注：测定精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值得2%。

5.2.2干燥失重5.2.2.1仪器——电热干燥箱——分析天平——称量瓶5.2.2.2分析步骤用烘干至恒重的称量瓶称取酶样约2g，精确至±0.0002g，置于103±2℃电热干燥箱中，将盖取下，侧放在称量瓶旁，烘干2小时，取出，加盖，放入干燥器重冷却至室温，称量。

5.2.2.3计算干燥失重按以下公式计算：式中：X2——样品的干燥失重，%m1——干燥前称量瓶加样品的质量，单位为克（g）m2——干燥后称量瓶加样品的质量，单位为克（g）m——称量瓶的质量，单位为克（g）所得结果表示至一位小数。

5.2.3容重取液体酶50ml，在20℃称其重量计算单位体积酶的质量，即为样品的容重，以g/ml表示。

5.2.4铅按GB/T13080-1991规定进行。

5.2.5砷按GB/T13079-1999规定进行。

5.2.6镉按GB/T13079-1999规定进行。

5.2.7黄曲霉毒素B1按GB/T17482-1991规定进行。

5.2.8大肠菌群按GB/T4789.3规定进行。

5.2.9沙门氏菌按GB/T4789.4规定进行。

6 检验规则6.1 批次以每一班次生产且经包装的、具有同样工艺条件、同一产品名称、批号、规格的产品为一个批次。

6.2取样方法从每批产品的包装中随机抽取。

用清洁适用的取样工具伸入所取样品的四分之三深处，用交叉法取出足够量的样品，将采得的样品充分混匀按四分法缩分至250g，平分装入两个清洁、干燥的具塞样品瓶活密封袋中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期等对用于微生物检验的取样，应使用无菌操作按批取样，每批产品抽样量参照下表。

成品抽样的样本量批量/桶或箱 样本量/桶或袋<50 251—500 3>500 4注：批量是指批中所含的单位商品数，单位为桶或箱。

样本量是指样本中所含的样本数量，单位为桶或袋，6.2 出厂检验6.2.1 产品应经质检部门检验合格并签发合格证方可出厂。

6.2.2 出厂检验项目为：固体剂型为感官指标、酶活力、水分及包装。

液体剂型为感官指标、酶活力、pH、容重及包装。

6.3 型式检验6.3.1 下列情况之一时，应进行型式检验：a）正常生产每半年一次；b）停产半年以上，恢复生产时。

c）原辅材料、工艺有较大变化时；d）法定质检部门提出要求时。

6.3.2 型式检验项目为第4章中的全部项目。

6.4 判定规则产品经检验若有不合格项，允许在同批产品中加倍抽样对不合格项进行复检，复检结果仍不合格，则判该批产品或该次型式检验不合格。

微生物指标不得复检。

7 标志、包装、运输、贮存、保质期7.1 标志产品的内外包装上除注明产品生产批准文号、产品名称、生产厂名、厂址、生产日期和批号等，并采用鲜明的标签和检验合格证。

7.2 包装产品包装应具备：密封、防水、避光、牢固。

7.3 运输产品在运输过程中严防日晒雨淋。

运输工具应清洁、无毒、无污染。

严禁与有毒有害有腐蚀性的物质混运。

7.4 贮存产品应贮存在清洁、阴凉、干燥、通风的室内。

严禁与有毒有害有腐蚀性物质混贮。

7.5 保质期在冷藏4-8℃条件下，液体酶保质期不少于90天；在25℃下，固体酶保质期不少于180天保质期内实测酶活不应低于标示酶活。